用液相芯片检测呼吸道传染病病原的引物和探针及方法技术

本发明专利技术公开了用液相芯片检测呼吸道传染病病原的引物和探针及方法，其用于9种临床常见呼吸道传染病病原的检测。本发明专利技术基于MASA液相芯片技术对9种临床常见呼吸道传染病病原进行检测，主要根据基因库中能够检索到的9种目标病毒所有的核苷酸序列分别进行同源性分析，设计简并引物和特异性探针，通过两轮PCR，分子杂交，再用Luminex100系统进行检测，从而确定样本中所含病原体的种类。本发明专利技术提供的对这9种临床常见呼吸道传染病病原的检测及早期诊断，其对于采取正确的治疗方案和及时的应对措施以防止疾病的传播至关重要。本发明专利技术具有检测速度快、操作简单、敏感性高、特异性好等优点，适合大范围的推广应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种涵盖9种临床常见呼吸道传染病病原的检测，尤其是一种借助液相芯片对9种临床常见呼吸道传染病病原进行检测，属于医学监测

技术介绍
人呼吸道合胞体病毒A型(HRSV-A)、人呼吸道合胞体病毒B型(HRSV-B)、流感病毒A型(InfV A)、流感病毒B型(InfV B)、SARS、副流感病毒I型(PIV-1 )、副流感病毒II型 (PIV-2)、副流感病毒III型(PIV-3)、腮腺炎病毒(Mumps virus)是我国临床常见的9种人类重大呼吸道传染病病原。其中流感病毒A型、B型，腮腺炎病毒为法定丙类传染病病原。 这9种病原体主要通过呼吸道传播，传播速度快，易引起较大规模的流行，造成突发公共卫生事件，危机人民的健康和社会的稳定。对这些病原的早期诊断对于采取正确的治疗方案和及时的应对措施以防止疾病的传播至关重要。目前临床用于病毒检测的常规方法主要有病原体的培养和分离，免疫学检测和核酸PCR检测。病原体培养和分离检测方法是一种传统的检测技术，检测结果准确可靠，但是敏感性较低，检测周期较长，不利于病毒感染早期的诊断；免疫学检测敏感性和特异性较强，但是检测需要材料较多且测定的结果与抗体来源及亲和力有关；核酸PCR检测方法是目前灵敏度较高的一种检测方法，较病原体分离方法的检出率高，但是当PCR的靶序列发生突变则容易造成假阴性结果。MASA液相芯片(Multi-Analyte Suspension Array，多功能悬浮点阵仪)技术是20 世纪90年代后期发展起来的一种新型芯片技术。该技术将流式检测技术与芯片技术有机的结合在一起，具有高灵敏性，高异性，高通量，操作简单的特点。液相芯片体系由许多大小均一的圆形微球构成，每种微球上固定有不同的探针分子，不同种类的微球带用不同的荧光染料编码，分子杂交在悬浮溶液中进行。检测过程中目的分子能够与偶联在微球上的探针特异性结合，使交联探针的微球携带上报告分子藻红蛋白，当微球通过Luminex检测仪时，该检测仪上的红色和绿色激光分别对单个微球上的编码荧光和报告分子藻红蛋白进行检测，检测结果通过荧光值直接判读。由于液相芯片具有准确性高，灵活性好，操作简单，通量大等特点，目前已被广泛用在细胞因子的检测，激酶的检测，抗原决定簇的筛选，疾病病原体的检测，以及与各种抗原抗体反应相关的检测当中。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种用液相芯片快速检测临床常见呼吸道传染病病原的引物和探针，还提供一种利用上述引物和探针检测临床常见呼吸道传染病病原的方法。本专利技术解决其技术问题采用以下的技术方案本专利技术提供的是一种基于MASA液相芯片对临床常见呼吸道传染病病原进行检测的引物，该引物根据基因库中能够检索到的目标病毒所有的核苷酸序列分别进行同源性分析和5设计，具体是(1)用于检测人呼吸道合胞体病毒A型的引物F、引物R的DNA序列 HRSV A-F CTGGTCCGTACTTCCGAGCGCAGCTTATCAAATGGAGTTAGTG,HRSV A-R :TACAGTCGGTCGCGTGCCTCTCATTTGTTATAGGCATATCATTG ；(2)用于检测人呼吸道合胞体病毒B型的引物F、引物R的DNA序列 HRSV B-F CTGGTCCGTACTTCCGAGCGAGGTGTAGGATCTGCAATAGC,HRSV B-R :TACAGTCGGTCGCGTGCCTCCAATGTTGGAGATGCGACAGC ；(3)用于检测流感病毒A型的引物F、引物R的DNA序列 InfV A-F :CTGGTCCGTACTTCCGAGCGACAGCATCGGTCTCACAGAC, InfV A-R :TACAGTCGGTCGCGTGCCTCCTTGAATCGCTGCATCTGCAC ；(4)用于检测流感病毒B型的引物F、引物R的DNA序列 InfV B-F CTGGTCCGTACTTCCGAGCGTGTGAGCTTTCATGAAGCATTTG, InfV B-R :TACAGTCGGTCGCGTGCCTCTTCATAGCTGAGACCATCTGC ；(5)用于检测SARS的引物F、引物R的DNA序列 SARS-F CTGGTCCGTACTTCCGAGCGTACACACCTCAGCGTTG， SARS-R :TACAGTCGGTCGCGTGCCTCCACGAACGTGACGAAT ；(6)用于检测副流感病毒I型的引物F、引物R的DNA序列 PIV-I-F CTGGTCCGTACTTCCGAGCGTGAGTGATTAAGTTTGATGA， PIV-I-R :TACAGTCGGTCGCGTGCCTCATTATTACCYGGACCAAG ；(7)用于检测副流感病毒II型的引物F、引物R的DNA序列 PIV-2-F CTGGTCCGTACTTCCGAGCGCCTAAGTGATGGAATCAATCGC, PIV-2-R :TACAGTCGGTCGCGTGCCTCAAGCCTAGATGATAGATCCCGC ；(8)用于检测副流感病毒III型的引物F、引物R的DNA序列 PIV-3-F CTGGTCCGTACTTCCGAGCGATGCTTATACCTCRAATCTA， PIV-3-R: :TACAGTCGGTCGCGTGCCTCTRGGATTTAAGTCAGGTACC ；(9)用于检测腮腺炎病毒的引物F、引物R的DNA序列Mumps virus-F CTGGTCCGTACTTCCGAGCGATTAGATTAGCAGATAGATCACC, Mumps virus-R TACAGTCGGTCGCGTGCCTCGATTAGTACACTGTAGCATCG 本专利技术提供的用液相芯片检测呼吸道传染病病原的探针有9种，它们分别与上述的9种引物对应制成，这些探针为特异性检测探针，其DNA序列为(1)用于检测人呼吸道合胞体病毒A型的HRSVA-probe的DNA序列NH2- (CH2) 12CTGG TAATCTCTAGTAGTCTG(2)用于检测人呼吸道合胞体病毒B型的HRSVB-probe的DNA序列 NH2- (CH2) 12ATTTGATAGACTGACTACAGCT(3)用于检测流感病毒A型的InfVA-probe的DNA序列 NH2- (CH2) 12GTACCATCTGCCTAGTCTGAT(4)用于检测流感病毒B型的InfVB-probe的DNA序列 NH2- (CH2) 12AGCACAGAGCGTTCCTAGTT(5)用于检测SARS的SARS-probe的DNA序列NH2- (CH2) 12 GATGAGTCTACGGTAGGTCAT(6)用于检测副流感病毒I型的PIV-1-probe的DNA序列 NH2- (CH2) 12CTTCATTATCAATTGGTGATGCA(7)用于检测副流感病毒II型的PIV-2-probe的DNA序列 NH2- (CH2) 12 TATAATAATAGAAAGCAAGCAAGTCTCAG(8)用于检测副流感病毒III型的PIV-3-probe的DNA序列 NH2- (CH2) 12CCTATATCCTGRCAACCTCGA(9)用于检测腮腺炎病毒本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．　一种用液相芯片检测呼吸道传染病病原的引物，其特征是一种基于ＭＡＳＡ液相芯片对临床常见呼吸道传染病病原进行检测的引物，该引物根据基因库中能够检索到的目标病毒所有的核苷酸序列分别进行同源性分析和设计，具体是：（１）用于检测人呼吸道合胞体病毒Ａ型的引物Ｆ、引物Ｒ的ＤＮＡ序列：ＨＲＳＶ　Ａ－Ｆ：ＣＴＧＧＴＣＣＧＴＡＣＴＴＣＣＧＡＧＣＧＣＡＧＣＴＴＡＴＣＡＡＡＴＧＧＡＧＴＴＡＧＴＧＨＲＳＶ　Ａ－Ｒ：ＴＡＣＡＧＴＣＧＧＴＣＧＣＧＴＧＣＣＴＣＴＣＡＴＴＴＧＴＴＡＴＡＧＧＣＡＴＡＴＣＡＴＴＧ（２）用于检测人呼吸道合胞体病毒Ｂ型的引物Ｆ、引物Ｒ的ＤＮＡ序列：ＨＲＳＶ　Ｂ－Ｆ：ＣＴＧＧＴＣＣＧＴＡＣＴＴＣＣＧＡＧＣＧＡＧＧＴＧＴＡＧＧＡＴＣＴＧＣＡＡＴＡＧＣＨＲＳＶ　Ｂ－Ｒ：ＴＡＣＡＧＴＣＧＧＴＣＧＣＧＴＧＣＣＴＣＣＡＡＴＧＴＴＧＧＡＧＡＴＧＣＧＡＣＡＧＣ（３）用于检测流感病毒Ａ型的引物Ｆ、引物Ｒ的ＤＮＡ序列：ＩｎｆＶ　Ａ－Ｆ：ＣＴＧＧＴＣＣＧＴＡＣＴＴＣＣＧＡＧＣＧＡＣＡＧＣＡＴＣＧＧＴＣＴＣＡＣＡＧＡＣＩｎｆＶ　Ａ－Ｒ：ＴＡＣＡＧＴＣＧＧＴＣＧＣＧＴＧＣＣＴＣＣＴＴＧＡＡＴＣＧＣＴＧＣＡＴＣＴＧＣＡＣ（４）用于检测流感病毒Ｂ型的引物Ｆ、引物Ｒ的ＤＮＡ序列：ＩｎｆＶ　Ｂ－Ｆ：ＣＴＧＧＴＣＣＧＴＡＣＴＴＣＣＧＡＧＣＧＴＧＴＧＡＧＣＴＴＴＣＡＴＧＡＡＧＣＡＴＴＴＧＩｎｆＶ　Ｂ－Ｒ：ＴＡＣＡＧＴＣＧＧＴＣＧＣＧＴＧＣＣＴＣＴＴＣＡＴＡＧＣＴＧＡＧＡＣＣＡＴＣＴＧＣ（５）用于检测ＳＡＲＳ的引物Ｆ、引物Ｒ的ＤＮＡ序列：ＳＡＲＳ－Ｆ：ＣＴＧＧＴＣＣＧＴＡＣＴＴＣＣＧＡＧＣＧＴＡＣＡＣＡＣＣＴＣＡＧＣＧＴＴＧＳＡＲＳ－Ｒ：ＴＡＣＡＧＴＣＧＧＴＣＧＣＧＴＧＣＣＴＣＣＡＣＧＡＡＣＧＴＧＡＣＧＡＡＴ（６）用于检测副流感病毒Ｉ型的引物Ｆ、引物Ｒ的ＤＮＡ序列：ＰＩＶ－１－Ｆ：ＣＴＧＧＴＣＣＧＴＡＣＴＴＣＣＧＡＧＣＧＴＧＡＧＴＧＡＴＴＡＡＧＴＴＴＧＡＴＧＡＰＩＶ－１－Ｒ：ＴＡＣＡＧＴＣＧＧＴＣＧＣＧＴＧＣＣＴＣＡＴＴＡＴＴＡＣＣＹＧＧＡＣＣＡＡＧ（７）用于检测副流感病毒ＩＩ型的引物Ｆ、引物Ｒ的ＤＮＡ序列：ＰＩＶ－２－Ｆ：ＣＴＧＧＴＣＣＧＴＡＣＴＴＣＣＧＡＧＣＧＣＣＴＡＡＧＴＧＡＴＧＧＡＡＴＣＡＡＴＣＧＣＰＩＶ－２－Ｒ：ＴＡＣＡＧＴＣＧＧＴＣＧＣＧＴＧＣＣＴＣＡＡＧＣＣＴＡＧＡＴＧＡＴＡＧＡＴＣＣＣＧＣ（８）用于检测副流感病毒ＩＩＩ型的引物Ｆ、引物Ｒ的ＤＮＡ序列：ＰＩＶ－３－Ｆ：ＣＴＧＧＴＣＣＧＴＡＣＴＴＣＣＧＡＧＣＧＡＴＧＣＴＴＡＴＡＣＣＴＣＲＡＡＴＣＴＡＰＩＶ－３－Ｒ：ＴＡＣＡＧＴＣＧＧＴＣＧＣＧＴＧＣＣＴＣＴＲＧＧＡＴＴＴＡＡＧＴＣＡＧＧＴＡＣＣ（９）用于检测腮腺炎病毒的引物Ｆ、引物Ｒ的ＤＮＡ序列：Ｍｕｍｐｓ　ｖｉｒｕｓ－Ｆ：ＣＴＧＧＴＣＣＧＴＡＣＴＴＣＣＧＡＧＣＧＡＴＴＡＧＡＴＴＡＧＣＡＧＡＴＡＧＡＴＣＡＣＣＭｕｍｐｓ　ｖｉｒｕｓ－Ｒ：ＴＡＣＡＧＴＣＧＧＴＣＧＣＧＴＧＣＣＴＣＧＡＴＴＡＧＴＡＣＡＣＴＧＴＡＧＣＡＴＣＧ。...

【技术特征摘要】
1.一种用液相芯片检测呼吸道传染病病原的引物，其特征是一种基于MASA液相芯片对临床常见呼吸道传染病病原进行检测的引物，该引物根据基因库中能够检索到的目标病毒所有的核苷酸序列分别进行同源性分析和设计，具体是(1)用于检测人呼吸道合胞体病毒A型的引物F、引物R的DNA序列 HRSV A-F :CTGGTCCGTACTTCCGAGCGCAGCTTATCAAATGGAGTTAGTGHRSV A-R :TACAGTCGGTCGCGTGCCTCTCATTTGTTATAGGCATATCATTG(2)用于检测人呼吸道合胞体病毒B型的引物F、引物R的DNA序列 HRSV B-F :CTGGTCCGTACTTCCGAGCGAGGTGTAGGATCTGCAATAGCHRSV B-R :TACAGTCGGTCGCGTGCCTCCAATGTTGGAGATGCGACAGC(3)用于检测流感病毒A型的引物F、引物R的DNA序列 InfV A-F :CTGGTCCGTACTTCCGAGCGACAGCATCGGTCTCACAGAC InfV A-R :TACAGTCGGTCGCGTGCCTCCTTGAATCGCTGCATCTGCAC(4)用于检测流感病毒B型的引物F、引物R的DNA序列 InfV B-F :CTGGTCCGTACTTCCGAGCGTGTGAGCTTTCATGAAGCATTTG InfV B-R :TACAGTCGGTCGCGTGCCTCTTCATAGCTGAGACCATCTGC(5)用于检测SARS的引物F、引物R的DNA序列 SARS-F CTGGTCCGTACTTCCGAGCGTACACACCTCAGCGTTG SARS-R TACAGTCGGTCGCGTGCCTCCACGAACGTGACGAAT(6)用于检测副流感病毒I型的引物F、引物R的DNA序列 PIV-I-F CTGGTCCGTACTTCCGAGCGTGAGTGATTAAGTTTGATGA PIV-I-R TACAGTCGGTCGCGTGCCTCATTATTACCYGGACCAAG(7)用于检测副流感病毒II型的引物F、引物R的DNA序列 PIV-2-F :CTGGTCCGTACTTCCGAGCGCCTAAGTGATGGAATCAATCGC PIV-2-R :TACAGTCGGTCGCGTGCCTCAAGCCTAGATGATAGATCCCGC(8)用于检测副流感病毒III型的引物F、引物R的DNA序列 PIV-3-F :CTGGTCCGTACTTCCGAGCGATGCTTATACCTCRAATCTA PIV-3-R :TACAGTCGGTCGCGTGCCTCTRGGATTTAAGTCAGGTACC(9)用于检测腮腺炎病毒的引物F、引物R的DNA序列Mumps virus-F :CTGGTCCGTACTTCCGAGCGATTAGATTAGCAGATAGATCACC Mumps virus-R TACAGTCGGTCGCGTGCCTCGATTAGTACACTGTAGCATCG 2.一种用液相芯片检测呼吸道传染病病原的探针，其特征是有9种探针，它们分别与权利要求1所述的9种引物对应制成，所述探针的DNA序列为(1)用于检测人呼吸道合胞体病毒A型的HRSVA-probe的DNA序列NH2- (CH2) 12CTGG TAATCTCTAGTAGTCTG(2)用于检测人呼吸道合胞体病毒B型的HRSVB-probe的DNA序列 NH2- (CH2) 12ATTTGATAGACTGACTACAGCT(3)用于检测流感病毒A型的InfVA-probe的DNA序列 NH2- (CH2) 12GTACCATCTGCCTAGTCTGAT(4)用于检测流感病毒B型的InfVB-probe的DNA序列NH2- (CH2) 12AGCACAGAGCGTTCCTAGTT(5)用于检测SARS的SARS-probe的DNA序列 NH2- (CH2) 12 GATGAGTCTACGGTAGGTCAT(6)用于检测副流感病毒I型的PIV-1-probe的DNA序列 NH2- (CH2) 12CTTCATTATCAATTGGTGATGCA(7)用于检测副流感病毒II型的PIV-2-probe的DNA序列 NH2- (CH2) 12 TATAATAATAGAAAGCAAGCAAGTCTCAG(8)用于检测副流感病毒III型的PIV-3-probe的DNA序列 NH2- (CH2) 12CCTATATCCTGRCAACCTCGA(9)用于检测腮腺炎病毒的Mu...

【专利技术属性】
技术研发人员：王华林，尹飞飞，邓菲，胡志红，
申请(专利权)人：中国科学院武汉病毒研究所，
类型：发明
国别省市：83