一种脑必舒冻干粉针剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种脑必舒冻干粉针剂及其制备方法。它是由冷冻新鲜猪脑经超声提取、水解、超滤纯化得到的脑蛋白水解物与生化辅料氨基酸混合制备而成的冻干粉针剂，本发明专利技术冻干粉制剂的生物活性以１００ｍ　　ｍｏｌ氯化乙酰胆碱所致ΔＭＶ计算大于９ΔＭＶ／５ｍｉｎ，根据本发明专利技术工艺制得的脑必舒冻干粉具有更好的药理作用。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术属生化制药
，具体涉及一种脑必舒冻干粉针剂及其制备方法。
技术介绍
脑必舒注射液又称脑蛋白水解物注射液，起主要成分为脑蛋白水解物，为主要从猪脑中提取得到的无蛋白质、脂肪及其它抗原性物质的特异性氨基酸混合物，是一种良好的脑功能改善剂，内含游离氨基酸及低分子肽，包括各种必需氨基酸及非必需氨基酸，此外还有谷酰胺、门冬酰胺、鸟氨酸、γ-氨基丁酸和γ-氨酸β-羟丁酸等。脑活素约50％-80％的游离氨基酸可通过血-脑脊液屏障进入脑神经细胞，分子量在1万以下的小分子肽也可透过血-脑脊液屏障并影响呼吸链。脑活素具有抗缺氧作用，可改善脑细胞缺氧症状，增强脑对缺氧的耐受性。还能促进神经细胞的蛋白质合成，使已损伤但未变性的神经细胞恢复功能。同时可加速葡萄糖通过血-脑脊液屏障的运转速度，改善脑能量供应，增加腺苷酸环化酶的活性，催化其它激素系统，改善记忆功能。临床用于脑血管病及脑动脉硬化、脑外伤后遗症、脑软化或中风后遗症、大脑发育不全、痴呆症或老年性痴呆、以记忆力减退为主要表现的神经衰弱、轻度婴幼儿大脑发育不全等。专利(ZL93103863.4)公开了一种从猪脑中提取脑蛋白水解液的方法，它是将猪脑加水均浆，用Ca(OH)2调pH，再加人猪或牛胰酶、甲苯、蒸馏水在37-50℃下搅拌，用磷酸调pH，再经一系列的煮沸调pH值，活性炭脱色，最后用透析袋对水透析，过滤分装灭菌而成。该方法使用了毒性很大的有机溶剂甲苯，而透析的方法虽适宜实验室操作，对于工业生产则有一定困难；专利(ZL94104516.1)公开了一种脑蛋白水解物，该方法将新鲜猪脑去除表面的粘膜及血渍等，匀浆，加5倍体积的丙酮沉淀，沉淀分离后再加等量乙醚洗涤浸泡1小时，再过滤、真空干燥制成脑粉；脑粉用水溶解后，依次用胃蛋白酶、胰酶双酶水解，水解液离心取上清液，加热沸腾并迅速冷却，然后经板框过滤、超滤及减压浓缩得水解液；水解液分批上Sephadex G-25凝胶层析柱层析，将活性峰收集液经减压浓缩、微孔过滤制成精品液，制备无菌制剂。该方法使用了有机溶剂丙酮，丙酮沸点低，有一定毒性，而用层析柱的方法分离有效成分周期长、效率低。专利(ZL01130523.1)公开了一种脑蛋白水解物注射液生产方法，该方法虽然避免了有机溶剂的使用，但整个制备工艺步骤多、周期长，多次采用酸碱工艺，不利于活性成分的保存和稳定，而且超滤时使用了截留分子量为1000的超滤膜，使许多有效活性成分被截留。专利检索中未发现脑必舒冻干粉针剂的相关资料。
技术实现思路
基于上述原因，我们将新鲜猪脑反复冻融后采用超声法破碎，该方法与传统的匀浆法相比，显著提高了破碎效率高，脑活性多肽提取率可达70％，超声提取液离心后水解，水解液热压处理后，再用超滤膜依次纯化，使用该制备工艺制得的脑蛋白水解物符合国家药品标准的相关规定，且减少了工艺步骤，缩短了制备时间，更有利于有效活性成分的保存和稳定，本专利技术制剂的生物活性以100m mol氯化乙酰胆碱所致ΔMV计算大于9ΔMV/5min，药理实验表明本专利技术脑必舒冻干粉针剂具有更好的药理作用。本专利技术的目的是公开一种工艺简单、稳定性好、活性高、疗效好、方便使用的脑必舒冻干粉针制剂。本专利技术的另一个目的是提供上述冻干粉针制剂的制备方法。本专利技术通过以下技术方案实现。一、制备工艺(1)取新鲜猪脑，去除脑膜和血管，粉碎，-15℃至-30℃冷冻，室温下融化，重复4-6次，放入超声提取器中，加水，控制提取器温度0℃-5℃，低温超声裂解破碎15-30分钟，冷冻离心机离心，吸取上清液备用；(2)向上清液中加入0.5％胰蛋白酶液，于37℃保温6-8小时后离心，弃去沉淀物，得水解液；(3)水解液经90-110℃热压处理10分钟，过滤；滤液通过截留分子量为50000的超滤膜进行粗滤；再通过截留分子量为10000的超滤膜进一步过滤纯化，低温干燥，得到半成品；(4)取半成品和生化辅料氨基酸混合，用注射用水溶解调整浓度后，分装到西林瓶中，进行冷冻干燥，得到本专利技术脑必舒冻干粉针剂。本专利技术研究人员对冻干粉针剂常用的辅料进行了实验研究，通过大量实验筛选，发现在本专利技术脑必舒制剂中加入酪氨酸，不仅能起到良好的成型作用，使制得的冻干粉针剂外观、性状符合规定，而且能起到对多肽活性的保护作用，有助于发挥制剂的药效，因此，确定本专利技术脑必舒冻干粉针剂所用的生化辅料氨基酸为酪氨酸。二、制剂含量分析仪器与试药日立835-50型氨基酸测定仪。本专利技术脑必舒冻干粉针剂(按本专利技术制备方法制备，由广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；1、制剂中氨基酸的含量测定取本品，用氨基酸测定仪进行测定，另取相应的氨基酸对照品制成相应浓度的对照品溶液，同法测定。结果见表1(本专利技术冻干粉1支相当于脑必舒注射液2m1)。表1 制剂中氨基酸含量测定结果 2、制剂中总氮的含量测定取本品，依法测定(《中国药典》2000版二部附录VII D)，结果见表2。表2制剂中总氮含量测定结果 以上含量测定结果表明，根据本专利技术方法制备的脑必舒冻干粉针剂的氨基酸和总氮含量都符合国家药品标准脑蛋白水解物注射液(WS1-(X-018)-2001Z)项下含量测定项下的相关要求，而后述药理实验结果表明本专利技术脑必舒冻干粉针剂具有更好的药理作用，说明本专利技术制备方法更加合理科学。三、生物活性比较试药样品1(市售脑必舒注射液，广州白云山制药股份有限公司)；样品2(脑蛋白水解物注射液，按专利ZL01130523.1方法制备，广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；样品3(本专利技术脑必舒冻干粉针剂，按本专利技术制备工艺制备，广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；测定制剂的乙酰胆碱活性首先制备乙酰胆碱传感器，取小鼠脑组织，在PBS[聚(丁二烯-苯乙烯)]中清洗多次，去除结缔组织，滤纸上吸干，手磨匀浆，取匀浆液0.1川涂于pH电极泡，浸入火棉胶溶液中，取出冷干，将匀浆包被于电极泡上，然后浸入PBS中备用。取PBS40ml，插入传感器及甘汞电极，5-10min后读取平衡电位MV0，加入100m mol氯化乙酰胆碱1.5ml，再加样品液液1.5ml，记录每分钟降低的电位值MV，计算ΔMV＝MV0-MV，各组分别放置，每样品测定三批，共测定24个月内样品的生物活性变化情况，取平均值，计算结果见表3。表3制剂生物活性测定结果(ΔMV/5min) 以上实验结果表明各样品组的活性以100m mol氯化乙酰胆碱所致ΔMV计算，样品3组，即本专利技术脑必舒冻干粉的生物活性明显更好，而且随时间放置活性比较稳定，而样品1和2的生物活性相对较小，且随时间放置活性下降明显，因此说明本专利技术的冻干粉针剂的制备方法更科学，活性和稳定性更好。四、药理实施例试药与动物样品1(市售脑必舒注射液，广州白云山制药股份有限公司)；样品2(脑蛋白水解物注射液，按专利ZL01130523.1方法制备，广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；样品3(本专利技术脑必舒冻干粉针剂，按本专利技术制备工艺制备，广东天之骄药物开发有限公司实验室提供)；实验动物健康小鼠，体重18-22g，雌雄各半。1.对小鼠记忆损害改善的作用缺氧(通入CO2)引起小鼠学习、记忆障碍模型的方法参照新药临床指导原则汇编(43页)。实验装置分明、暗两室。两室本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脑必舒冻干粉针剂，其特征在于将新鲜猪脑冻融后，低温超声提取、离心，上清液水解、热压处理、超滤，超滤液低温干燥，与生化辅料氨基酸混合制备成冻干粉针剂，其中生化辅料氨基酸为酪氨酸；其特征还在于其生物活性以１００ｍｍｏｌ氯化乙酰胆碱所致Δ ＭＶ计算大于９ΔＭＶ／５ｍｉｎ。

【技术特征摘要】
1.一种脑必舒冻干粉针剂，其特征在于将新鲜猪脑冻融后，低温超声提取、离心，上清液水解、热压处理、超滤，超滤液低温干燥，与生化辅料氨基酸混合制备成冻干粉针剂，其中生化辅料氨基酸为酪氨酸；其特征还在于其生物活性以100m mol氯化乙酰胆碱所致ΔMV计算大于9ΔMV/5min。2.根据权利要求1所述的一种脑必舒冻干粉针剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)取新鲜猪脑，去除脑膜和血管，粉碎，-15℃至-30℃冷冻，室温下融化，重复4-6次，放入超声提取器中，加水，控制...

【专利技术属性】
技术研发人员：张海峰，
申请(专利权)人：张海峰，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]