一种提取DNA和RNA的方法技术

本发明专利技术涉及一种从原核或真核生物来源材料中提取DNA或RNA的方法。本发明专利技术包括如下步骤：1)预处理：用液氮研磨法、移液器吸头反复吹吸法或玻璃珠研磨法裂解原核或真核生物材料，然后用去污剂进行溶解处理，得到裂解消化产物；2)将饱和食盐水加入裂解消化产物，对生物材料中的蛋白进行沉淀处理；3)分离沉淀相和液相，然后对液相中DNA或RNA进行分离和纯化。与现有技术相比，本发明专利技术的优点在于：1)使用无毒试剂；2)提取方法简便快捷；3)得到的DNA或RNA质量高，完全适用于下游分子生物学实验；4)成本低廉。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物技术，具体的说，涉及一种提取DNA和RNA的方法。
技术介绍
随着生物技术日新月异的发展，DNA和RNA的提取技术也日益成熟和发展，目前已 有大量的技术广泛应用于实验室、工业生产、制药和动植物检疫领域，也产生了大量的相关 专利，如“一种用于核酸分离的磁性纳米粒子复合物及其制法和应用O00610023144. 4) ”及 “分离核酸的方法” 0006800;M578. 2)等。DNA和RNA在细胞中总是与各种蛋白质结合在一起的。DNA和RNA的分离主要是 指将DNA和RNA与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分子物质分开。在分离DNA和RNA时应保证 DNA和RNA分子一级结构的完整性，排除其他分子污染。但是由于由于DNA和RNA提取样品 中含有碳水化合物、鞣酸、多酚及蛋白，甚至提取中使用的有机试剂如苯酚和氯仿，都会污 染样品，因此如何取得高纯度的DNA和RNA，就成为所有研究者不得不面对的问题。本专利技术的目的是提供一种提取DNA和RNA的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种从原核或真核生物来源材料中提取核酸，即DNA或RNA 的方法。本专利技术利用的是核苷酸分子磷酸基团带负电荷的特性而开发的，使用饱和食盐水 中的正电荷中和上述磷酸基团的负电荷，然后沉淀分离，最后经过纯化，得到DNA或RNA。具体的说，本专利技术所述的提取DNA或RNA的方法包括如下步骤1)预处理裂解原核或真核生物材料并用去污剂进行溶解处理，得到裂解消化产 物；2)将饱和食盐水加入到裂解消化产物中，对生物材料中的蛋白进行沉淀处理；3)分离沉淀相和液相，然后对液相中DNA或RNA进行分离和纯化。其中，步骤2)所述的盐水为中性或酸性饱和盐水，若需要提取DNA，则使用中性饱 和盐水；若需要提取RNA，则使用pH值5-6的酸性饱和盐水；其中，所述饱和食盐水的体积用量为裂解消化产物体积的0. 3-1倍；所述中性饱和盐水是将NaCl直接溶解在纯水中煮沸制备；所述酸性饱和盐水是 向中性饱和盐水加入盐酸得到的，使pH值达到5-6。步骤幻如下进行先在每毫升的裂解消化产物中加入350 μ 1的中性饱和盐溶液； 然后将上述溶液轻轻颠倒混勻，然后在室温下放置5-15min ；步骤3)可按照本领域公知的技术进行，例如可如下进行将上述溶液在室温 2500rpm离心15-30min，得含有DNA或RNA的上清液，然后对于含有DNA上清液采用下述方 法1.沉淀 DNA1. 1转移含DNA的上清至新的Eppendorf管；1. 2室温12000rpm离心lOmin，弃去上清；2.洗涤 DNA2. IDNA沉淀加入75 %乙醇；2. 2室温IOOOOrpm离心5min，弃去上清；3.溶解 DNA3. 1室温条件下干燥DNA沉淀5min，然后溶于超纯水中；3. 2对获得的DNA进行定量并分装保存于_80°C。4.去除RNA污染物4. 1每毫升的DNA溶液中加入50 μ g的RNase ；4. 2 37°C温育 Ih。注去除RNA污染所使用的RNase处理法只能在提取的最后步骤中使用。如果需 要脱盐得到高质量的DNA，RNase处理后可用本操作法之步骤3和4进行。若要长久保存 DNA，可用Tris-EDTA(TE)溶液溶解DNA以抑制核酸酶活性。对于含有RNA上清液采用下述方法1.RNA 沉淀1. 1转移含RNA的上清至新的Eppendorf管；1. 2室温12000rpm离心lOmin，弃去上清；2. RNA 洗涤2. IRNA沉淀加入75 %乙醇；2. 2室温IOOOOrpm离心5min，弃去上清；3. RNA 溶解3. 1室温条件下干燥RNA沉淀5min，然后溶于DEPC处理后的超纯水中；3. 2对获得的RNA进行定量并分装保存于_80°C。4.去除基因组DNA污染物此部分可用DNase I (无RNase)试剂盒进行操作，具体步骤参见制造商的说明书。在步骤1)中，依据生物材料的来源和数量的不同，所述预处理可如下进行1)对于较为大量的生物材料，采用液氮研磨法并随后用去污剂进行溶解处理；2)对于单个动物细胞或细菌培养物，采用移液器吸头反复吹吸法并随后用去污剂 进行溶解处理；3)对于包括寄生虫卵，植物等的其他生物材料，可采用玻璃珠破裂法并随后用去 污剂进行溶解处理。下面对预处理方法进行详细的描述1)液氮研磨法提取DNA或RNA 1. 1取待测组织，切碎后置于研钵；1. 2加入液氮以冰冻组织；1. 3用研杵研磨组织；1. 4每g待测组织加入3ml的裂解液；1. 5每g待测组织加入300 μ 1的10 % SDS ；1. 6将研磨物转移至Eppendorf管；1. 7加入蛋白酶K，在50°C进行消化Ih ；2)移液器反复吹吸法提取DNA或RNA (以大肠杆菌的核酸提取为例)1. 1将细菌培养物或细胞培养物转移到Eppendorf管中，2000rpm离心3_10min获得沉淀1. 2弃去上清，沉淀中加入裂解液并用移液器吸头吹吸8-10次以裂解菌体或细 胞；1. 3每毫升细菌培养物加入100 μ 1 10% SDS ；1.4每毫升裂解物加入10(^8蛋白酶1(，在501水浴中温育lh。3)玻璃珠破碎法提取DNA或RNA1. 1将生物材料与灭菌玻璃珠混合，震荡IOmin破碎；1. 2 每毫升加入 300 μ 1 10% SDS ；1.3每毫升裂解物加入300 μ g蛋白酶K，然后在50°C温育lh°C。其中，所述灭菌玻璃珠选择本领域常用的玻璃珠，优选0. 4mm直径。所述震荡采用 高速漩涡振荡器进行，其转速为5000rpm。本专利技术的核心在于用盐溶液的阳离子中和核酸所带的负电荷，被中和后的DNA或 RNA则在高盐溶液中析出。通过低速离心的方法可以去掉细胞碎片、蛋白等大部分杂质，通 过乙醇沉淀法则可以将DNA或RNA沉淀出来。与现有技术相比，本专利技术的优点在于1)使 用无毒试剂；幻提取方法简便快捷；幻成本低廉。附图说明图1.使用本专利技术的方法提取的早熟艾美耳球虫(Eimeria praecox)的基因组 DNA(第一和第二泳道)。DNA分子量标记(M)为EcoT14酶切后的λ基因组。图2.使用本专利技术的方法提取的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)的基因组 DNA。DNA分子量标记为EcoT14酶切后的λ基因组。图3.使用本专利技术的方法提取的早熟艾美耳球虫(Eimeria praecox)的总RNA。DNA 分子量标记为 iTrans DNA Marker III。图4.使用本专利技术的方法提取的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)豪顿株 (Hougton Strain)的总 RNA。DNA 分子量标记为 Trans DNA Marker III。图5使用本专利技术的方法提取的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)豪顿株 (Hougton Strain)及北京株(Beijing Strain)的基因组后成功扩增得到的MIC2基因。图6.使用本专利技术的方法提取的BALB/c小鼠的基因组DNA。DNA分子量标记(M) 为EcoT14酶切后的λ基因组。图7使用本专利技术的方法提取的小鼠的基因组后成功扩增得到的16S核糖体DNA基 因。图8.使用本专利技术的方法提取的大本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种从原核或真核生物来源材料中提取ＤＮＡ或ＲＮＡ的方法，其特征在于，包括如下步骤：１）预处理：裂解原核或真核生物材料并用去污剂进行溶解处理，得到裂解消化产物；２）将饱和食盐水加入到裂解消化产物中，对生物材料中的蛋白进行沉淀处理；３）分离沉淀相和液相，然后对液相中ＤＮＡ或ＲＮＡ进行分离和纯化。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：索勋，萨伊德，刘贤勇，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：11