一种利用LAMP快速检测中国番木瓜曲叶病毒的方法技术

本发明专利技术提供了一种快速检测中国番木瓜曲叶病毒的方法，属植物保护领域。根据中国番木瓜曲叶病毒核苷酸序列设计LAMP引物(P_F3，P_B3，P_FIP，P_BIP)。样品提取总DNA后，进行LAMP反应，反应产物经电泳或者荧光染料的方法实现中国番木瓜曲叶病毒的检测。该方法操作简单，无需PCR仪等特殊仪器，同时又克服克服了传统的生物学、血清学等方法上存在的问题，是一种简捷、快速、灵敏而经济的检测方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种快速检测中国番木瓜曲叶病毒的方法，属植物保护领域。
技术介绍
中国番木瓜曲叶病毒(Papaya leaf curl china virus, PaLCCNV)是一种重要的植物病毒，属于双生病毒科菜豆金色花叶病毒属，传播介体为烟粉虱。该病毒最早是在我国广西的番木瓜上检测到的，所以称为中国番木瓜曲叶病毒，除危害番木瓜外，该病毒也危害番茄等作物，主要表现叶片变小，上卷，叶缘及叶脉之间黄化，植株矮化等症状，对番茄的产量和质量影响严重。2007年该病在河南番茄上大面积发生危害，仅开封市开封县就有2000 个日光温室受到毁灭性的危害，直接经济损失近2000万元。2009年在江苏等地作物上也有检测到，显示该病毒也有蔓延扩散的迹象，是一个潜在的威胁。环介导恒温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP) 最早是由Notomi T等在2000年专利技术的，是一种基于高灵敏链置换技术的恒温核酸扩增方法，其工作原理为针对靶基因的6个区域设计了 4个特异引物，利用一种链置换DNA聚合 Sl-Bst (Bacillus stea本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种利用ＬＡＭＰ快速检测中国番木瓜曲叶病毒的方法，包括以下步骤：（１）引物设计：根据ＮＣＢＩ上已报道的中国番木瓜曲叶病毒核酸序列设计引物，引物序列如下：Ｐ－Ｆ３：５｀－ＣＡＡＡＣＴＴＣＣＣＴＡＴＧＣＡＡＴＣＧ－３｀Ｐ－Ｂ３：５｀－ＧＡＴＴＴＧＡＡＴＴＡＡＡＴＡＧＧＣＴＴＴＧＡＧＧ－３｀Ｐ－ＦＩ　Ｐ：５｀－ＧＣＣＧＣＴＴＴＴＧＧＡＴＴＴＴＧＡＡＴＴＴＴＧＡ－ＡＴＧＧＧＴＣＣＴＴＡＴＴＴＡＴＡＴＧＴＧＡＧ－３｀Ｐ－ＢＩ　Ｐ：５｀－ＴＣＣＧＴＡＴＡＡＴＡＴＴＡＣＣＧＧＡＴＧＧＣＣ－ＧＴＴＴＴＡＡＡＴＧＧＡＧＧＡＣＡＴＴＴＣＴＴＴＧ－３｀（２）总ＤＮＡ提取：取１０ｍｇ番茄病叶于１．５ｍＬ离心管，加...

【技术特征摘要】
1.一种利用LAMP快速检测中国番木瓜曲叶病毒的方法，包括以下步骤(1)引物设计根据NCBI上已报道的中国番木瓜曲叶病毒核酸序列设计引物，引物序列如下P-F3 5~-CAAACTTCCCTATGCAATCG-3~P-B3 5~-GATTTGAATTAAATAGGCTTTGAGG-3、P-FI P 5“-GCCGCTTTTGGATTTTGAATTTTGA-ATGGGTCCTTATTTATATGTGAG-3“P-BI P 5~-TCCGTATAATATTACCGGATGGCC-GTTTTAAATGGAGGACATTTCTTTG-3、(2)总DNA提取取IOmg番茄病叶于1.5mL离心管，加IOOyL 0. 5mol/L NaOH，勻浆后5000rpm离心 5min,上清液用0. lmol/L Tris-HCl (ρΗ8· 0)稀释100倍，取1 μ L作为模板进行PCR扩增。(3)LAMP 反应反应体系总体系为25 μ L，其中DNA 2yL, Bst DNA聚合酶(8U/μ L) 1 μ L，其它组分终浓度分别为 P-F3 和 Ρ-Β30. 2 μ mol/L ；P-FIP ...

【专利技术属性】
技术研发人员：季英华，周益军，程兆榜，周彤，杨杰，周晓伟，蔡振东，刘莉，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：84