用于检测乙型肝炎病毒耐药突变位点的引物及方法技术

技术编号:6517811 阅读:418 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开了一种用于检测乙型肝炎病毒耐药突变位点的引物及方法。本发明专利技术提供了用于乙型肝炎病毒耐药突变位点检测的4对PCR引物,以这4对PCR引物扩增乙型肝炎病毒基因组DNA,获得的4个片段以重叠的方式覆盖整个乙型肝炎病毒逆转录酶基因序列。本发明专利技术将4段PCR片段以等摩尔比混合制成逆转录酶基因文库,经454高通量测序和生物信息学分析,能够检测乙型肝炎患者血清样本中的乙型肝炎病毒是否含有耐药性突变位点。本发明专利技术能够检测到患者血清中占1%以上的乙型肝炎病毒耐药突变,具有敏感性高、操作简单、通量大等优点,一次测序可以进行多个样本耐药突变位点的分析。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及乙型肝炎病毒耐药突变位点的检测,尤其是一种利用妨4测序技术对乙型肝炎病毒耐药突变位点进行检测,属于医学检测

技术介绍
乙型肝炎病毒(HBV)简称乙肝病毒,是一种DNA病毒,属于嗜肝DNA病毒科。根据目前所知,乙肝病毒只对人和猩猩有易感性,引发乙型病毒性肝炎疾病。完整的乙型肝炎病毒成颗粒状,直径为42纳米,是英国科学家Dane于1970年首先发现,故又称Dane颗粒(丹氏颗粒)。Dane颗粒由外膜和内核两部分组成,外膜厚7纳米,由蛋白质和膜脂质组成,称作乙肝病毒表面抗原(HBsAg)。中心部分的直径约观纳米,为病毒的核心,其中包括核心抗原(HBcAg),病毒基因组DNA和合成病毒基因组的DNA多聚酶。乙肝病毒基因组编码四个基因,分别是表面抗原基因(S、PreSl及ft~eS2基因),DNA多聚酶基因(P基因),X蛋白基因,核心抗原基因(C及基因)。乙肝病毒感染是一个严重的公共卫生问题。全球60 亿人口中,约20亿人曾感染过乙肝病毒,其中3. 5 4亿人为慢性乙肝病毒感染,约占全球人口 6%。在这3. 5 4亿慢性乙肝病毒感染者中,约15% 25%最终将死于与乙本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测乙型肝炎病毒耐药突变位点的引物,其特征是根据基因库中能够检索到的乙型肝炎病毒基因组核苷酸序列进行同源性分析,设计以下四对引物:第一对是F1片段的引物F1f和F1r,其中:F1f的序列为:CGTATCGCCTCCCTCGCGCCATCAGACGAGTGCGTCTGCTGGTGGCTCCAGTTCF1r的序列为:CTATGCGCCTTGCCAGCCCGCTCAGACGAGTGCGTACAAACGGGCAACATACCTTG第二对是F2片段的引物F2f和F2r,其中:F2f的序列为:CGTATCGCCTCCCTCGCGCCATCAGACGAGTGCGTATCGCTGGATGTGTCT...

【技术特征摘要】
1.一种用于检测乙型肝炎病毒耐药突变位点的引物,其特征是根据基因库中能够检索到的乙型肝炎病毒基因组核苷酸序列进行同源性分析,设计以下四对引物第一对是Fl片段的引物Flf和Flr,其中 Flf的序列为CGTATCGCCTCCCTCGCGCCATCAGACGAGTGCGTCTGCTGGTGGCTCCAGTTC Flr的序列为CTATGCGCCTTGCCAGCCCGCTCAGACGAGTGCGTACAAACGGGCAACATACCTTG 第二对是F2片段的引物F2f和F2r,其中 F2f的序列为CGTATCGCCTCCCTCGCGCCATCAGACGAGTGCGTATCGCTGGATGTGTCTGCGG F2r的序列为CTATGCGCCTTGCCAGCCCGCTCAGACGAGTGCGTTGTACAGACTTGGCCCCCAA 第三对是F3片段的引物F3f和F3r,其中 F3f的序列为CGTATCGCCTCCCTCGCGCCATCAGACGAGTGCGTCTTTCCCCCACTGTYTGGC F3r的序列为CTATGCGCCTTGCCAGCCCGCTCAGACGAGTGCGTTTGGCGAGAAAGTRAAAGCCTG 第四对是F4片段的引物F4f和F4r,其中 F4f的序列为CGTATCGCCTCCCTCGCGCCATCAGACGAGTGCGTAAYAGRCCTATTGATTGGAAAGT F4r的序列为CTATGCGCCTTGCCAGCCCGCTCAGACGAGTGCGTCYAGGAGTTCCGCAGTATGG。2.一种用于检测乙型肝炎病毒耐药突变位点的方法,其特征是采用权利要求1所述的引物,通过PCR获得4段PCR产物,这4段PCR产物以重叠的方式覆盖全部逆转录酶基因序列,将4段PCR产物等摩尔比混合构建样本的逆转录酶基因文库,再用4M测序技术对该文库进行检测,从而确定样本中是否含有耐药性突变位...

【专利技术属性】
技术研发人员:尹飞飞王华林邓菲胡志红
申请(专利权)人:中国科学院武汉病毒研究所
类型:发明
国别省市:83

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