一种最佳酶制剂应用体系(OEATM)，包括两方面的内容：有效酶活评估和有效营养值评估。有效酶活评估包括6个指标：标示酶活、pH阈值、过胃酸测定、过蛋白酶测定、耐高温测定、三个月酶活存留率；有效营养值评估包括4个指标：饲料粘度测定、饲料能值测定、饲料蛋白质消化率测定、动物生长表现。本发明专利技术以新的思路和方法解决了饲用酶制剂应用过程中出现的问题。经试验验证，OEATM复合酶针对性更强、成本更经济。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于饲料添加剂领域。特别涉及饲用复合酶制剂的定量和个性化应用。
技术介绍
酶制剂在饲料中添加和应用是生物技术在饲料工业中应用最受关注的领域。从20 世纪50年代酶制剂开始在饲料中添加，到90年代饲用酶制剂的普遍应用，酶制剂在畜禽养殖业中的作用日益突出。同时，调查显示全球所有单胃动物饲料中只有10%添加了酶制剂， 并且猪料中酶制剂的使用量远低于禽料中酶制剂的添加量。现有的研究资料显示，影响饲用酶快速发展的原因主要有两个一是单项酶制剂评估体系的标准化；二是复合酶制剂应用体系的建立。目前，关于饲用酶的研究报道很多，但大多集中在饲用酶作用机理和动物饲养效果的研究上，很少涉及饲用酶的活性评估，仅有的报道也是着重于不同测定方法对饲用酶活性的影响，而对于影响其催化活性和稳定性(有效酶活，Effective Activity)的研究资料很少。陆文清和李德发000 认为饲用酶的品质评定和选择涉及很多因素，远比普通工业用酶复杂。对于饲用酶，由于饲料原料、饲料加工和动物消化道PH值的多样性，使得酶制剂的评估和选择成为一个复杂的工程。Sh印py (2004)认为饲用酶发展缓慢的原因是因为饲用酶在使用过程中受到如下薄弱环节的制约——标准化、公开有效的质量控制体系、良好的热稳定性、更加准确的液体应用系统，较为明确的技术信息公示，以及使生产性能反应更加一致的产品。欧盟最先颁布了饲料中禁止使用某些抗生素作为促生长剂的规定，这个决定迫使饲料生产企业不得不开始寻找抗生素的替代品，而在饲料中添加酶制剂成为各饲料企业的首选。但事实并未象人们所期望的那样，酶制剂在单胃动物饲料特别是在猪饲料中的使用并不广泛。主要原因可能是在添加酶制剂以后，原来的饲料数据库和动物营养需要参数并不适合实际情况(冯定远和沈水宝，2005)，从而导致酶制剂添加效果不明显或添加成本过高。他们认为饲料在添加酶制剂后，现有的饲料原料数据库甚至饲养标准可能不完全适合使用酶制剂的日粮配方设计。因而如何确定添加特定酶制剂后饲料原料的有效营养值 (Effective Nutrient Value)成为解决酶制剂有效利用的限制步骤。
技术实现思路
一种最佳酶制剂应用体系(OEATM)，其特征在于，包括两方面的内容有效酶活评估和有效营养值评估。有效酶活评估包括6个指标标示酶活、pH阈值、过胃酸测定、过蛋白酶测定、耐高温测定、三个月酶活存留率；有效营养值评估包括4个指标饲料粘度测定、饲料能值测定、 饲料蛋白质消化率测定、动物生长表现。标示酶活的测定方法为取一定量酶样品溶液，用pH 5.5的0. lmol/L的 NaAc-HAc缓冲溶液溶解后定容至IOOmL,然后根据酶活将样品溶液稀释适当倍数，使稀释好的待测酶液中酶活力控制在0. 04-0. 08U/mL之间；再将稀释好的酶液和配制好的底物溶液在37°C水浴30min后，加DNS试剂终止酶的反应，沸水浴5min，冷却定容；标准空白调零， 用分光光度计在MOnm下测定吸光值，最后根据吸光值计算酶活。pH阈值测定方法为将单酶用不同PH值缓冲液溶解，测定其活性，测定酶活结果与原始酶活相比，得到其在不同PH值条件下的酶活表现(％ )；不同PH值缓冲液梯度设置为2. 0,2. 5,3. 0,3. 5,4. 0,4. 5,5. 0,5. 5,6. 0,6. 5,7. 0 ；也可根据不同动物消化道不同消化位点的消化液PH值而设定。过胃酸测定方法为将单酶用不同PH值缓冲液在37°C条件下处理1.紐或池后测定其活性，测定酶活结果与标示酶活相比，得到其酶活性存留率(％)；不同PH值缓冲液梯度设置为2. 0,2. 5,3. 0,3. 5 ；以此可得到胃中酸性环境对酶样品活性的破坏程度(％ )。过蛋白酶测定方法为配制单酶样品溶液，取等量的酶液和胃蛋白酶液及胰酶溶液在37°c条件下水浴2_4h，之后将经过蛋白酶处理的单酶样品溶液按照单项酶制剂酶活测定方法测定其酶活，测定酶活结果与标示酶活相比，得到其酶活性存留率(％ )，以此确定外源酶制剂对蛋白酶的耐受性。耐高温测定方法为测定酶样品的水分含量，根据酶样品中水分含量通过加蒸馏水调节待测酶样品中的水分至16%，然后在烘箱中放置一定时间后取出冷却备用，烘箱温度设置为65°C、75°C、85°C、9(TC、95°C等5个温度梯度；通过单酶酶活测定方法测定酶活力，测定不同温度处理后酶样品活性与标示酶活相比，得到其酶活存留率(％ )，以此可评估酶样品的耐高温性(％)。三个月酶活存留率测定方法为酶制剂从生产之日起开始计算，常温贮存三个月后再取样，按照酶制剂酶活测定方法测定酶活，结果与标示酶活相比，得到其三个月常温贮存后的酶活存留率(％)。饲料粘度测定和饲料能值测定方法为准确称取1. 25g粉碎饲料样品于三角瓶中，所述粉碎饲料过Imm筛，分别加入不同梯度外源酶制剂后，再加入lmg/mL新鲜胃蛋白酶盐酸溶液，所述胃蛋白酶盐酸溶液为0. IN并且pH = 2. 0，在40°C恒温水浴锅中振荡，消化时间为池；胃消化阶段结束后，向溶液中加入ImL新鲜胰酶溶液，所述胰酶溶液为5mg/mL， 调节溶液PH值为6. 5 (1M NaOH溶液)，于40°C恒温水浴中振荡，消化时间为4h ；同时以未加酶饲料为对照组，进行同样的消化程序；体外消化结束后，将试管取出于3000g离心15min， 取上清液测定其粘度；消化残渣在烘箱中烘至恒重，测定其能量；饲料粘度变化(％ )=加酶组食糜粘度/对照组食糜粘度*100 ；饲料能值变化(％ )=加酶组消化能/对照组消化能 *100。基于饲用酶制剂评估和应用中的问题，我们提出了最佳酶制剂应用体系(0ΕΑ ) 的概念。该体系的核心有两点通过对有效酶活和加酶饲粮有效营养值的评估，达到酶制剂合理配比和定量添加的目的。0ΕΑ 体系综合评估全球单酶的有效酶活，针对饲料配方、饲料加工过程和动物消化生理特点进行有效营养值的评估，提供定量的个性化复合酶制剂方案。0ΕΑ 体系可以解构为六大方面1. 0ΕΑ 是“最佳酶制剂应用体系”的英文缩写，即Optimum Enzyme Application, 是饲用复合酶定量的、个性化、动态方案；2. 0ΕΑ 是根据目标动物消化生理特点、饲料加工工艺和饲料中NSP种类与含量制定的定量的、个性化、动态方案；3. 0ΕΑ 是在四个数据库基础上制定的定量的、个性化、动态方案四个数据库分别是有效酶活数据库、抗营养因子数据库、产品试验数据库、同类产品数据库；4. 0ΕΑ 包括两方面的内容有效酶活评估和有效营养值评估；5.有效酶活评估包括6个指标标示酶活、pH阈值、过胃酸测定、过蛋白酶测定、耐高温测定、三个月酶活存留；有效营养值评估包括4个指标饲料粘度测定、饲料能值测定、饲料蛋白质消化率测定、动物生长表现；6. 0ΕΑ 是为解决复合酶应用中出现的六大问题而制定的定量的个性化方案，即 有效酶活评估不清晰、有效营养值模糊、针对性不强、添加不定量、效果不明显、成本不经济。附图说明图1为pH值对木聚糖酶活性的影响；图2为饲料调质模拟条件对木聚糖酶的影响；图3为胃蛋白酶/胰酶对木聚糖酶活性的影响；图4为木聚糖酶对小麦和豆粕粘度的影响。具体实施例方式本专利技术主要有两个内容有效酶活评估、有效营养值评本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种最佳酶制剂应用体系（ＯＥＡＴＭ），其特征在于，包括两方面的内容：有效酶活评估和有效营养值评估。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：王海彦，唐茂妍，孙鸣，陈旭东，徐玲，王纪亭，
申请(专利权)人：北京华美源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：11
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