一种定量检测乙型肝炎病毒（HBV）的方法及其试剂盒技术

一种定量检测乙型肝炎病毒（HBV）的方法及其试剂盒，包括采用纳米磁珠法提取样品中乙肝病毒核酸作为标本模板，应用TaqMan荧光探针技术完成对该标本模板实时PCR检测过程，所述TaqMan荧光探针和竞争性内标分别标记下列其中一种不同颜色的荧光基团：FAM、Alexa546、JOE、HEX、TET；通过监测实时PCR反应体系中荧光信号的变化情况实现对样品中乙型肝炎病毒（HBV）的定量检测；试剂盒包括核酸提取试剂、核酸扩增试剂、对照品、标准品、内标。本发明专利技术从根本上解决现有荧光探针定量PCR技术存在的准确性差和灵敏性低的问题。适用于临床血液检测和诊断，监测和评价药物的疗效，也可用于中心血站血液筛查以及流行病学调查。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学临床诊断领域，具体指一种定量检测乙型肝炎病毒(HBV)核 酸方法及试剂盒。
技术介绍
在我国多种流行性传染病的病原微生物，如艾滋病，病毒性肝炎，结核，梅毒等，对 人类健康造成了巨大危害。临床上主要应用免疫学和微生物学等方法对各种病原微生物进 行检测和诊断，由于其灵敏性低和周期长等限制，仍不能完全杜绝阳性病原体的漏检和不 能及时准确地诊断。近年来核酸分子检测技术在检验医学和临床研究中显示出强大的优 势，相比较免疫诊断技术具有灵敏度好、特异性强和诊断快速等优点。但这项技术在进行确 定病原体载量时仍存在操作复杂和灵敏性低等缺点，检测技术需要改进和提高。需要解决 的技术关键是进一步提高检测的特异性和灵敏度，降低成本和方法的标准化。核酸分子检测技术中的荧光定量PCR技术已广泛应用于分子生物学研究和医学 研究等领域。这项技术不仅实现了对DNA/RNA模板的定量，而且具有灵敏度和特异性高、能 实现多重反应、自动化程度高、无污染、实时和准确等特点，可以对人类免疫缺陷病毒、肝炎 病毒、流感病毒、人类乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒、EB病毒、巨细胞病毒、梅毒螺旋菌、结核分 枝杆菌、淋球本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种定量检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：采用纳米磁珠法提取样品中乙肝病毒核酸作为模板，应用ＴａｑＭａｎ　荧光探针技术完成对该标本模板实时ＰＣＲ检测过程，并设计竞争性内标，通过检测内标是否正常来监测待测样本中是否具有ＰＣＲ抑制物，避免ＰＣＲ假阴性；其中：通过专用软件，根据分析比较乙型肝炎病毒目的基因序列，设计高保守性、特异性和高效性的ＴａｑＭａｎ荧光探针和引物以及竞争性内标的探针和引物，所述ＴａｑＭａｎ荧光探针和竞争性内标分别标记下列其中一种不同颜色的荧光基团：ＦＡＭ、Ａｌｅｘａ５４６、ＪＯＥ、ＨＥＸ、ＴＥＴ；所述实时ＰＣＲ产物在６０－１２０个碱基对范围；...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李望丰，李静芝，周凯，刘立侠，
申请(专利权)人：东北制药集团辽宁生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：89