目标物的检测方法及目标物检测用层析试剂盒技术

本发明专利技术提供一种通过以下步骤能够高灵敏度地检测出目标物的目标物检测方法，它是一种用层析试验用具检测试样中所含目标物的方法，该层析试验用具有固定能与目标物结合的捕捉物的检测区，其步骤包括：混合试样和与目标物结合的酶标记物；将所得混合液添加到层析试验用具，用检测区的捕捉物捕捉与酶标记物结合的目标物；在捕捉到目标物的层析试验用具的检测区添加含有阴离子表面活性剂的试剂；使发光底物与通过目标物结合到检测区捕捉物的酶标记物的酶发生反应；及检测发光底物和酶反应所引起的检测区的发光。本发明专利技术还提供一种用于检测试样中所含目标物的层析试剂盒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种目标物的检测方法及目标物检测用试剂盒。
技术介绍
现有一种层析法以采自生物的血液、血清、咽喉拭液、鼻腔拭液、鼻涕、尿液等样本 为试样检测试样中所含目标物。在此方法中，首先，将可与试样中目标物结合的捕捉物固定 到层析实验用具的检测区。用此层析实验用具将结合到目标物的标记物和试样混合而成的 混合液展开。以此，标记物标记的目标物被捕捉到检测区。此时，在检测区形成标记物-目 标物-捕捉物夹层形状的复合物。在使用有色乳胶粒子或金属胶粒子等标记成分的标记物 时，当标记物在检测区被捕捉时，检测区会显色。在层析法中通过观察此检测区的显色即可 检测出试样中的目标物。然而，使用上述有色乳胶粒子等的层析法，检测灵敏度低，如果试样所含目标物极 少的话，很难检出目标物。于是，近年来，有人为高灵敏度地检测目标物，提出了一种在层析法中用荧光物或 化学发光物取代有色乳胶粒子作标记成分的方法。比如日本公开专利JP2002-267671中记述了一种用荧光物作标记成分的免疫层 析法。日本公开专利H8-5637中记述了一种用化学发光物吖啶酯作为标记成分的抗体检测法。然而，上述方法还是达不到市场所要求的检测灵敏度。
技术实现思路
本专利技术的专利技术者发现，在利用酶化学发光的层析法中展开目标物和酶标记物的混 合液后在检测区添加含阴离子表面活性剂的试剂可以提高发光底物的发光强度，从而完成 了本项专利技术。本专利技术提供(1) 一种用层析试验用具检测试样中所含目标物的方法，所述层析试验用具具有 检测区，所述检测区固定有能与所述目标物结合的捕捉物，所述方法包括混合试样和与目 标物结合的酶标记物；将所得混合液添加到所述层析试验用具，用所述检测区的捕捉物捕 捉与所述酶标记物结合的目标物；在捕捉到所述目标物的所述层析试验用具的检测区添加 含阴离子表面活性剂的试剂；使发光底物与通过所述目标物结合到所述检测区的捕捉物的 酶标记物的酶发生反应；及检测所述发光底物和所述酶反应所引起的所述检测区的发光， 以此检出所述试样中所含目标物。(2)⑴所述方法，其中所述阴离子表面活性剂选自十二烷基硫酸钠、十二烷基 苯磺酸钠、正癸基硫酸钠、月桂醇磺基乙酸酯钠、1-十二烷基磺酸钠、P-辛基苯磺酸、1-辛 烷磺酸、1-癸烷磺酸钠、辛烷-1-基硫酸钠(Sodium octan-l-yl Sulfate)、月桂基聚氧乙 烯(2)醚硫酸钠(P0E (2) Sodium lauryl ether sulfate)。(3) (1)所述方法，其中用所述层析实验用具展开所述含阴离子表面活性剂的试 剂，以此将所述含阴离子表面活性剂的试剂添加到所述层析实验用具的检测区。(4) (1)所述方法，其中所述含阴离子表面活性剂的试剂还包括缓冲剂。(5) (1)所述方法，其中所述试剂中所含阴离子表面活性剂的浓度为0.0001 0. 1重量％。(6) (1)-(5)中任意一项所述方法，其中所述发光底物为二氧杂环丁烷类。(7) (1)-(5)中任意一项所述方法，其中所述酶标记物的酶是碱性磷酸酶。(8) (1)-(5)中任意一项所述方法，其中所述捕捉物为抗体，所述酶标记物是酶 标记抗体。(9) (1)-(5)中任意一项所述方法，其中通过测定所述检测区发出光的发光强 度，定量所述试样中所含目标物，以此检测所述目标物。(10) (1)-(5)中任意一项所述方法，其中所述层析试验用具是侧流层析试验用 具或穿流层析试验用具。(11) 一种用于检测目标物的层析试剂盒，包括与目标物结合的酶标记物；具有 检测区的层析试验用具，所述检测区固定有能与目标物结合的捕捉物；含阴离子表面活性 剂的试剂；通过与所述酶标记物作用而产生发光反应的所述酶标记物的发光底物。(12) (11)所述试剂盒，其中所述阴离子表面活性剂选自十二烷基硫酸钠、十二 烷基苯磺酸钠、正癸基硫酸钠、月桂醇磺基乙酸酯钠、1-十二烷基磺酸钠、P-辛基苯磺酸、 1-辛烷磺酸、1-癸烷磺酸钠、辛烷-1-基硫酸钠及月桂基聚氧乙烯(2)醚硫酸钠。(13) (11)所述试剂盒，其中所述含阴离子表面活性剂的试剂还包括缓冲剂。(14) (11)所述试剂盒，其中所述试剂中所含阴离子表面活性剂的浓度为 0. 0001 0. 1 重量 ％。(15) (11)-(14)中任意一项所述试剂盒，其中所述发光底物为二氧杂环丁烷类。(16) (11)-(14)中任意一项所述试剂盒，其中所述酶标记物的酶是碱性磷酸酶。(17) (11)-(14)中任意一项所述试剂盒，其中所述捕捉物为抗体，所述酶标记物 是酶标记抗体。(18) (11)-(14)中任意一项所述试剂盒，其中所述层析试验用具是侧流层析试 验用具或穿流层析试验用具。采取上述(1)所述方法，在利用酶化学发光的层析中可以灵敏地检测出目标物。 如上述(4)所述，含有阴离子表面活性剂的试剂还包括缓冲剂，不仅可以创造一个标记 物-目标物_捕捉物发光的环境，还可以清洗层析试验用具。此外，用上述(11)的试剂盒 在利用酶化学发光的层析中可以灵敏地检测出目标物。又如上述(13)所述，含有阴离子表 面活性剂的试剂还包括缓冲剂，不仅可以创造一个标记物_目标物-捕捉物发光的环境，还 可以清洗层析试验用具。附图说明图1为本专利技术一实施方式涉及的层析试验用具的(a)平面图和(b)侧面图。图2为收放本专利技术一实施方式涉及的层析试验用具的收纳器具10的斜视图。图3为本专利技术一实施方式涉及的层析试验用具的(a)平面图和(b)X-X方向截面图。图4为本专利技术一实施方式涉及的试剂容器的简要结构图。图5为实施例1的发光检测结果的照片。图6为比较例1的发光检测结果的照片。图7为实施例2的发光检测结果的照片。图8为实施例3的发光检测结果的照片。图9为实施例4的发光检测结果的照片。具体实施例方式本实施方式的目标物检测方法是一种用层析试验用具检测试样中所含目标物的 方法，该层析试验具有固定与目标物结合的捕捉物的检测区，该方法包括以下步骤混合试 样和与目标物结合的酶标记物；将所得混合液添加到层析试验用具，用检测区的捕捉物捕 捉与酶标记物结合的目标物；在捕捉了目标物的层析试验用具的检测区添加含有阴离子表 面活性剂的试剂；使发光底物与通过目标物结合到检测区捕捉物的酶标记物的酶发生反 应；通过检测检测区因发光底物和酶反应而发出的光来检测试样中所含目标物。在本说明 书中，所谓“检测目标物”不仅指判断试样中有无目标物，还包括定量目标物。在混合步骤，混合试样和与目标物结合的酶标记物，制备混合液。当试样中含有目 标物时，目标物与酶标记物形成复合物。本实施方式中所使用的试样，只要是有可能含有目标物的液体试样均可，无特别 限定。在本实施方式中使用的试样最好是生物试样。具体而言，可以是血液、血清、血浆、胆 汁、胃肠分泌液、淋巴液、骨髓液、唾液、鼻涕、尿液、组织提取液、组织勻浆、细胞提取液和细 胞勻浆等。试样中所含目标物无特别限定。比如有抗原、抗体、激素、激素受体、凝集素、凝集 素结合型糖类、药物或其代谢物、药物受体、核酸及以上各项的段片等。具体而言，如有细 菌、原生生物和真菌等细胞、病毒、蛋白质、多糖类等。举例来说有流感病毒、副流感病毒、RS 病毒、肺炎支原体、轮状病毒、杯状病毒、冠状病毒、腺病毒、肠道本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用层析试验用具检测试样中所含目标物的方法，所述层析试验用具具有检测区，所述检测区固定有能与所述目标物结合的捕捉物，所述方法包括：混合试样和与目标物结合的酶标记物；将所得混合液添加到所述层析试验用具，用所述检测区的捕捉物捕捉与所述酶标记物结合的目标物；在捕捉到所述目标物的所述层析试验用具的检测区添加含阴离子表面活性剂的试剂；使发光底物与通过所述目标物结合到所述检测区的捕捉物的酶标记物的酶发生反应；及检测所述发光底物和所述酶反应所引起的所述检测区的发光，以此检出所述试样中所含目标物。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：狭间俊介，酒井康裕，
申请(专利权)人：希森美康株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]