本发明专利技术涉及ＶＥＧＦ受体融合蛋白在治疗眼睛疾病中的应用，所述眼睛疾病包括年龄相关性黄斑变性，糖尿病视网膜病变，糖尿病黄斑瘤腺体以及由新生血管生长而引发的治疗失败如激光凝固体，手术视网膜移植。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及VEGF受体融合蛋白在治疗因新生血管的生长而引发的各种眼科疾病中的应用。
技术介绍
视网膜血管系统和脉络膜(chorodial)血管系统是组成视网膜的重要组成部分。创伤或疾病而引起的血管管壁结构或功能的异常改变是导致视力下降或丧失的主要原因。例如，糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy)是由于糖尿病而导致视网膜血管增生，进而造成视网膜脱落。它是造成视力丧失的主要原因。在眼睛受伤后或手术后的恢复过程中也可能造成视网膜内新生血管的生长。这一类视网膜血管增生也是造成视力下降或眼睛失明的重要原因(Nature 438932-938，2005)。年龄相关的黄斑变性(AMD)是一种由视网膜中心区的细胞或组织退化和血管增生而引起的疾病。可分干性和湿性两种。其中湿性AMD是脉络膜新生血管形成的最常见形式，它也是引起眼睛失明的主要原因。血管内皮生长因子(VEGF)是一种专一性调控新生血管生长的蛋白质(Am.J.Pathol.1671451-1459，2005)。VEGF刺激内皮细胞分裂增生，进而促进新生血管生长，以提供营养和氧气给组织细胞。很多研究表明一旦眼睛视网膜的感光细胞由于营养不足而开始萎缩(称作“缺血性萎缩”)，VEGF在视网膜内的浓度便开始升高，从而促进新生血管生长。这一过程称为“新生血管的形成”(angiogenesis)。在眼内，新生的血管在形态上与正常血管不同，管腔不规则，管壁多为渗漏。这种高通透性或渗漏的血管的异常增生常导致视网膜上产生疤痕，并进一步可发生脱落从而影响到视力。许多研究表明湿性AMD病人的脉络膜组织中有高水平的VEGF表达(Invest.Opthal.Vis.Sci 37855-868，1996；Microvascular Res.64162-169，2002)。由于VEGF表达水平与湿性AMD之间的相关性，VEGF可以被用作诊断AMD的一个生化指标(Br.J.Opthalmol.88809-815，2004)。一些VEGF抑制剂可以阻断VEGF与内皮细胞上VEGF受体(flt-1、KDR等)之间的相互作用，从而阻止由VEGF介导的信息传导，抑制由VEGF高表达而引起的新生血管的生长，以达到预防和阻止视网膜上出血的目的。这类VEGF抑制剂包括Macugen(pegaptanib sodium)，Lucentis，VEGF-Trap，Avastin(bevacizumab)和AdPEDF等。其中Macugen和Avastin已由美国国家食品和药物管理局(FDA)批准上市。
技术实现思路
本专利技术提供一类抑制VEGF的融合蛋白，可用于治疗由于新生血管的生长而引发的各种眼科疾病。所述疾病包括(但不限于)所述眼睛疾病包括年龄相关性黄斑变性，糖尿病视网膜病变，糖尿病黄斑瘤腺体以及由新生血管生长而引发的治疗失败如激光凝固体，手术视网膜移植。在本专利技术中，所述融合蛋白是指大分子化合物，特别是VEGF受体的重组融合蛋白。更具体而言，本专利技术的VEGF抑制剂是中国专利申请“抑制血管新生的融合蛋白质及其用途”(申请号CN200510073595.4)中描述的FP1、FP2、FP3、FP4、FP5、FP6和本专利技术提供的FP7和FP8中的任何一种。其中FP1、FP2、FP3、FP4、FP5、FP6的融合蛋白氨基酸序列在上述专利说明书中，FP7和FP8的氨基酸序列在本专利技术序列表中的序列1和序列2。本专利技术所述的VEGF受体融合蛋白可以通过上述专利说明书中的方法制备，其中FP1、FP2、FP3、FP4、FP5、FP6是已知物，FP7和FP8是新物质，对于新物质，本专利技术提供了其优选的制备方法实施例，其制备原理和上述专利说明书相同。本专利技术经过重组技术制成的制品经过纯化达到药用纯度，然后根据制剂的需要再将其制备成药物制剂，这些制剂应该特别适合于静脉注射给药，玻璃体内注射给药，腹腔注射，皮下注射，局部眼内给药，其制备工艺可以采用药物制剂的常规制法完成，优选的是溶液制剂或干粉制剂，作为干粉制剂，使用时将干粉溶解使成为溶液。本专利技术的融合蛋白制剂，需要时可以加入药物可接受的载体，所述载体可以是任何适合本专利技术的制剂形式的药物载体，优选的选自磷酸钠(sodium phosphate)、琥珀酸钠(sodium succinate)、组氨酸(histidine)、甘露醇(mannitol)、海藻糖(trehalose dihydrate)、聚山梨醇酯(polysorbate20)、氯化钠(sodium chloride)、蔗糖(sucrose)、三羟甲基氨基甲烷(trometamol)或乳糖，上述制剂缓冲液(formulation buffer)，应含有pH缓冲系统如磷酸盐(phosphate)、柠檬酸盐(citrate)、乙酸盐(acetate)、琥珀酸盐(succinate)、三羟甲基氨基甲烷(trometamol，又名Tris)或组氨酸(histidine)等中的一种，pH的范围在3至9；可含有渗透压调节剂如氯化钠(sodium chloride)、葡萄糖(dextrose)等；可含有稳定剂如氨基酸(amino acids)、甘油(glycerol)、环糊精(cyclodextrin)、蔗糖(sucrose)、海藻糖(trehalose dihydrate)等；可含有防腐剂如噻汞撒(thimerosal)、亚硫酸氢钠(sodium bisulfite)、苯基乙醇(benzylalcohol)等。对于冻干制剂，可含有赋形剂如甘露醇(mannitol)等；对于溶液制剂，可含有表面活性剂如聚山梨醇酯(polysorbate 20或80)、十二烷基磺酸钠(SDS)等。融合蛋白的浓度范围在0.01mg/ml至1000mg/ml。其用量根据临床的需要而定。另外制剂中根据需要还可加入防腐剂，稳定剂，助溶剂等辅助成分，可以选自任何适宜的药剂学常规的辅助成分。溶剂选择水或其他等渗溶液，缓冲溶液等。本专利技术中，同时还介绍了VEGF抑制剂的给药方法。这些抑制剂可以通过多种不同的给药途径给予病人，其中包括(但不限于)静脉给药，玻璃体内注射，也可以通过以点眼药的方式在一定剂型下给予病人以达到治疗眼疾的目的。本专利技术意外的发现本专利技术的融合蛋白形式的VEGF抑制剂较现有技术具有优良的眼病治疗作用，而且稳定性好，安全性高，副作用小，效果优良，本专利技术通过实验数据证明了本专利技术的有益效果，具体数据见实施例。附图说明图1本专利技术的8种融合蛋白的结构示意2融合蛋白与VEGF结合的亲和力的比较图3融合蛋白对视网膜缺血性萎缩引起的新生血管形成的影响图4融合蛋白对脉络膜新生血管生长的影响具体实施例方式以下通过实施例进一步说明本专利技术，但不作为对本专利技术的限制。实施例1，FP7的构建融合蛋白FP7是由引物flt-1D2(F)、flt-1D2(R)、KDR D3(F)和KDRD3-4(R)(见专利申请书，申请号CN200510073595.4)从HUVEC细胞提取到的mRNA作为模板合成的cDNA上放大到的flt-1和KDR基因片段重组而成。具体的条件是在变性95°、30分钟，退火56°、45秒钟，延伸72°、2分钟的条件下，进行PCR扩增，30个循环，获得本文档来自技高网...
【技术保护点】
血管内皮生长因子受体融合蛋白在制备治疗由病变血管新生引起的眼睛疾病的药物中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：俞德超，
申请(专利权)人：成都康弘生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：90[中国|成都]
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