【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种对乙型肝炎病毒易感的人胎肝细胞分离、冻存与复苏的方法及应用，步骤为：将新鲜的肝组织经暴露的血管用灌注溶液冲洗干净，直至消化完全；然后将新鲜分离的肝细胞置于含有细胞洗液的培养皿中过细胞筛得到单细胞悬液；清洗后沉淀单细胞并重悬，用渐进冻存的方法，保存于液氮；复苏的胎肝细胞通过优化高活力胎肝细胞的铺板密度、Percoll离心介质纯化低活力胎肝细胞以及后续培养程序，建立紧密的细胞单层培养。本专利技术可大量分离、保存及高效率复苏胎肝细胞，复苏的胎肝细胞能保持良好的肝细胞特性、分化状态及对乙型肝炎病毒易感性，从而缓解原代肝细胞资源稀缺问题，并建立了稳定的体外抗乙型肝炎病毒筛药平台。【专利说明】一种对乙型肝炎病毒易感的人胎肝细胞分离、冻存与复苏的方法及应用
本专利技术涉及医药生物
，具体涉及一种对乙型肝炎病毒易感的人胎肝细胞分离、冻存与复苏的方法及应用，该方法可大量分离、冻存与复苏人胎肝细胞，复苏后的胎肝细胞保持良好的肝细胞功能以及对乙型肝炎病毒易感性。
技术介绍
人原代肝细胞(英文缩写为PHHs)目前被认为是最理想的体外肝特异...
【技术保护点】
一种人胎肝细胞分离、冻存与复苏的方法，包括以下步骤：1）已死胎儿新鲜肝组织经暴露的血管用灌注溶液I灌注，直至肝组织中血液被冲洗干净；2）用37℃预热的灌注溶液II灌注步骤1）中冲洗干净的肝组织，直至肝组织失去弹性消化完全；3）将步骤2）消化完全的肝组织转移至含有细胞洗液的培养皿中，抖落消化好的细胞，形成细胞悬液；4）将步骤3）中细胞悬液通过70μm的细胞筛，得到单细胞悬液；5）将步骤4）获得的单细胞悬液在800?转/分钟和4℃条件下，离心5分钟沉降，用细胞洗液重悬，重复离心二次；6）利用台酚蓝染色法计算步骤5）中重悬细胞的细胞密度与细胞活力，细胞活力为60%~95%时冻存；...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：胡康洪，周明，祁燕，李家福，成细瑶，
申请(专利权)人：康珞生物科技武汉有限公司，
类型：发明
国别省市：
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