一种包裹有铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)聚电解质微囊的制备方法，是基于层层自组装原理，采用阴离子聚电解质聚苯乙烯磺酸钠[poly(sodium styrene sulfonate)，PSS]和阳离子聚电解质聚烯丙基胺盐酸盐[poly(allyamine hydrochloride)，PAH]作为聚电解质微囊组装材料，将具有抗氧化功能的Cu/Zn-SOD包裹于微囊之中，该微囊可以有效阻隔胰蛋白酶等其他水解酶类与Cu/Zn-SOD接触，但是又不影响溶液中离子在膜内外的进出，Cu/Zn-SOD可以与体系中超氧阴离子自由基接触，进而清除超氧阴离子自由基，在保证Cu/Zn-SOD生物活性的同时，有效防止了水解酶类对Cu/Zn-SOD的水解作用，其生物活性保存效果优于天然Cu/Zn-SOD，且无需改变酶分子表面结构、操作简单、条件温和、可控性强。
【技术实现步骤摘要】
:本专利技术涉及包裹有Cu/Zn-SOD的聚电解质微囊的制作方法。
技术介绍
:作为生物体内重要的自由基清除剂，在抗氧化和防止机体衰老等方面具有重要应用价值，SOD自从被发现以来便受到国内外学者的青睐，对于SOD性质的研究也越来越深入，但是有一个关键问题一直困扰着研究者们，即如何更长久保持SOD生物活性的问题已经成为了人们研究的重要课题。另外，层层自组装技术(LBL)在制膜方面具有独特的优势，在医药学领域中，利用此技术可以制备纳米级微囊，例如通过聚电解质包埋药物，在保护药物疗效的同时，可以有效实现药物的缓释。目前，国内外还没有关于通过制备聚电解质微囊来包裹Cu/Zn-SOD，从而保护其生物活性方面的详细报道。
技术实现思路
:专利技术目的:基于保护Cu/Zn-SOD活性的目的，利用LBL技术可以在生物大分子表面包裹聚电解质薄膜的优势，制备纳米级聚电解质微囊，包裹Cu/Zn-SOD，从而防止其被其他水解蛋白水解，进而保护其生物活性。本专利技术的技术方案:专利技术原理如图1所示:A为碳酸钙与Cu/Zn-SOD共聚物，B为阳离子聚电解质聚烯丙基胺盐酸盐(PAH)包裹的共聚物，C为阴离子聚电解质聚苯乙烯磺酸钠(PSS)包裹的共聚物，D为PAH/PSS多层膜包裹后的共聚物，E为溶除碳酸钙模板后的包裹有Cu/Zn-SOD的聚电解质微囊。其中外层聚电解质多层膜为网状结构，不影响溶液中离子的进出膜，Cu/Zn-SOD可以与体系中超氧阴离子自由基接触，进而清除超氧阴离子自由基，发挥其抗氧化的作用。与此同时，聚电解质薄膜又能阻隔其他生物大分子进入微囊内与Cu/Zn-SOD接触，类似胰蛋白酶等水解酶类无法与Cu/Zn-SOD接触，从而防止了其对Cu/Zn-SOD的水解作用，因此该微囊的制备可以达到在不影响Cu/Zn-SOD发挥其生物活性的同时，又能对Cu/Zn-SOD起到很好的保护作用的目的。—、一种包裹有铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)的聚电解质微囊的制备，包括碳酸钙与Cu/Zn-SOD共聚物的制作，聚阳离子电解质PAH与聚阴离子电解质PSS的交替组装，碳酸钙模板的溶除。如图1所示，经过一系列制作过程，Cu/Zn-SOD被成功包裹于聚电解质微囊内。二、一种包裹有铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)的聚电解质微囊的制备流程:A、Cu/Zn-SOD与碳酸I丐纳米颗粒共沉淀取一定量的CaCl2溶液加入离心管中，然后加入等量的Cu/Zn-S0D，静置一会，再加入等量的Na2CO3溶液，立刻用移液枪吹打，混合均匀，12000rpm离心30s，弃上清，得沉淀即为碳酸钙纳米颗粒与Cu/Zn-SOD共聚物。B、聚电解质包裹碳酸钙纳米颗粒与Cu/Zn-SOD共聚物(I)向碳酸钙纳米颗粒与Cu/Zn-SOD共聚物中加入ImL PAH溶液，用移液枪反复吹打，悬浮吸附lOmin，12000rpm离心30s，除去上清液，沉淀用蒸馏水洗涤3次，向沉淀中加入少许蒸馏水，然后用移液枪吸出，至于粒度仪专用比色皿中，测定电位，电位图呈现一个完整的单峰。(2)向包裹有PAH的碳酸钙纳米颗粒中加入ImL PSS溶液，用移液枪反复吹打，悬浮吸附lOmin，12000rpm离心30s，去上清，沉淀用蒸馏水洗涤3次，向沉淀中加入少许蒸馏水，然后用移液枪吸出，至于粒度仪专用比色皿中，测定电位，电位图呈现一个完整的单峰。如此操作便制得第一个PAH/PSS双层薄膜。(3)重复上述操作6次，便可制得包裹有6层PAH/PSS薄膜的碳酸钙纳米颗粒。C、碳酸钙模板的移除及Cu/Zn-SOD活性的恢复(I)向聚电解质微囊溶液中加入0.2M的乙二胺四乙酸(EDTA)，搅拌，直到沉淀完全溶解，溶液呈无色。(2)向溶液中加入与EDTA等体积且浓度均为0.4M的Cu2+和Zn'静置lOmin，即制得了包裹有Cu/Zn-SOD的聚电解质微囊。步骤A碳酸钙与Cu/Zn-SOD共聚物颗粒需呈游离状态，而非结晶状态或聚合状态，形状为圆形或椭圆形。步骤B(I) (2)中，PAH溶液与PSS溶液的pH = 6时，包裹效果最好，微囊最为稳定。实验结果:聚电解质包裹的Cu/Zn-SOD，经胰蛋白酶水解后，比活力保存率为80.19%。天然S0D，经胰蛋白酶水解后，比活力保存率为67.74%。有益效果:I本专利技术通过聚电解质微囊包裹的Cu/Zn-SOD抗胰蛋白酶水解能力优于天然Cu/Zn-SOD02本专利技术较化学修饰等方法保护Cu/Zn-SOD活性的优势在于无需改变酶分子表面结构且操作简单、条件温和、可控性强。【附图说明】:图1包裹有Cu/Zn-SOD的聚电解质微囊制作示意图。图1中标号:A为碳酸钙与Cu/Zn-SOD共聚物，B为阳离子聚电解质聚烯丙基胺盐酸盐(PAH)包裹的共聚物，C为阴离子聚电解质聚苯乙烯磺酸钠(PSS)包裹的共聚物，D为PAH/PSS多层膜包裹后的共聚物，E为溶除碳酸钙模板后的包裹有Cu/Zn-SOD的聚电解质微囊。【具体实施方式】:一种包裹有铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)的聚电解质微囊，其特征是可以有效阻隔胰蛋白酶等其他水解酶类与Cu/Zn-SOD接触，在保证Cu/Zn-SOD生物活性的同时，有效防止了水解酶类对Cu/Zn-SOD的水解作用，其生物活性保存效果优于天然Cu/Zn-SOD。包裹有铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)的聚电解质微囊制备流程:A、Cu/Zn-SOD与碳酸f丐纳米颗粒共沉淀。图1A。B、聚电解质包裹碳酸钙纳米颗粒与Cu/Zn-SOD共聚物。图1B、C、D0C、溶除碳酸钙以制得包裹有Cu/Zn-SOD的聚电解质微囊。图1E。本行业的技术人员应了解，本专利技术不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本专利技术的原理，在不脱离本专利技术精神和范围的前提下，本专利技术还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本专利技术范围内，本专利技术要求保护范围由所附的权利要求书其等效物界定。【主权项】1.一种包裹有铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)聚电解质微囊的制备方法，其特征是基于层层白组装原理，采用阴离子聚电解质聚苯乙烯磺酸钠和阳离子聚电解质聚烯丙基胺盐酸盐作为聚电解质微囊组装材料,将具有抗氧化功能的Cu/Zn-SOD包裹于微囊之中，该微囊可以有效阻隔胰蛋白酶等其他水解酶类与Cu/Zn-SOD接触，在保证Cu/Zn-SOD生物活性的同时，有效防止了水解酶类对Cu/Zn-SOD的水解作用，其生物活性保存效果优于天然Cu/Zn-SOD。2.包含Cu/Zn-SOD的聚电解质微囊制作流程如下: A、Cu/Zn-SOD与碳酸韩纳米颗粒共沉淀 取一定量的CaCl2溶液加入离心管中，加入等量的Cu/Zn-SOD，静置，再加入等量的NaCO3溶液，立刻用移液枪吹打，混合均匀，12000rpm离心30s，弃上清，得沉淀即为碳酸钙纳米颗粒与Cu/Zn-SOD共聚物。 B、聚电解质包裹碳酸韩纳米颗粒与Cu/Zn-SOD共聚物 (1)向碳酸钙纳米颗粒与Cu/Zn-SOD共聚物中加入ImLPAH溶液，用移液枪反复吹打，悬浮吸附lOmin，12000rpm离心30s，除去上清液，沉淀用蒸馏水洗涤3次，至于粒度仪中，测定电位，电位图呈现完整的单峰。 (2)向包本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种包裹有铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn‑SOD)聚电解质微囊的制备方法，其特征是基于层层白组装原理，采用阴离子聚电解质聚苯乙烯磺酸钠[poly(sodium styrene sulfonate)，PSS]和阳离子聚电解质聚烯丙基胺盐酸盐[poly(allyamine hydrochloride)，PAH]作为聚电解质微囊组装材料，将具有抗氧化功能的Cu/Zn‑SOD包裹于微囊之中，该微囊可以有效阻隔胰蛋白酶等其他水解酶类与Cu/Zn‑SOD接触，在保证Cu/Zn‑SOD生物活性的同时，有效防止了水解酶类对Cu/Zn‑SOD的水解作用，其生物活性保存效果优于天然Cu/Zn‑SOD。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张峰，刘进，魏建民，侯静，
申请(专利权)人：内蒙古农业大学，
类型：发明
国别省市：内蒙古;15
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