本发明专利技术提供了用于治疗乙型肝炎病毒(HBV)感染的组合物和方法以及用于鉴定适于治疗HBV感染的化合物或组合物的方法。此外，本发明专利技术提供了一种适宜的非哺乳动物模型，所述模型能够用于筛选能够在哺乳动物中抑制HBV复制或治疗HBV感染的化合物或组合物。特别地，本发明专利技术提供了通过抑制HBV x蛋白与Bcl-2家族蛋白相互作用或通过降低Bcl-2家族蛋白的表达水平治疗乙型肝炎感染的组合物和方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】 相关申请的交叉引用 本申请要求于2012年9月26日提交的美国临时申请号61/706, 083的优先权，其 全部内容通过引用并入本申请。 关于联邦资助研究的声明 本专利技术在美国国立卫生研究院提供的基金号为GM059083、GM079097和GM088241 的政府支持下进行。政府享有本专利技术的一些权益。 专利
本专利技术涉及治疗乙型肝炎病毒（HBV)感染的组合物和方法。特别地，本专利技术涉及 通过调节HBV X蛋白与Bcl-2家族蛋白之间的相互作用或通过降低Bcl-2家族蛋白的表达 水平治疗乙型肝炎感染的组合物和方法。 专利技术背景 世界上有超过4亿人受乙型肝炎病毒（HBV)感染并且其是肝细胞癌（HCC)和其他 肝脏疾病的主要起因。其已在多个国家中成为主要的健康问题。尽管目前HBV疫苗能够阻 止新型HBV感染，但是对于慢性HBV携带者仍没有有效的治疗方法，其中有很多人将最终发 展成多种肝脏病症和HCC。 研究已显示HBV编码的关键致病和致癌蛋白之一是17-kDa HBV X蛋白（HBx)13HBx 是一种多功能HBV蛋白，已发现其对HBV感染和发病机制具有关键作用并且能够导致肝细 胞癌。如其名称所恰如其分体现的，HBx是一种能够与多种体外系统中数量巨大的多种蛋 白结合的神秘莫测的蛋白。不幸的是，对HBx确切的宿主靶点和作用机制还知之甚少。事 实上，到目前为止鉴定HBx的细胞靶点及其作用机制仍是一个重大的挑战。由于HBx在HBV 感染和发病机制中具有作用，据信对特异性的HBx细胞靶点的鉴定将为慢性HBV携带者的 治疗提供重要的治疗潜能。 因此，存在对于鉴定HBx的细胞靶点或配体的需求。此外，存在对于通过靶向HBx 的细胞靶点治疗HBV感染的需求。 专利技术概述 本专利技术的一些方面基于本专利技术人的发现：人抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-XL是HBx的 宿主靶点。此外，本专利技术人发现了 HBx与Bcl-2、Bcl-XL或后两者之间的相互作用是刺激胞 质钙升高、HBV病毒复制和诱导细胞死亡所需的。本专利技术人关于Bcl-2蛋白作为HBx诱导 的病毒复制和宿主细胞死亡的宿主靶点的这些发现对于鉴定和/或生产用于治疗慢性HBV 患者的组合物是有用的。 研究已发现HBV病毒DNA滴度高的患者更可能发展成HCC。因此，在本专利技术的一 些实施方式中，本专利技术人的发现能够用于显著降低HBV的复制，从而减小发展成HCC的可能 性。事实上，本专利技术人在本申请中公开的发现能够通过例如显著减少HBV的复制用于治疗 与HBV感染相关的多种临床状况。能够由本专利技术的组合物和方法治疗的示例性的临床状况 包括但不限于由HBV活化的坏死和凋亡诱导的宿主炎症、肝硬化、HCC和肝炎。 在一些实施方式中，本专利技术的组合物与HBx的Bcl-2同源性3 (BH3)样基序（即， BH3结构域）、Bcl-2或Bcl-xL或者其他Bcl-2家族成员结合。 附图简述 图Ia显示了 peptaibol TK序列比对。红色框中突出显示的是序列之间的微小差 异。 图Ib是显示p印taibol TK在ced_l(el735)胚胎中导致更加持续的细胞尸体 (cell corpse)产生的柱状图。所检查的胚胎阶段为逗号期、1.5倍、2倍、2. 5倍、3倍和4 倍。y轴表示记录的细胞尸体平均数和误差线表示SEM。 图Ic是显示peptaibol TK在ced-1 (el735)动物的种系中导致更加持续的细胞尸 体的柱状图。记录L4进入成虫蜕皮后24小时和48小时动物中生殖细胞的尸体（η = 30)。 图Id是显示对秀丽线虫（C. elegans)核心凋亡通路中peptaibol TK革巴点进行 化学遗传分析的柱状图。对下述细胞死亡突变体进行Peptaibol TK处理：ced-1 (el735)、 ced-1 (el735) ;egl-l(n3082)、ced-1 (el735) ;ced-9(nl950gf)、ced-1 (el735); ced-4(nll62)、ced_l(el735) ;ced_3(n2433)和 ced-l(el735)smIslll;ced_4(nll62)〇 smlslll是携带Pegl iacCED-3的整合的转基因。在各次实验中记录2倍阶段的胚胎。 图Ie是显示p印taibol TK能够与EGL-I协同作用而诱导凋亡的柱状图。使用 peptaibol TK处理ced-1 (el735) ;egl_l(n3082) ;smls82动物并对其进行热休克处理。记 录2倍阶段胚胎的细胞尸体。smls82是携带PhspEGL-I的整合的转基因。数据为平均值 土SEM。在各次实验中记录超过20个的胚胎（b，d，e)或超过30只动物（c)。#P〈0. 01 ; #*P〈0. 001。 图If是显示在秀丽线虫中p印taibol TK与核心凋亡通路相互作用的示意图。 Peptaibol TK可能在EGL-I上游或与之平行的诱导和增强凋亡。 图2是显示在秀丽线虫中p印taibol TK增强HBx诱导的细胞死亡的图。使用5 μΜ peptaibol TK处理两种不同的HBx转基因动物smls98和bzls8 ;smEx (Pmec 7ΗΒχ)和缺乏HBx 表达的两种对照转基因动物smls3和bzls8。smls98是含有Pniee 3GFP和Pniee 7ΗΒχ的整合的 转基因。smls3是含有3GFP的整合的转基因，其在包括PLM触觉感受器神经元的10个 秀丽线虫感觉神经元中指导GFP表达。bzls8是含有P_ 4GFP的整合的转基因，其在包括 PLM神经元的6个秀丽线虫触觉感受器神经元中指导GFP表达。使用Nomarski显微镜记录 GFP阳性PLM神经元的存在情况。数据以三类表示：两个PLM均丢失（黑色柱）、一个PLM 丢失（灰色柱）和无 PLM丢失（白色柱）。y轴表示每一类的百分率。柱子下方的百分数 表示在各次实验中的总PLM缺失百分比。在各次实验中记录超过40只动物。 专利技术详述 乙型肝炎病毒（HBV)感染能够导致多种临床状况包括但不限于发展成肝炎 (hepatitis)、肝脏炎症（liver inflammation)、肝硬化和肝细胞癌（HCC)。HBV感染是在 世界范围内导致患病和死亡的主要原因 。HBV X蛋白（HBx)是HBV发病的重要效应器，但 其细胞靶点和作用机制到目前为止仍不明确。本申请披露了专利技术人的一个发现，在哺乳动 物的肝细胞中HBx与抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL通过Bcl-2同源性3 (BH3)样基序相互作 用。本专利技术人还观察到阻止HBx与Bcl-2和Bcl-xL的结合的BH3-样基序中的突变消除了 肝细胞中由HBx的表达导致的胞质钙升高和细胞死亡并使HBV的复制严重受损。由HBx的 BH3样基序中的突变引起的HBV复制极大降低能够基本上被胞质钙的恢复所挽救。这些结 果表明HBx与Bcl-2家族成员结合并且随后使得胞质钙升高对于HBV病毒的复制而言是重 要的。 而且，通过RNA干扰敲低Bcl-2或Bcl-xL导致在肝细胞中出现由HBx诱导的钙升 高减少和病毒复制减少。这些结果进一步表明HBx通过其BH3样基序靶向Bcl-2蛋白，其 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于在受试者中治疗乙型肝炎感染的方法，所述方法包括对需要此类治疗的受试者施用组合物，所述组合物(i)能够在所述受试者中抑制乙型肝炎病毒X蛋白与Bcl‑2家族成员蛋白结合；(ii)能够在所述受试者中降低Bcl‑2家族成员蛋白的表达；或(iii)其组合。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：D薛，X耿，
申请(专利权)人：科罗拉多大学董事会法人团体，
类型：发明
国别省市：美国;US
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