本发明专利技术的目的在于提供一种采用高效液相色谱法测定α-酮戊二酸-L-精氨酸盐及其制剂的含量和有关物质的方法，色谱条件为色谱柱为氨基柱；流动相为甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲液＝(0-20)∶(30-70)∶(20-50)，以体积份数计；检测波长为200-220nm。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域一种测定α -酮戊二酸-L-精氨酸盐的方法，特别涉及一种采用高效液相色谱法测定α -酮戊二酸-L-精氨酸盐及其制剂的含量和有关物质的方法。
技术介绍
α -酮戊二酸-L-精氨酸盐(1 2)及其制剂是法国瑞法兰药厂研制的护肝药物。 其针对肝脏功能失调，能直接且快速提供营养、给肝细胞提供能量，迅速维护肝脏正常功能及其健康。在新药研究过程中，药品的含量及其杂质的准确测定和分析是保证其质量的重要条件。α -酮戊二酸-L-精氨酸盐易解离，因此，在对其含量、纯度、有关物质等进行分析时，遇到较大困难。现有技术仅有对α-酮戊二酸或L-精氨酸单体进行含量或有关物质测定的报道，景宏武等公开了采用分光光度法测定α-酮戊二酸(α-酮戊二酸和丙酮酸的分光光度法同时测定.同济大学学报，1986，14 ) :531-536)，但分光光度法精度差，准确性不高，而且仅能测定α-酮戊二酸的含量。毛影等公开了采用高效液相色谱法测定酮戊二酸的含量，其采用AgilentODS C18柱，以0. 5% (NH4)2HPO4-H3PO4缓冲液为流动相，流速为 110ml/min,紫外检测波长为233nm(HPLC法测定酮戊二酸的含量.中国药事，2008，22 (10) 598-599)，但该方法也仅能用于测定酮戊二酸的含量，无法对α -酮戊二酸-L-精氨酸盐进行含量检测和有关物质的检查。到日前为止，现有技术中没有对α-酮戊二酸-L-精氨酸盐的质量控制的报道。因次，现有技术需要一种对α -酮戊二酸-L-精氨酸盐及其制剂进行质量检测和纯度检查的准确度高，重现性好的方法。专利技术内容本专利技术的目的在于提供一种采用高效液相色谱法测定α-酮戊二酸-L-精氨酸盐及其制剂的含量和有关物质的方法，从而保证α -酮戊二酸-L-精氨酸盐的纯度，实现其原料和制剂的质量控制。采用本专利技术的方法，可以通过一次高效液相色谱检测，同时准确测定出α-酮戊二酸-L-精氨酸盐或其制剂中α-酮戊二酸和L-精氨酸的含量和有关物质，主药与杂质均能达到良好的分离，可方便地用于α-酮戊二酸-L-精氨酸盐的含量及其有关物质的检测。本专利技术所述的方法中，α-酮戊二酸-L-精氨酸盐的α-酮戊二酸与L-精氨酸的比例为1 1或1 2，优选1 2，即α-酮戊二酸-L-精氨酸盐(1 2)。本专利技术所述的高效液相色谱法的色谱条件为色谱柱为氨基柱；流动相为甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲液=(0-20) (30-70) (20-50)，优选 (0-10) (50-60) 40，最优选O 60 40，以体积份数计检测波长为200-220nm，优选 205nm。本专利技术的方法中，柱温为5_50°C，优选为10_40°C，最优选为室温(15-30°C )。本专利技术的方法中，流动相中的缓冲液为磷酸盐缓冲液，其pH值为2. 5-7. 0，优选 4. 0-7. 0，最优选5. 2。其中，用于PH值调节的酸或碱包括盐酸、硫酸、硫酸氢盐、枸橼酸、酒石酸、甲磺酸、二甲苯磺酸、乙二酸、甲酸、草酸、稀磷酸，醋酸，磷酸二氢盐溶液，磷酸氢二盐溶液，优选磷酸氢二钠或钾，最优选磷酸氢二钠溶液。任选地，磷酸盐溶液中还可以加入三乙胺或四氢呋喃，其中，磷酸盐溶液、四氢呋喃、三乙胺比例为980-1000 0-20 (0-5)； 优选 1000 0 0-3。具体地，本专利技术的检测方法包括以下步骤1、将α -酮戊二酸-L-精氨酸盐供试品溶解；2、溶解后的供试品溶液注入高效液相色谱仪；3、记录色谱图。其中，色谱条件为色谱柱为氨基柱；流动相为甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲液=(0-20) (30-70) ^)-50)，优选 (0-10) (50-60) 40，最优选0 60 40，以体积份数计；流速0.8-2. Oml/min,优选 0. 8-1. 5ml/min,最优选 0. 8-1. 2ml/min。 检测波长为 200-220nm，优选 205nm。以上方法中，柱温优选为室温。以上方法中，流动相中的磷酸盐缓冲液的pH值为2. 5-7. 0，优选4. 0-7. 0，最优选 5.2。其中，用于PH值调节的酸或碱包括盐酸、硫酸、硫酸氢盐、枸橼酸、酒石酸、甲磺酸、二甲苯磺酸、乙二酸、甲酸、草酸、稀磷酸，醋酸，磷酸二氢盐溶液，磷酸氢二盐溶液，优选磷酸氢二钠或钾，最优选磷酸氢二钠溶液。磷酸盐溶液中还可以加入三乙胺或四氢呋喃，其中， 磷酸盐溶液、四氢呋喃、三乙胺比例为980-1000 0-20 (0-5)；优选1000 O 0-3。本专利技术的方法中，色谱图的记录时间为100分钟以下，优选80分钟，更优选60分钟。本专利技术的测定方法中，α -酮戊二酸-L-精氨酸盐溶液的测定浓度为0. 1-3. Omg/ mL,优选 0. 5-1. 5mg/mL,更优选 1. 0mg/mLo采用本专利技术的方法，主成分的出峰时间为两主峰的保留时间为精氨酸 (3-50min,优选 5_20min，最优选 9-Hmin)，酮戊二酸(5-50min,优选 15_30min，最优选 20-25min)。本专利技术采用氨基色谱柱，能够有效地分离α -酮戊二酸-L-精氨酸盐及其有关物质，准确测定α-酮戊二酸-L-精氨酸盐的纯度；本专利技术解决了 α-酮戊二酸-L-精氨酸盐及其有关物质的分离问题，从而确保α -酮戊二酸-L-精氨酸盐及其制剂的质量可控。附图说明图1流动相为乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钠溶液，用0. 02mol/L 的磷酸氢二钠溶液调节PH值至5. 2) = 60 40时的HPLC2流动相为乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钠溶液，加入0. 2%三乙胺，用稀磷酸调PH值至5. 2) = 60 40时的HPLC3流动相为乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钠溶液，加入0. 2%三乙胺，用乙二酸调pH值至5. 2) = 60 40时的HPLC4流动相为乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钠溶液，用0. 02mol/L 的磷酸氢二钠溶液调节PH值至6. 5) = 60 40时的HPLC5流动相为乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钠溶液，用0. 02mol/L 的磷酸氢二钠溶液调节PH值至5. 5) = 50 50时的HPLC6流动相为乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0.02mol/L磷酸二氢钠溶液)=70 30 时的HPLC7流动相为甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 01mol/L磷酸二氢钠溶液，加入 0.2%三乙胺，用稀磷酸调pH值至7.0) = 15 45 40时的HPLC8流动相为甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 03mol/L磷酸二氢钠溶液，加入 0.2%三乙胺和2%四氢呋喃，用稀磷酸调pH值至4.0) = 15 50 ；35时的HPLC9流动相为甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钾溶液，加入 0.375%三乙胺和四氢呋喃，用稀磷酸调pH值至6.0) = 20 30 50时的HPLC10流动相为甲醇-乙腈-磷酸缓冲盐溶液(0. 02mol/L磷酸二氢钠溶液，用稀磷酸调PH值至6. 0) = 10 50 40时的HPLC1本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种采用高效液相色谱法测定α－酮戊二酸－Ｌ－精氨酸盐及其制剂的含量和有关物质的方法，其色谱条件为：色谱柱：氨基柱；流动相为甲醇∶乙腈∶磷酸盐缓冲液＝（０－２０）∶（３０－６０）∶（２０－５０），以体积份数计；检测波长：２００－２２０ｎｍ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：温守明，常龙，陈小平，
申请(专利权)人：北京嘉事联博医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：11
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