一种联合疫苗，含有由博代氏杆菌所产皮肤坏死毒素的类毒素和由巴斯德氏菌所产皮肤坏死毒素的类毒素。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及预防猪传染病的药物。更具体地说，本专利技术涉及一种博代氏杆菌所产皮肤坏死毒素地改良的类毒素，一种含有该类毒素和巴斯德氏菌所产皮肤坏死毒素的类毒素的类毒素混合物以及该类毒素的制备方法。
技术介绍
萎缩性鼻炎(以下简称AR)是一种猪慢性呼吸道疾病，具有极强的传染性，其原发症状有鼻甲萎缩，鼻发育不全，鼻出血，鼻部弯斜，并引起其他呼吸道疾病等等。已知该病由产毒的支气管败血性博代氏杆菌(以下简称“Bb”)和产毒的出血败血性巴斯德氏菌(以下简称“Pm”)引起，这两种菌可使上呼吸道粘膜感染。Bb作为一种粘附因子，具有血红细胞凝集作用和积聚作用，因而容易附着于鼻粘膜，而Pm不具这样的粘附因子，因此不能由其自身定殖。所以，为了建立Pm感染，在鼻粘膜部位引起损害的一种易感因子是必须的，而这样一种有代表性的易感因子就是Bb。已知与引起鼻粘膜损害有关的病原学因子是一种气管细胞毒素和一种皮肤坏死毒素。在一个实验性感染试验中，先用Bb使猪感染，几天后接着用Pm进行鼻内感染，结果引发如在一个牧场里所观察到的那样严重的AR。博代氏杆菌属包括百日咳博代氏杆菌、付百日咳博代氏杆菌、支气管败血性博代氏杆菌以及avium博代氏杆菌等。这些杆菌产生各种具有生物学活性的物质。Bb皮肤坏死毒素(以下简称“BbT”)就是这样的物质之一，可以由任一种博代氏杆菌产生。已经发现，具有诸如出血坏死活性，引起鼻甲萎缩的活性，引起鼻发育不全的活性，致死活性，平滑肌血管收缩活性，引起局部血循环阻断活性，引起脾萎缩活性，抑制抗体产生的活性等生物活性的BbT在博代氏杆菌病中起重要作用，而且还发现，BbT在小猪肺炎病灶形成过程中也起着重要作用(Roop II，R.M.et al.，Infect.Immun.，55，p.217-222(1987))。另一方面，一部分出血坏死性巴斯德氏菌，或一部分非典型巴斯德氏菌可产生Pm皮肤坏死毒素(以下简称“PmT”)。业已证实，具有诸如出血坏死活性，致鼻甲萎缩的活性，致发育不全的活性，致死活性，致局部血循环阻断的活性和致脾萎缩的活性等生物活性的PmT，在由产毒性Pm引起的疾病方面起重要作用。而且还发现，PmT与由产毒性Pm所致猪肺炎病灶的形成密切相关(Iwatsu，S.and Sawada，T.；Jpn.J.vet.Sci.，50，p.1200-1206(1988))。虽然BbT和PmT二者都不被分泌入培养基中，而是在菌细胞中积蓄起来，但它们在长期的培养后，由于溶菌作用，可以从菌细胞内释放出来，进入培养基上清液中。在体内过程中，由于溶菌作用从菌细胞中释放出来的皮肤坏死毒素可影响生命体。在上面提及的情况下，皮肤坏死毒素在生命体中的保护作用尚不清楚，为了阐明这种保护作用的机理，需要开发一种大规模制备皮肤坏死毒素的方法和开发一种皮肤坏死毒素的类毒素，用于预防该病。但是，皮肤坏死毒素由于其自身的下述性质一直难于纯化对热的不稳定性，在纯化操作进行过程中容易引起自身凝集，与菌细胞衍生的诸如脂质、酸性蛋白和疏水物质等这样一类物质形成复合物。而且，鉴于BbT和PmT尽管具有相似的生物活性但没有免疫学交叉反应性，从兽医和猪饲养业观点出发，人们一直热切希望开发一种安全、有效的BbT-PmT类毒素混合物。迄今为止，用于从含细菌皮肤坏死毒素的溶液中，特别是从博代氏杆菌菌细胞提取物中部分纯化皮肤坏死毒素的已知方法包括采用离子交换色谱的纯化方法(Kume，K.et al.，Infect.Immun.，52(4)，p.370-377(1986))。但是，这种方法的缺点是重复性差。我们也了解到一种利用透析、蔗糖梯度超速离心和凝胶过滤色谱部分纯化皮肤坏死毒素的方法(Endoh，M.et al.，Microbiol.Immunol.，30，(7)，p.659-673(1986))。但这一方法同样显示重复性差的缺点，况且，尽管采用了多步纯化步骤，仍不能提供足够纯度的纯化。另一个例子是采用以核酸去除剂、阴离子交换色谱和羟基磷灰石吸附色谱处理的纯化方法(Horiguchi，Y.et al.，Microbiol. Pathogen.，6，P.361-368(1989))。但是，这一纯化方法同样有其不足，在于它需要一种昂贵的试剂，即核酸去除剂，而且涉及多步纯化步骤。还有一种采用核酸去除试剂、透析和阳离子交换色谱的纯化方法(Horiguchi，Y.et al.，FEMS Microbiol.Letters，66，p.39-44(1990))。虽然这种纯化方法具有高重复性，并能提供较高纯度的皮肤坏死毒素，但像在上一个方法中指出的那样，它也需要一种昂贵的试剂。还有一个实例是采用盐析和染料配体亲和色谱的纯化方法(ZhangY.L.and Sekura R.D.，Infect.Immun.，59(10)，p.3754-3759(1991))。虽然这种纯化方法显示出高重复性，但其不足是提供的纯化纯度不充分。迄今报告的灭活AR疫苗有三个类型，即灭活的Bb单价疫苗，灭活的Pm单价疫苗以及灭活的Bb/Pm双价疫苗，每一种疫苗都已加以研究，或已经投入实际应用。灭活的Bb疫苗包括含有由经甲醛、戊二醛等灭活的无致病力的一种细菌，并添加铝凝胶或油佐剂的疫苗(Goodnow，R.A.Vet.Med.SmallAnim.Clin.，72，P.1210-1212(1977)；Nakase，Y.et al.，Proc.Int.Pig Vet.Soc.Congr.，8，(1976)；Giles，C.J.and Smith，I.M.，Vet.Bull.(London)，53，p.327-338(1983))。还发现，存在于Bb外膜上并具有腺苷酸环化酶活性的一种68KDa蛋白，显示预防萎缩性鼻炎的作用(Montaraz J.A.et al.，Infect.Immun.，47，p.744-755(1985))。还了解到一种组成疫苗，含一种Bb产生的纤维状血凝素作为主要成份(Hansen，G.R.et al.；In Atrophicrhinitis in pigs(Ed.Peterson，K.B.and Nielsen，N.C.)Communication of the European Communities，Luxembourg，p.89-97(1983)，and Ohgitani，T.et al.，Vaccine，9，p.653-658(1991))另据报道，为了提供一种抗毒素而添加皮肤坏死毒素的一种疫苗并不是有效的(Soderlind，O.and Bergstrom，G.Int.pigVet.Sci.Congr.，p.175(1984)；Marel，C.M.yon der et al.，Int.pigVet.Sci.Congr.，p.170(1984))。另一方面，一种灭活的Pm单纯疫苗含有Pm类毒素(Pederson，K.B.and Barfod，K.Nord.Vet.Med.，31，p.293-302(1982)；Foged，N.F.et al.，Vet.Rec.，125，p.7-11(1989))，这种疫苗业已得到研究，或已投入实际应用。Bb/Pm联合灭活疫苗包括(1)、无致病力的本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：河合透，牛岛稔大，高濑公三，藤川英雄，
申请(专利权)人：财团法人化学及血清疗法研究所，
类型：发明
国别省市：
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