本发明专利技术公开了一种铬-IgE螯合物及其制备方法和应用，该铬-IgE螯合物是铬离子与IgE通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。本发明专利技术建立了铬-IgE螯合物的定性定量检测方法，以便定量检测铬-IgE螯合物在评价一个地区铬污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群血清中铬-IgE螯合物可以间接反映这个地区人群受铬污染的情况，从而间接反映这个地区铬污染程度。本发明专利技术建立的铬-IgE螯合物定量检测方法其准确度大大提高，并且使检测的重复性得到大大提高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及检测领域，更具体地说，涉及一种铬-IgE螯合物及其制备方法和应 用。
技术介绍
IgE是1966年发现的一类Ig，分子量为188kD，主要分布于这些部位的黏膜组织、 外分泌液及血液内，以单体形式存在。在个体发育中合成较晚。e链有4个CH(Ce1~ Ce4)，无铰链区，含有较多的半胱氨酸和甲硫氨酸。对热敏感，56°C、30分钟可使IgE丧失 生物学活性。IgE主要由鼻咽部、扁桃体、支气管、胃肠等粘膜固有层的浆细胞产生，这些部 位常是变应原入侵和I型变态反应发生的场所。IgE为亲细胞抗体，Ce2和Ce3功能区 可与嗜碱性粒细胞、肥大细胞膜上高亲和力FceRI结合。变应原再次进入机体与已固定 在嗜碱性粒细胞、肥大细胞上IgE结合，可引起I型变态反应。寄生虫感染或过敏反应发作 时，局部的外分泌液和血清中IgE水平都明显升高。 络（chromium，Cr)是元素周期表VI族中的一种过渡金属，其质地坚硬，表面具有 光泽，有较高的熔点，在工业生产中具有重大的经济价值，一个世纪以来被广泛应用，每年 全球铬生产量高达107吨，因而铬是一种名副其实的重要金属污染物。目前，铬广泛应用于 电镀、鞣革、颜料、油漆、合金、印染等各个方面，与人们的生活息息相关，但是同样也对人 类的身体健康产生巨大影响。在美国，Cr与Hg、Cd、Pb被称为四大环境污染物。据统计，每 年有几十个亿的民众都在饮用铬污染的水源，而在加利福利亚有高达30%的水资源都已经 被铬污染，因而铬污染严重影响着人们的身体健康。自然界中铬主要以三价和六价的形式存在，而一般认为，三价铬（Cr3+)是人类所 需的微量元素，而六价铬（Cr6+)才是明显的毒性物质。由于六价铬易通过细胞膜进入细 胞，而且可以通过一系列反应，产生强烈的细胞毒性及基因毒性，因而普遍认为六价铬的毒 性高于三价络，达10-100倍。学者认为当水中的六价铬含量超过0.05mg/L即是有毒的。六 价铬可以通过皮肤接触、食物摄入、饮用水饮入、呼吸道吸入等途径进入人体，对于职业性 暴露人群主要是通过呼吸道吸入六价铬灰尘，而对于普通人群则是通过饮入污染水源、食 入被污染的食物、吸入等方式摄入六价铬。六价铬进入体内后，可以引发氧化应激、染色体 畸变、细胞凋亡、多种DNA损伤（包括单链断裂、DNA-蛋白质交联、DNA-氨基酸交联、Cr-DNA 配合物形成等），从而造成机体多处组织、器官、系统损伤。不仅如此，六价铬还被认为是一 种强有力的致癌物，早在1990年国际癌症研究组织。 铬与多种蛋白质之间关系密切，可以与多种蛋白质结合，抑制多种蛋白酶的活性。 随着对铬毒性研究的深入，人们逐渐认识到铬与蛋白的相互作用在其致毒过程中扮演着重 要的角色，被认为是了解铬的毒性机理的关键所在，因此，对铬和蛋白质相互作用的研究就 显得愈发重要。而现在关于铬与蛋白质作用的机理仅是冰山一角，还有很多蛋白质与铬之 间的关系还不清楚，因而加强对于铬与蛋白质之间的关系至关重要。
技术实现思路
针对铬污染严重的问题，本专利技术的目的在于提供一种铬-IgE螯合物及其制备方 法，并建立铬-IgE螯合物的定性、定量检测方法，以便定量检测铬-IgE螯合物在评价一个 地区铬污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群血清中铬-IgE螯合物可以间接反映 这个地区人群受铬污染的情况，从而间接反映这个地区铬污染程度。 本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种铬-IgE螯合物，铬离子与 IgE通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。 本专利技术还提供一种上述的铬-IgE螯合物的制备方法，包括以下步骤：A)铬与IgE的螯合反应：在提纯源于人体的IgE或按照生物学方法重组的IgE中 加入铬离子进行螯合反应，得到反应溶液； B)纯化铬-IgE螯合物的提取：采用免疫亲和层析法，去除反应溶液中未反应的 IgE以及多余的铬离子，即得铬-IgE螯合物。 其中，体外合成法中所述步骤B)具体如下： (1)溶解样品：向经过步骤A)得到的反应溶液中加入生理盐水使铬-IgE螯合物 复溶； (2)平衡层析柱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与IgE特 异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱； (3)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤（1)中样品，然后上柱，IgE与 填料特异性结合； (4)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0. 05-0.lmol/L的磷 酸盐溶液进行洗脱，得到洗脱液I; (5)收集：收集洗脱液I; (6)透析：将步骤（5)中的收集的洗脱液，装透析袋，用ddH20透析除盐，换水三次 后，4°C透析过夜，收集样本；(7)平衡层析柱：采用新的层析柱，用稀释缓冲液冲洗管路，在该层析柱中装入能 与铬特异性结合的填料，装柱后再用稀释缓冲液平衡层析柱； (8)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤（6)中样本，然后上柱； (9)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0. 5-1.Omol/L的磷 酸盐溶液进行洗脱，得到洗脱液II; (10)收集：收集洗脱液II; (11)透析：将步骤（10)中的收集的洗脱液，装透析袋，用ddH20透析除盐，换水三 次后，4°C透析过夜，收集样本，即得铬-IgE螯合物。 其中，上述铬-IgE螯合物的制备方法，还包括步骤C):对铬-IgE螯合物的鉴定； 其中，步骤C)中具体如下：(1)制备胶床：以琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶中的一种作为介质制备胶床； (2)加样：取步骤B)中提取纯化得到的铬-IgE螯合物，加入稀释缓冲液，并混匀， 然后加样于样品槽中； (3)电泳：连接电泳板，进行电泳； (4)检测：在胶床上找出含铬的蛋白条带，将该蛋白条带取出并溶解，然后再采用 ELISA法或ICP-MS法或AAS法检测是否含有铬以及检测铬的含量。 本专利技术还提供一种如上述的铬-IgE螯合物在制备检测人体内铬-IgE螯合物的试 剂或试剂盒中的应用。 本专利技术还提供一种至少包括如上述的铬-IgE螯合物作为标准品的试剂盒。 优选地，该试剂盒中还包括包被液，该包被液含有捕获IgE的物质或捕获铬的物 质。 本专利技术还提供一种定量检测铬-IgE螯合物的方法，以已知含量的上述的铬-IgE 螯合物作为标准品，采用以下方法之一对样品进行检测：酶联免疫法、酶联免疫与原子吸收 光谱结合法、酶联免疫与电感耦合等离子体质谱结合法、提纯铬-IgE螯合物与酶联免疫结 合法、提纯铬-IgE螯合物与原子吸收光谱结合法、提纯铬-IgE螯合物与电感耦合等离子体 质谱结合法、电泳与酶联免疫或原子吸收光谱或电感耦合等离子体质谱结合法。 实施本专利技术的铬-IgE螯合物及其制备方法和应用，具有以下有益效果： 1.本专利技术首次体外合成铬-IgE螯合物； 2.本专利技术首次提出铬-IgE螯合物可用于制备检测血样中铬-IgE螯合物的试剂或 试剂盒中的应用。 3.本专利技术建立了铬-IgE螯合物的定性定量检测方法，以便定量检测铬-IgE螯合 物在评价一个地区铬污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群血清中铬-IgE螯合物 可以间接反映这个地区人群受铬污染的情况，从而间接反映这个地区铬污染程度。本专利技术 建立的铬-IgE螯合物定量检测方法其准确度大本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种铬‑IgE螯合物，其特征在于，铬离子与IgE通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张积仁，阳帆，董欣敏，吴婧，蔡睿，孙遥，赵乙木，
申请(专利权)人：上海拜豪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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