一种抗人巨细胞病毒药物的应用制造技术

一种抗人巨细胞病毒药物，其特征在于它是以金银花、大青叶、蒲公英、鱼腥草为原料，按１：１：１：１的重量配比制成的药剂，体外抑毒实验表明该药能有效抑制人巨细胞病毒引起的细胞病变，其作用与更昔洛韦（ＧＣＶ）接近；临床疗效观察表明该药治疗围产期人巨细胞病毒活动性感染有效率达７８．０５％，并能防止孕期ＨＣＭＶ感染的垂直传播，保护胎儿免受感染。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抗病毒药物，特别是抗人巨细胞病毒药物。人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus，HCMV)在人群中感染十分普遍，对于免疫功能受损如器官移植和爱滋病患者，可引起肺炎、肝炎、胃肠炎及视网膜病等，常可危及病人的生命。而妊娠妇女孕早期原发HCMV感染可造成流产、早产、死胎、畸形、IUGR、智力低下及听力损害等。目前，临床上试用于抗HCMV的药物众多，但疗效均不理想。最新研制的新药——更昔洛韦(Ganciclovir,GCV；丙氧鸟苷，DHPG)被认为是最有前途的抗HCMV化疗剂，在国外已广泛应用于器官移植和爱滋病患者HCMV感染的临床预防和治疗。但其副作用大，价格昂贵，且已有耐药性毒株出现，使其临床应用受到限制,HCMV感染也是导致器官移植失败和爱滋病患者死亡的重要原因之一，因此抗HCMV药物的研究已受到国际上的广泛重视。80年代初期曾先后试用阿糖腺苷(Ara-A)、阿昔洛韦(Acyclovir.ACV)、白细胞干扰素(IFA)等防治HCMV感染，其治疗效果均不理想，且毒副作用较大.更昔洛韦(GCV)是最新研制的一种高效、选择性强的广谱抗疱疹病毒化疗剂，于1982年首次合成，它由ACV衍生而来，是脱氧鸟苷的结构类似物，其作用比ACV强50～100倍，且更易吸收，对HCMV的抑制作用是至今发现的抗病毒药中活性最强的药物之一。临床试验表明其治疗AIDS及器官移植者继发HCMV感染，总有效率达70％。但目前文献报道临床病例数有限，其结论亦并非一致。而且GCV价格昂贵，可引起骨髓抑制、肝功异常、肾功能不全等多系统严重并发症使某些病例被迫中止治疗；还可抑制精子产生和导致妇女永久性不孕，因此该药禁用于孕妇及哺乳期妇女，其临床研究有待深入。妇女怀孕期间，由于免疫抑制，亦是HCMV的高发人群，活动性感染率可达11.23％，其垂直传播可对胎、婴儿生长发育造成严重影响，但国内外尚无治疗育龄妇女和孕妇HCMV感染的有效药物。因此，如何对HCMV感染尤其是孕期感染进行有效的治了，是当前医学界面临的难题。本专利技术的目的是提供一种用于治疗HCMV感染，特别是孕期HCMV感染的中药，使其具有能有效抑制HCMV引起的细胞病变和有效药治疗围产期HCMV活动性感染，并能防止孕期HCMV感染的垂直传播，保护胎儿免受感染，且无任何毒副反应，药源丰富，经济方便，安全范围大，病人易于接受，减少低质儿的出生等优点。本专利技术提供的用于治疗HCMV感染，特别是孕期HCMV感染的中药，是以金银花、大青叶、蒲公英、鱼腥草为原料，按1∶1∶1∶1的重量配比制成的药剂，它可以是任何一种药剂学上所说的剂型，其颗粒剂按以下方法制成(1)取处方中的鱼腥草，加水10～15倍浸泡2小时，蒸馏5小时，收集挥发油0.5ml/kg以上，溶解于5～10倍乙醇中，密封，避光保存备用。(2)取处方中的金银花、大青叶、蒲公英加15倍量水浸泡45分钟后，煎煮1.5小时，取汁，药渣再加12倍量水煎煮1.5小时，取汁，合并煎液，静置，过滤；滤液减压浓缩至相对密度为1.10(60～65℃)，缓缓加入约2倍量乙醇，边加边搅拌，使含醇量为65％(ml/ml)，静置沉淀；取上清液，沉淀用少量65％乙醇洗涤，过滤，洗液与滤液合并，减压回收乙醇至无醇味、相对密度为1.05(60～65C)；加水1倍量充分搅拌，混匀，静置沉淀完全，过滤，滤液用20％氢氧化钠溶液调查pH值为5.0～5.5，减压浓缩至相对密度为1.35～1.38(80～90℃)的清膏。取清膏1份，加入75～85％的乙醇，使含醇量约为15～20％，充分混匀，加糊精2.5份，天冬糖0.02份，制软材，制颗粒，60～70℃干燥，整粒，置远红外烘烤箱中于60～70℃干燥4小时。(3)将鱼腥草挥发油乙醇液均匀喷入颗粒中，密闭24小时。(4)检验，合格后分装于铅塑复合膜袋中，每袋10g。体外实验资料根据卫生部药政局93年7月颁布的《新药临床前研究指导原则汇编(药学、药理学、毒理学)》关于抗病毒试验要求设计，采用病变抑制法进行。(一)病毒和细胞HCMV AD169标准毒株，人胚肺成纤维细胞(HEL)。(二)药物本专利技术颗粒制剂为受试药物，每支20ml，每毫升含生药量1g；更昔洛韦(GCV)为阳性对照药(购自湖北省医学工业研究所)，粉针剂，250mg/支。(三)实验方法1．将两种药物倍比稀释，测定其在不同浓度下的抗HCMV作用。2．设定药物浓度(本专利技术颗粒4mg/ml,GCV 25ug/ml)，测定在一定药物浓度下、不同时间的抗HCMV作用。3．本专利技术药物对HCMV晚期mRNA的抑制作用HEL感染HCMV AD169后，于加药的不同时间提取培养物的总RNA，采用定量RT-PCR法测定HCMV晚期mRNA。RT-PCR试剂盒购自美国Promega公司，操作按试剂盒说明进行，其结果在激光密度扫描仪上扫描分析，以样本的扩增条带与阳性对照条带的扫描峰面积比表示HCMV晚期mRNA的表达水平。(四)结果见表1、2、3表1 本专利技术药物和GCV在不同浓度下抗HCMV的结果比较本专利技术药物组(mg/ml)GCV组(ug/ml) 对照组20 10 5 2.5 1.25100 50 25 12.56.25 3.125 病毒 药物-± + ++ +++ - - ± ±～+ ++++ +++ -(注细胞病变的记录——“-”细胞无病变，“+”25％细胞病变，“++”50％细胞病变，“+++”75％细胞病变，“++++”100％细胞病变。)表1可见本专利技术药物最大无毒浓度(TD0)=20mg/ml，最小有效浓度(MTC)=5mg/ml；治疗指数(TI)=4；半数有效浓度(IC50)=5mg/ml。阳性对照药GCV的TD0=100ug/ml,MTC=12.5ug/ml,TI=8,IC50=12.5ug/ml。在TD0和MTC之间，随着药物浓度下降，本专利技术药物与GCV抑制HCMV的作用减弱；两者IC50与病毒对照相比，病变程度有显著差异。表2 本专利技术药物和GCV在不同感染时间抗HCMV的结果比较24 48 72 96 120144168(小时)病毒对照 -+++++++++++++本专利技术药物 --++ + + ++GCV --++ + + ++表2可见，病毒对照组在感染48小时就已出现细胞病变(CPE)，并随感染时间的延长不断加重，感染168小时全部发生病变；而加药的两组感染后72小时才出现CPE，并且进展缓慢，感染168小时后CPE仅为“++”，明显轻于病毒对照组。表3本专利技术药物和GCV干预不同时间HCMV感染细胞晚期mRM的表达水平12 24 48 72 96 120(小时)病毒对照0.440.560.580.640.840.87本专利技术药物 0.350.270.340.410.540.65GCV0.390.300.290.380.440.58表3可见，本专利技术药物及GCV对HCMV晚期mRNA的抑制作用在感染12小时就已出现，在24～48小时达到高峰，此后随感染时间的延长，晚期mRNA的水平又趋上升，但仍明显低于病毒对照组，且两者的抑制作用基本相似。临床应用资料㈠、对象本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗人巨细胞病毒药物，它是以金银花、大青叶、蒲公英、鱼腥草为原料，按１∶１∶１∶１的重量配比制成的药剂。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：闻良珍，邢玮，陈素华，曾万江，邓东锐，凌霞珍，李鸣真，叶望云，陆付耳，
申请(专利权)人：同济医科大学附属同济医院，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]