一种从贝壳类原料中提取麻痹性贝类毒素的方法技术

技术编号:11995294 阅读:123 留言:0更新日期:2015-09-02 23:52
本发明专利技术公开了一种从贝类组织中提取麻痹性贝类毒素的方法。该方法,包括如下步骤:1)将贝壳类原料与醋酸混至混合物的pH值为2-4后,超声破碎,置于沸水中加热5-10min,冷却过滤收集滤液;2)将滤液减压浓缩冷冻离心,取上清液用三氯甲烷萃取,取上层萃取液与乙醇混匀后于室温搅拌20-24小时后二次离心,收集上清液减压浓缩后干燥,再用酸化甲醇溶解后过滤,收集滤液干燥后溶于pH值为2-4的醋酸水溶液,上样于凝胶柱进行柱层析,收集保留时间为160min-250min的流分即得。本发明专利技术最大限度地提高了麻痹性贝类毒素的提取率,能有效地去除组织内脂肪、蛋白质、糖类等杂质,并使毒素的生物活性损失减少到最低程度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于有机化合物提取领域,尤其是涉及一种从贝壳类原料中提取麻痹性贝 类毒素的方法。
技术介绍
麻搏性贝类毒素 (paralytic shellfish poisoning toxins, PSP)是一类对人体 神经系统产生麻痹作用的海洋生物毒素,主要由有毒甲藻产生,可通过食物链在贝类,如: 翡翠贻贝、栉孔扇贝、嵌条扇贝、文蛤、青蛤、近江牡蛎和织纹螺等生物体内累积放大。当人 们误食这些染毒的海产品时,就会发生中毒或死亡。麻痹性贝类毒素的在全球分布越来越 广,频率越来越高,每年发生2000起中毒事件,其中死亡率达到15%。PSP毒素是以石房蛤 毒素(Saxitoxin,STX)为骨架而衍生出来的一类四氢嘌呤的衍生物如式I所示,现已发现 该类毒素有50余种结构组成成分,根据R4基团的不同可将该毒素分为氨基甲酸酯类、N-磺 酰氨甲酰基类、脱氨甲酰基类和脱氧脱氨甲酰基类。【主权项】1. ,包括如下步骤: 1) 将贝壳类原料与醋酸水溶液混匀至混合物的pH值为2-4后,超声破碎,再置于沸水 中加热5-10min,冷却后过滤,收集滤液; 2) 将步骤1)所得滤液减压浓缩后冷冻离心,取上清液用三氯甲烷萃取,取上层萃取液 与乙醇混匀后于室温搅拌20-24小时后,进行第二次离心,收集上清液减压浓缩后干燥,再 用酸化甲醇溶解后过滤,收集滤液干燥后,溶于pH值为2-4的醋酸水溶液后,上样于凝胶柱 进行柱层析,收集保留时间为160min-250min的流分,得到含有所述麻痹性贝类毒素的提 取液; 所述酸化甲醇由体积比为2-5 :95-98的乙酸和甲醇组成。2. 根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述步骤1)中,所述醋酸水溶液的浓度 为 0. 05-0. 2M,具体为 0.1 M ; 混合物的pH值为2-3 ; 超声破碎步骤中,功率为600-1500W,具体为600W,时间为8-30min,具体为8-10min。3. 根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述步骤2)冷冻离心步骤中,转速 为4000-6000rpm,具体为4000-5000rpm ;离心半径为4_6cm,具体为5cm ; 时间10_12min,具体为IOmin ; 温度为3-7°C,具体为4°C ; 所述第二次离心步骤中,转速为8000-10000rpm ;离心半径为4-6cm,具体为5cm ;时间 为 8-lOmin。4. 根据权利要求1-3任一所述的方法,其特征在于:所述步骤2)柱层析步骤中,上样 量为所用凝胶柱体积的2-5%,具体为3-4% ; 洗脱剂为pH值为2-4的醋酸水溶液; 洗脱速度为〇. 4-0. 6mL/min,具体为0. 5mL/min ; 洗脱剂的用量为所用凝胶柱体积的3-5倍,具体为4倍; 所用凝胶柱中,凝胶的型号为SephadexG15或Bio-Gel-p-2 ; 长径比为30-40 :1,具体为30 :1 ; 凝胶柱的长度为60-lOOcm ;直径为l-5cm,具体为2cm。5. 根据权利要求1-4任一所述的方法,其特征在于:所述贝壳类原料为虾夷扇贝或华 贵柿孔扇贝。【专利摘要】本专利技术公开了一种从贝类组织中提取麻痹性贝类毒素的方法。该方法,包括如下步骤:1)将贝壳类原料与醋酸混至混合物的pH值为2-4后,超声破碎,置于沸水中加热5-10min,冷却过滤收集滤液;2)将滤液减压浓缩冷冻离心,取上清液用三氯甲烷萃取,取上层萃取液与乙醇混匀后于室温搅拌20-24小时后二次离心,收集上清液减压浓缩后干燥,再用酸化甲醇溶解后过滤,收集滤液干燥后溶于pH值为2-4的醋酸水溶液,上样于凝胶柱进行柱层析,收集保留时间为160min-250min的流分即得。本专利技术最大限度地提高了麻痹性贝类毒素的提取率,能有效地去除组织内脂肪、蛋白质、糖类等杂质,并使毒素的生物活性损失减少到最低程度。【IPC分类】C07D487-20【公开号】CN104876939【申请号】CN201410072059【专利技术人】张松山, 哈益明, 靳静, 李庆鹏, 杨宝路, 李咏富, 李珍, 耿乙文 【申请人】中国农业科学院原子能利用研究所【公开日】2015年9月2日【申请日】2014年2月28日本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从贝壳类原料中提取麻痹性贝类毒素的方法,包括如下步骤:1)将贝壳类原料与醋酸水溶液混匀至混合物的pH值为2‑4后,超声破碎,再置于沸水中加热5‑10min,冷却后过滤,收集滤液;2)将步骤1)所得滤液减压浓缩后冷冻离心,取上清液用三氯甲烷萃取,取上层萃取液与乙醇混匀后于室温搅拌20‑24小时后,进行第二次离心,收集上清液减压浓缩后干燥,再用酸化甲醇溶解后过滤,收集滤液干燥后,溶于pH值为2‑4的醋酸水溶液后,上样于凝胶柱进行柱层析,收集保留时间为160min‑250min的流分,得到含有所述麻痹性贝类毒素的提取液;所述酸化甲醇由体积比为2‑5:95‑98的乙酸和甲醇组成。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:张松山哈益明靳静李庆鹏杨宝路李咏富李珍耿乙文
申请(专利权)人:中国农业科学院原子能利用研究所
类型:发明
国别省市:北京;11

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