一种从猪血红细胞中提取超氧化物歧化酶SOD的方法技术

一种从猪血红细胞中提取超氧化物歧化酶SOD的方法，该方法采用抗凝处理，防止血液凝固和血细胞破裂。采用胶体磨破碎和低温溶胀使血细胞内溶物最大程度的释放得到溶血液。溶血液经过两次热变除杂去血红蛋白和大量杂蛋白得到SOD粗酶液，SOD粗酶液再经过超滤浓缩、梯度洗脱、透析除盐和冷冻干燥得到SOD产品。本发明专利技术不仅操作简单，容易掌握，而且可有效提高产品质量，降低生产成本，缩短生产周期，提高生产效率，适用于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种超氧化物歧化酶的提取方法，特别涉及一种从猪血红细胞中提取超氧化物歧化酶SOD的方法。
技术介绍
超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,以下简称SOD)是一种能够清除机体内过量自由基的金属酶，已被发现广泛存在于人和动物体内的多种组织中。SOD具有抗衰老、 防止色素沉积、消炎和保护机体免疫功能的作用。目前已经被广泛应用于食品、保健品、化妆品和农业等方面。现有的从血细胞中提取SOD的方法在前期的取血、抗凝、生理盐水洗涤和低温溶血等步骤上大同小异。后期的杂蛋白变性大多采用氯仿和乙醇法去除血红蛋白，然后清液用丙酮沉淀，沉淀物上色谱柱(S^hadex G-100或DE-32或金属螯合层析法)，其缺点在于 (1)用氯仿和乙醇去除血红蛋白成本较高，同时氯仿还是有毒试剂，试剂残留的安全性没有保证；(2)在用氯仿乙醇法去除血红蛋白的过程中，由于SOD与血红蛋白的共沉作用，造成 SOD得率降低；C3)由于色谱柱体积的限制，纯化处理量小，设备成本投入高，不利于大规模化生产。专利技术目的本专利技术的目的在于提供一种规模化生产SOD的方法，该法工艺简单，提取的SOD纯度和本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种从猪血红细胞中提取铜锌超氧化物歧化酶ＳＯＤ的方法，其特征在于：依照下列步骤完成：①收集新鲜健康的猪血；②将猪血进行抗凝处理；③将抗凝后的猪血进行高速离心处理得到血球液；④将血球液进行溶血破碎；血球液先经过胶体磨破碎两次，然后加入２倍体积的蒸馏水或者高纯水在０℃－４℃溶胀过夜，得到溶血液；⑤将上述溶血液通过两次热变除杂过程得到ＳＯＤ粗酶液；具体方法是：溶血液中先加入食品级钠盐使饱和度为４％－１２％，然后分别加入铜盐和锌盐，使其浓度达到０．５ｍｍｏｌ／Ｌ－３ｍｍｏｌ／Ｌ，在５０℃－７０℃恒温设备中保温１０ｍｉｎ－３０ｍｉｎ，冷却，然后用三足式分离机分离２０ｍｉｎ－３０ｍｉｎ，取上清液，再用...

【技术特征摘要】
1.一种从猪血红细胞中提取铜锌超氧化物歧化酶SOD的方法，其特征在于依照下列步骤完成①收集新鲜健康的猪血；②将猪血进行抗凝处理；③将抗凝后的猪血进行高速离心处理得到血球液；④将血球液进行溶血破碎；血球液先经过胶体磨破碎两次，然后加入2倍体积的蒸馏水或者高纯水在0°C -4°C溶胀过夜，得到溶血液；⑤将上述溶血液通过两次热变除杂过程得到SOD粗酶液；具体方法是溶血液中先加入食品级钠盐使饱和度为4% -12%，然后分别加入铜盐和锌盐，使其浓度达到0. 5mmol/ L-3mmol/L，在50°C _70°C恒温设备中保温10min-30min，冷却，然后用三足式分离机分离20min-30min，取上清液，再用管式固液分离机分离，去除沉淀，收集上清液；上清液中加入铜盐和锌盐，使其浓度达到lmm0l/L-6mm0l/L，在60°C _70°C下恒温设备中保温 10min-30min，冷却，然后用三足式分离机分离20-30min，取上清液，再用管式固液分离机分离，去除沉淀，收集上清液；⑥将上述步骤⑤得到的上清液进行超滤浓缩得到浓缩液；⑦将浓缩液进行梯度洗脱；具体方法是对浓缩液进行多级的磷酸盐缓冲液梯度洗脱，磷酸盐缓冲液的初级浓度为lmmol/L-3mm0l/L，最终浓度为50mmOl/L-70mmOl/L，每两级的浓度梯度倍数为2-5倍，上清液每级浓度梯度处理前先降温至1°C _5°C，然后加入1-2 倍的冷丙酮，迅速在2000r/min-4000r/min下冷冻离心3_10min，取沉淀，上清液用作丙酮回收；沉淀用3-15倍的磷酸盐缓冲液溶解，迅速在4000r/min-6000r/min下冷冻离心 5...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏继华，张立娟，宋古全，沈峰，王长维，
申请(专利权)人：黑龙江宝迪肉类食品有限公司，
类型：发明
国别省市：23