一种检测呕吐毒素的方法及其专用试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种检测呕吐毒素的方法及其专用试剂盒。本发明专利技术提供了保藏编号为CGMCC?No.3396的杂交瘤细胞株8C-2H-3A-6F-2B。本发明专利技术还提供了一种单克隆抗体，是由保藏编号为CGMCC?No.3396的杂交瘤细胞株8C-2H-3A-6F-2B分泌产生的。本发明专利技术提供的试剂盒包括所述单克隆抗体。本发明专利技术中将呕吐毒素进行结构改造，加入间隔臂，突出呕吐毒素特征基团，并合成了人工抗原。用所述人工抗原免疫动物，获取到了一个杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株分泌得到的单克隆抗体特异性很高。本发明专利技术的试剂盒，操作简便易行，造价低廉，具有特异性高、灵敏度高、精确度高等特点，能够现场监控且适合大量样本筛查，将在呕吐毒素的检测中发挥重要作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种检测呕吐毒素的方法及其专用试剂盒。技术背景 呕吐毒素化学名称为脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)其化学结构如权利要求1.保藏编号为CGMCCNo. 3396的呕吐毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株。2.一种单克隆抗体，是由保藏编号为CGMCC No. 3396的呕吐毒素单克隆抗体杂交瘤细 胞株分泌产生的。3.—种检测呕吐毒素的酶联免疫试剂盒，包括权利要求2所述单克隆抗体。4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒为如下1)至4)中的任意一种1)所述试剂盒包括包被有包被原的酶标板、一抗和酶标二抗；所述包被原为式(I)所 示的化合物和载体蛋白偶联得到的偶联物；所述一抗为所述单克隆抗体；2)所述试剂盒包括包被有包被原的酶标板和酶标半抗原；所述包被原为所述单克隆 抗体；所述酶标半抗原中的半抗原为式(I)所示的化合物；3)所述试剂盒包括包被有包被原的酶标板和酶标一抗；所述包被原为式(I)所示的化 合物和载体蛋白偶联得到的偶联物；所述酶标一抗中的一抗为所述单克隆抗体；4)所述试剂盒包括包被有包被原的酶标板、一抗和酶标半抗原；所述包被原为二抗；所述一抗为所述单克隆抗体；所述酶标半抗原中的半抗原为式(I)所示的化合物；5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于所述载体蛋白为鼠血清蛋白、甲状腺蛋 白、牛血清白蛋白、兔血清白蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白或血蓝蛋白；所述的二抗为羊抗 鼠二抗或羊抗兔二抗。6.如权利要求4或5所述的试剂盒，其特征在于1)中所述的酶标二抗、2)或4)中所 述的酶标半抗原、3)中所述的酶标一抗中，所用的标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯 酶。7.如权利要求3至6中任一所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括呕吐毒素 标准品溶液、底物显色液、终止液、浓缩洗涤液和样品浓缩液；所述呕吐毒素标准品溶液浓度为0-5000 μ g/L ；所述浓缩洗涤液为磷酸盐缓冲液；所述浓缩洗涤液优选为将0. 8-1. 2mL吐温20和 0. 5g叠氮钠加入IOOmL pH7. 4 0. OlM磷酸盐缓冲液得到的溶液；所述样品浓缩液为0. 8mol/L pH7. 2-7. 5的磷酸盐缓冲液。8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于所述标记酶为辣根过氧化物酶；所述底物 显色液由显色液A液和显色液B液组成；显色液A液为过氧化氢溶液或过氧化脲溶液；显色 液B液为邻苯二胺溶液或四甲基联苯胺溶液；所述终止液为硫酸溶液或盐酸溶液。9.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于所述标记酶为碱性磷酸酯酶；所述底物显色液为对硝基苯磷酸酯缓冲液；所述终止液为氢氧化钠溶液。10. 一种检测样品中呕吐毒素的方法，包括如下步骤1)将待测样品进行前处理，得到待测样本溶液；2)用权利要求3-9中任一所述试剂盒对所述待测样本溶液进行检测； 所述前处理的方法为下述a)、b)、c)中的任意一种a)所述待测样品为谷物或饲料；取待测样品溶于10%(体积百分含量)甲醇水溶液 中，超声波振荡，过滤并收集滤液，即为待测样本溶液；b)所述待测样品为啤酒；将待测样本搅拌，除去过量气体，静置得到上清液，即为待测 样本溶液；c)所述待测样品为麦芽汁；直接作为待测样本溶液。全文摘要本专利技术公开了一种检测呕吐毒素的方法及其专用试剂盒。本专利技术提供了保藏编号为CGMCC No.3396的杂交瘤细胞株8C-2H-3A-6F-2B。本专利技术还提供了一种单克隆抗体，是由保藏编号为CGMCC No.3396的杂交瘤细胞株8C-2H-3A-6F-2B分泌产生的。本专利技术提供的试剂盒包括所述单克隆抗体。本专利技术中将呕吐毒素进行结构改造，加入间隔臂，突出呕吐毒素特征基团，并合成了人工抗原。用所述人工抗原免疫动物，获取到了一个杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株分泌得到的单克隆抗体特异性很高。本专利技术的试剂盒，操作简便易行，造价低廉，具有特异性高、灵敏度高、精确度高等特点，能够现场监控且适合大量样本筛查，将在呕吐毒素的检测中发挥重要作用。文档编号C07K16/44GK102080067SQ200910237950公开日2011年6月1日 申请日期2009年11月26日 优先权日2009年11月26日专利技术者史为民, 吴小平, 徐飞, 江海洋, 潘净如, 王奇昌, 王战辉, 王照鹏 申请人:北京维德维康生物技术有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
保藏编号为ＣＧＭＣＣ　Ｎｏ．３３９６的呕吐毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：江海洋，吴小平，徐飞，王战辉，史为民，王照鹏，王奇昌，潘净如，
申请(专利权)人：北京维德维康生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11