奈西立肽的制备方法技术

本发明专利技术属于多肽药物制备方法技术领域，特别涉及奈西立肽的制备方法。本发明专利技术奈西立肽的制备方法，包括固相多肽合成法制备奈西立肽线性肽树脂、奈西立肽线性肽树脂酸解得到奈西立肽线性肽粗品；奈西立肽线性肽粗品经氧化后得到奈西立肽粗品，奈西立肽粗品纯化得到奈西立肽纯品。其中固相多肽合成法为：在Fmoc-His(trt)-载体树脂上通过固相偶联合成法依次接入下列序列中相对应的Fmoc-保护氨基酸，得到奈西立肽线性肽树脂，接入Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)片段时仅用1或2次固相偶联合成反应。本发明专利技术方法产品纯度大于99.0％，单一杂质小于0.5％，显著提高了产品收率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于多肽药物制备方法
，特别涉及。
技术介绍
奈西立肽(Nesiritide)是人体B型尿钠排泄肽，奈西立肽与血管平滑肌及内皮细胞的鸟苷酸环化酶受体结合，细胞内的cGMP浓度增加，平滑肌细胞松弛。在静脉、动脉的扩张作用中，cGMP扮演第二信使的角色。奈西立肽能使用内皮缩血管肽或a_肾上腺素能的促效剂去氧肾上腺素制造的离体人动脉和静脉条收缩模型舒张。在临床试验中，奈西立肽能使心衰病人的肺毛细血管楔嵌压(PCWP)降低，呈剂量依赖性。在动物试验中，奈西立肽对心脏收缩能力或心脏电生理如房室结传导等无影响。给充血性心衰的病人静脉注射奈西立肽后，在血浆中显示出二相性的分布。奈西立肽的半衰期t1/2大约为18分钟，AUC大约为27。平均初始消除相估计大约为2分钟。在这些病人中， 奈西立肽中心室的平均分布体积(V估计是0. 073L/kg，平均稳态分布体积(Vss)是0. 19L/ kg，平均清除率(CL)大约是9. 2mL/min/kgo在稳定状态，注射剂量范围从0. 01 0. 03ug/ kg/min的奈西立肽后，血浆奈西立肽的水平从内源性的基础水平增加大约3 6倍。奈西立肽具有以下的结构权利要求1.，包括固相多肽合成法制备奈西立肽线性肽树脂、奈西立肽线性肽树脂酸解得到奈西立肽线性肽粗品；奈西立肽线性肽粗品经氧化后得到奈西立肽粗品，奈西立肽粗品纯化得到奈西立肽纯品；其中固相多肽合成法为在Fmoc-His (trt)_载体树脂上通过固相偶联合成法依次接入下列序列中相对应的Fmoc-保护氨基酸，得到奈西立肽线性肽树脂R1-Ser (tBu) -Pro-Lys (Boc) -Met-Val-Gln (R2) -Gly-Ser (tBu)-Gly-Cys (R3) -Phe-Gly-Arg (pbf) -Lys (Boc) —Met—Asp (OtBu)-Arg (pbf) -Ile-X-Gly-Leu-Gly-Cys (R3) -Lys (Boc) -Val-Leu-Arg (pbf) -Arg (pbf) -Hi s (trt)-树脂其中，X 为 Ser (tBu) -Ser (tBu) -Ser (tBu) -Ser (tBu)，R1 为 Fmoc、Boc 或 H，Ii2 为 Trt 或 H，R3为Trt或Acm，接入X片段时仅用1或2次固相偶联合成反应。2.根据权利要求1所述的，其特征在于接入X片段时所使用的保护氨基酸为 Fmoc-Ser (tBu) -OH、Fmoc-Ser (tBu) -Ser (tBu) -Ser (tBu) -OH、Fmoc -Ser (tBu) -Ser (tBu) -Ser (tBu) -Ser (tBu) -OH、Fmoc-Ser (tBu) -Ser (ΨΜθ，Mepro) -OH、 Fmoc-Ser (tBu) -Ser (tBu) -OH 中的至少一种。3.根据权利要求1或2所述的，其特征在于所述载体树脂的取代值为 0. 5 1. 5mmol/go4.根据权利要求3所述的，其特征在于所述载体树脂为 Trityl-Cl类型树脂或羟基类型树脂。5.根据权利要求4所述的，其特征在于=Trityl-Cl类型树脂为 Trityl-Cl 树脂、4_Methyltrityl_Cl 树脂、4-Methoxytrityl-Cl 树脂或 2-C1 Trity-Cl 树脂；羟基类型树脂为Wang树脂或对羟甲基苯氧甲基聚苯乙烯树脂。6.根据权利要求5所述的，其特征在于当载体树脂为三苯甲基氯树脂时，Fmoc-His (trt) -OH与载体树脂的偶联方法为=Fmoc-His (trt) -OH的羧基与树脂中的Cl-代烷在碱作用下发生酯化反应而接入保护氨基酸。7.根据权利要求6所述的，其特征在于所述的碱选自N.N- 二异丙基乙基胺、三乙胺、吡啶中的至少一种；碱的摩尔用量为保护氨基酸摩尔数的1.5 3倍。8.根据权利要求6所述的，其特征在于酯化反应时间为1 6小时，优选为3小时。9.根据权利要求1 8任一项所述的，其特征在于所述保护氨基酸种类分别为=R1-Ser (tBu)-OH、Fmoc-Gln (R2)-OH、Fmoc-Cys (R3)-0H、 Fmoc-Arg (pbf)-OH、Fmoc-Asp (TBu)-OH、Fmoc-Gly-0H> Fmoc-Ile-0H> Fmoc-Leu-OH、 Fmoc-Lys(Boc)-OH、 Fmoc-Met-OH、 Fmoc-Phe-OH、 Fmoc-Pro-OH、 Fmoc-Val> Fmoc-Ser (TBu) -OH、Fmoc-Ser (tBu) -Ser (tBu) -Ser (tBu) -OH、Fmoc-Ser (tBu) -Ser (tB u) -Ser (tBu) -Ser (tBu) -OH、Fmoc-Ser (tBu) -Ser (tBu) -OH、Fmoc-Ser (tBu) -Ser (ΨΜθ, Mepro) -OH ；其中，R1 为 Fmoc> Boc, R2 为 Trt 或 H，R3 为 Trt 或 Acm010.根据权利要求1 8任一项所述的，其特征在于奈西立肽线性肽树脂经酸解同时脱去树脂及侧链保护基得到奈西立肽线性肽粗品Ser-Pro-Lys-Met-Val-Gln-Gly-Ser-Gly-Cys-Phe-Gly-Arg-Lys-Met-Asp-Arg-Ile-Ser-Ser-Ser-Ser-Gly-Ieu-Gly-Cys-Lys-Val-Leu-Arg-Arg-His-OH酸解剂为三氟醋酸、1，2_乙二硫醇水混合溶剂，混合溶剂的配比为TFA的体积比为 80-95%, EDT的体积比为1 10%，余量为水。全文摘要本专利技术属于多肽药物制备方法
，特别涉及。本专利技术，包括固相多肽合成法制备奈西立肽线性肽树脂、奈西立肽线性肽树脂酸解得到奈西立肽线性肽粗品；奈西立肽线性肽粗品经氧化后得到奈西立肽粗品，奈西立肽粗品纯化得到奈西立肽纯品。其中固相多肽合成法为在Fmoc-His(trt)-载体树脂上通过固相偶联合成法依次接入下列序列中相对应的Fmoc-保护氨基酸，得到奈西立肽线性肽树脂，接入Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)片段时仅用1或2次固相偶联合成反应。本专利技术方法产品纯度大于99.0％，单一杂质小于0.5％，显著提高了产品收率。文档编号C07K1/04GK102250235SQ20111017115公开日2011年11月23日 申请日期2011年6月23日 优先权日2011年6月23日专利技术者文永均, 曾德志, 王晓莉, 谢期林, 郭德文 申请人:成都圣诺科技发展有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．奈西立肽的制备方法，包括固相多肽合成法制备奈西立肽线性肽树脂、奈西立肽线性肽树脂酸解得到奈西立肽线性肽粗品；奈西立肽线性肽粗品经氧化后得到奈西立肽粗品，奈西立肽粗品纯化得到奈西立肽纯品；其中固相多肽合成法为：在Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ（ｔｒｔ）－载体树脂上通过固相偶联合成法依次接入下列序列中相对应的Ｆｍｏｃ－保护氨基酸，得到奈西立肽线性肽树脂：Ｒ１－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｐｒｏ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｇｌｎ（Ｒ２）－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｇｌｙ－Ｃｙｓ（Ｒ３）－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ（ｐｂｆ）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｍｅｔ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ａｒｇ（ｐｂｆ）－Ｉｌｅ－Ｘ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ－Ｃｙｓ（Ｒ３）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ（ｐｂｆ）－Ａｒｇ（ｐｂｆ）－Ｈｉ　ｓ（ｔｒｔ）－树脂其中，Ｘ为Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ），Ｒ１为Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ或Ｈ，Ｒ２为Ｔｒｔ或Ｈ，Ｒ３为Ｔｒｔ或Ａｃｍ，接入Ｘ片段时仅用１或２次固相偶联合成反应。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：文永均，谢期林，王晓莉，郭德文，曾德志，
申请(专利权)人：成都圣诺科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：90