【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及具有长期稳定性的用于热启动PCR的干燥组合物及其应用。更确切地 说，本专利技术涉及通过向常规的PCR组合物中加入所需量的多元醇、无机焦磷酸盐(以下称为 “PPi”)和焦磷酸酶(以下称为“PPase”)，使得用于热启动PCR的干燥组合物保持稳定并 具有长期耐贮藏性(保质期)。
技术介绍
PCR的特异性由与靶基因序列结合的引物的高严谨度决定。在预变性前将基因扩 增所必需的所有成分在室温下进行混合。因而，在这一混合过程中发生了低严谨度的引发 作用(priming)。因为聚合酶在低温下保持其酶活性，所以当发生引发作用时，可能会产生 PCR产物。因此，除靶DNA序列的复杂性以及低反应温度之外，这一低严谨度的引发作用是 非特异性扩增的另一个关键原因。当PCR循环重复进行时，非特异性扩增会消耗浓度有限 的引物和其他成分，这表明非特异性反应本身起到类似于竞争性抑制剂的作用。非特异性 扩增尤其在低拷贝数靶DNA的检测、低浓度DNA样品的扩增以及同时使用不同引物的多重 PCR方面造成了严重的问题。为了努力克服PCR的所述问题，已经开发了 “热启动PCR(hot-sta...
【技术保护点】
一种用于热启动ＰＣＲ的干燥组合物，所述干燥组合物包含反应缓冲液、ＭｇＣｌ↓［２］、４种脱氧核苷三磷酸、ＤＮＡ聚合酶、焦磷酸盐和焦磷酸酶。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】KR 2007-10-29 10-2007-0109055一种用于热启动PCR的干燥组合物，所述干燥组合物包含反应缓冲液、MgCl2、4种脱氧核苷三磷酸、DNA聚合酶、焦磷酸盐和焦磷酸酶。2.如权利要求1所述的用于热启动PCR的干燥组合物，其中，所述组合物进一步包含引 物组或探针。3.如权利要求1所述的用于热启动PCR的干燥组合物，其中，所述组合物进一步包含结 合至DNA的荧光染料。4.如权利要求3所述的用于热启动PCR的干燥组合物，其中，所述荧光染料选自于由 SyBr Green、EtBr 和 HRdye 所组成的组。5.如权利要求1所述的用于热启动PCR的干燥组合物，其中，所述组合物进一步包含模 板核酸。6.如权利要求1所述的用于热启动PCR的干燥组合物，其中，所述焦磷酸盐以0.3-5mM 的浓度包含于最终反应溶液中，所述焦磷酸酶以高于30mU直至200mU的浓度包含于20 u 1 的最终反应溶液中。7.如权利要求6所述的用于热启动PCR的干燥组合物，其中，所述焦磷酸盐以 0. 95-3. OmM的浓度包含于所述最终反应溶液中。8.如权利要求6所述的用于热启动PCR的干燥组合物，其中，所述焦磷酸酶以 50-100mU的浓度包含于20iU的所述最终反应溶液中。9.如权利要求1所述的用于热启动PCR的干燥组合物，其中，所述DNA聚合酶为选 自于由下列物质所组成的组中的一种或多种聚合酶具有5' -3'外切核酸酶活性的聚 合酶、具有3' -5'外切核酸酶活性的聚合酶、以及不具有5' -3'外切核酸酶活性和 3' -5'外切核酸酶活性的聚合酶。10.如权利要求1所述的用于热启动PCR的干燥组合物，其中，所述组合物进一步包含 对于核酸不具有反应性的染料。11.如权利要求10所述的用于热启动PCR的干燥组合物，其中，所述染料为选自于由罗 丹明、tamra、lax、溴酚蓝、二甲苯青、溴甲酚红和甲酚红所组成的组中的一种或多种物质。12.如权利要求1所述的用于热启动PCR的干燥组合物，其中，所述组合物进一步包含 选自于由多元醇、明胶、牛血清白蛋白(BSA)、Thesit和PET-8000所组成的组中的一种或多 种物质。13.如权利要求1所述的用于热启动PCR的干燥组合物，其中，所述组合物用于多重 PCR、实时PCR或实时定量PCR。14.一种用于热启动PCR的干燥组合物的制备方法，所述方法包括下述步骤在反应管 中制备反应混合物，所述反应混合物包...
【专利技术属性】
技术研发人员：金成烈，金铉培，朴海埻，朴翰悟，
申请(专利权)人：株式会社百奥尼，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。