本发明专利技术公开了一种抗乙型肝炎病毒的组合物及其制备方法与应用，制备所述组合物的药材为龙胆科獐牙菜属植物；制备方法为：乙醇提取，滤液浓缩；浸膏加水混匀；依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取；石油醚相浓缩得到所述组分A；乙酸乙酯相先经大孔树脂洗脱，洗脱液浓缩后用硅胶柱进行柱层析，收集洗脱液，浓缩得到所述组分B；正丁醇相用大孔树脂洗脱后浓缩得到所述组分C。所述组合物包括组分A为1-50份、组分B为1-50份、组分C为1-50份；该组合物毒性低，组合物比单组份或双组份抑制乙肝病毒能力更强，停药后仍能防止HBV-DNA水平反弹，因此能广泛应用于乙肝病毒的治疗。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药
，具体涉及一种抗乙型肝炎病毒的组合物及其制备方法 与应用。
技术介绍
乙型肝炎病毒（HBV)感染是一个世界性的健康问题。全球20亿人口受过HBV感 染，慢性患者达3. 6亿，每年死亡患者达52万（5万死于急性HBV患者，47万死于肝硬化和 肝癌）。我国HBV人群感染率57. 6%，乙肝表面抗原（HBsAg)阳性者9. 75%，全国现症慢性 乙型肝炎约3000-4000万。乙型肝炎病毒与肝硬化和原发性肝癌的关系密切，乙肝病毒感 染已成为影响人类寿命的九大疾病之一。乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒（HBV)引起的、以 肝脏炎症病变为主，可引发多器官损害的一种疾病，如治疗不佳，甚至会转变为肝硬化和肝 癌。 HBV-DNA即是乙肝病毒的脱氧核糖核酸（即乙肝病毒基因），它是HBV感染最直 接、特异性强和灵敏性高的指标。HBV-DNA阳性，提示HBV复制和有传染性。HBV-DNA越高 表示病毒复制越厉害，传染性强。目前治疗乙型肝炎的药物主要包括干扰素，核苷酸类似物 和中医中药。以干扰素为代表的生物类药物治疗乙肝毒性大、不良反应严重而且价格昂贵， 患者经济负担大，临床难以广泛使用；核苷酸类似物（拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦、替比 夫定等）对乙型肝炎病毒有良好的抑制作用，但这些合成抗病毒药的结构类型单一，存在 停药后复发率高，对HBeAg作用不明显，需长期用药致病毒耐受等问题；中医中药优点是作 用机理全面，具有抗病毒、调节免疫、抗炎抗肝纤维化等多重作用，但是却起效慢，抗病毒的 速度难以和西药相比。因此，研发新型的抗HBV药物以治疗乙肝，对传染源的控制及疾病的 转归具有极其重要的社会意义和经济意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是研发出一种毒性低，停药后仍然能抑制乙肝病毒的药物。为实现 以上目的，本专利技术可通过如下的技术方案实现： -种抗乙型肝炎病毒的组合物，制备所述组合物的原料药材为龙胆科獐牙菜属植 物；制备所述组合物的制备方法为：首先取所述原料药材，加乙醇溶液提取，过滤，合并滤 液后，浓缩得到浸膏；取所得浸膏，加入水混匀；依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取；所 得石油醚相直接浓缩得到所述组分A ;所得乙酸乙酯相先经大孔树脂洗脱，洗脱液浓缩后 用硅胶柱进行柱层析，收集洗脱液，浓缩得到所述组分B ;所得正丁醇相用大孔树脂洗脱后 浓缩得到所述组分C ;将以上三种组分按照组分A为1-50份、组分B为1-50份、组分C为 1-50份混合即得到所述组合物。 所述龙胆科猜牙菜属植物优选为川西猜牙菜（Swertia mussotii Franch.)、抱莖 猜牙菜（Swertia franchetiana H. Smith)、藏猜牙菜（Swertia racemosa(Griseb.)Wall. ex C.B. Clarke)、祁连猜牙菜（Swertia przewalskii PissjauL )、红直猜牙菜（Swertia erythrosticta Maxim.)； 制备所述的组合物时，首先取所述原料药材用药部位1份，粉碎，加入70%~95% 的乙醇溶液5-12份混合，回流提取，过滤，合并滤液后，浓缩得到浸膏；取所得浸膏，加入 2~3倍体积比的水混匀；依次用3~4倍体积比石油醚、4~5倍体积比乙酸乙酯、4~6 倍体积比正丁醇萃取。 所述乙酸乙酯相的处理方法为，将所述乙酸乙酯相用甲醇溶解，再以1-2份大孔 树脂/聚酰胺、1-3份大孔树脂/微晶纤维素为比例的混合填料装柱，并依次用10% -98% 甲醇水溶液梯度洗脱，根据洗脱液颜色由无色变有色开始收集，至棕色变为浅黄色收集结 束，将洗脱液浓缩后再用200-300目硅胶柱，石油醚：乙酸乙酯=1:1洗脱，收集洗脱液，浓 缩得到所述组分B。 所述正丁醇相的处理方法为，将所述正丁醇相用甲醇溶解，以1-3份大孔树脂/聚 酰胺、1-2份大孔树脂/微晶纤维素为比例的混合填料装柱，并依次用12% -98%甲醇水溶 液梯度洗脱，根据洗脱液颜色由无色变有色开始收集，至棕色变为浅黄色收集结束，将洗脱 液浓缩，得到所述组分C。 制备所述的组合物的方法，首先取所述原料药材，加乙醇溶液提取，过滤，合并滤 液后，浓缩得到浸膏；取所得浸膏，加入水混匀；依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取；所 得石油醚相直接浓缩得到所述组分A ;所得乙酸乙酯相先经大孔树脂洗脱，洗脱液浓缩后 用硅胶柱进行柱层析，收集洗脱液，浓缩得到所述组分B ;所得正丁醇相用大孔树脂洗脱后 浓缩得到所述组分C ;将以上三种组分按照组分A为1-50份、组分B为1-50份、组分C为 1-50份混合即得到所述组合物。 优选地，首先取所述原料药材用药部位1份，粉碎，加入70 %~95 %的乙醇溶液 5-12份混合，回流提取，过滤，合并滤液后，浓缩得到浸膏；取所得浸膏，加入2~3倍体积 比的水混匀；依次用3~4倍体积比石油醚、4~5倍体积比乙酸乙酯、4~6倍体积比正丁 醇萃取。 优选地，所述乙酸乙酯相的处理方法为，将所述乙酸乙酯相用甲醇溶解，再以1-2 份大孔树脂/聚酰胺、1-3份大孔树脂/微晶纤维素为比例的混合填料装柱，并依次用 10%-98%甲醇水溶液梯度洗脱，根据洗脱液颜色由无色变有色开始收集，至棕色变为浅黄 色收集结束，将洗脱液浓缩后再用200-300目硅胶柱，石油醚：乙酸乙酯=1:1洗脱，收集 洗脱液，浓缩得到所述组分B。 优选地，所述正丁醇相的处理方法为，将所述正丁醇相用甲醇溶解，以1-3份大孔 树脂/聚酰胺、1-2份大孔树脂/微晶纤维素为比例的混合填料装柱，并依次用12% -98% 甲醇水溶液梯度洗脱，根据洗脱液颜色由无色变有色开始收集，至棕色变为浅黄色收集结 束，将洗脱液浓缩，得到所述组分C。 所述的组合物在制备抗乙肝病毒药物中的应用。 本专利技术的有益效果为：毒性低，组合物比单组份和双组份抑制乙肝病毒能力强，停 药后仍能降低HBV-DNA水平，能广泛应用于乙肝病毒的治疗。【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术做更进一步地解释。下列实施例仅用于说明本专利技术，但 并不用来限定本专利技术的实施范围。 实施例1 : 取龙胆科獐牙菜属植物一一川西獐牙菜的干燥全草500g，粉碎，与70%的乙醇溶 液按固液质量比1:5混合，回流提取4次，每次3小时，过滤，合并滤液并回收乙醇试剂。将 滤液置于旋转蒸发仪中浓缩制得浸膏，加入浸膏2倍体积比的水混合均匀，依次用3倍体积 的石油醚、4倍体积的乙酸乙酯、4倍体积的正丁醇萃取5次。将石油醚相直接浓缩为组分A ; 以乙酸乙酯相的浸膏为原料，与甲醇按Ig :6mL混合，加热搅拌至完全溶解，热过滤得滤液， 将滤液以大孔树脂/聚酰胺、大孔树脂/微晶纤维素为混合填料（两者质量比为1:3)，有机 溶剂湿法装柱，依次用10% -90%甲醇水溶液梯度洗脱，洗脱流速为100mL/min。根据洗脱 液颜色由无色变有色开始收集，至棕色变为浅黄色收集结束，将洗脱液浓缩后再用200-300 目柱层层析硅胶进行柱层析，用石油醚：乙酸乙酯=1:1冲柱，收集洗脱液，得到所述组分 B ;最后将正丁醇相浸膏与甲醇按Ig :8mL混合，加热搅拌至完全溶解，热过滤得滤液，将滤 液以大孔树脂/聚酰胺、大孔树脂/微晶纤维素为混本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗乙型肝炎病毒的组合物，其特征在于，制备所述组合物的原料药材为龙胆科獐牙菜属植物；制备所述组合物的制备方法为：首先取所述原料药材，加乙醇溶液提取，过滤，合并滤液后，浓缩得到浸膏；取所得浸膏，加入水混匀；依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取；所得石油醚相直接浓缩得到所述组分A；所得乙酸乙酯相先经大孔树脂洗脱，洗脱液浓缩后用硅胶柱进行柱层析，收集洗脱液，浓缩得到所述组分B；所得正丁醇相用大孔树脂洗脱后浓缩得到所述组分C；将以上三种组分按照组分A为1‑50份、组分B为1‑50份、组分C为1‑50份混合即得到所述组合物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：廖志新，徐晨，左波，孙洪发，纪兰菊，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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