口腔流体快速免疫层析检测制造技术

本发明专利技术涉及口腔流体快速免疫层析检测。更具体地，本发明专利技术涉及与用于检测口腔流体中分析物的侧向流免疫层析试条相分离的口腔流体收集拭子，其基本上由样品垫、偶联物垫、检测区和对照区垫组成，所述垫由至少一种基质材料制成，其中所述偶联物垫位于所述样品垫下游，并且用偶联物在其上划条纹；检测和对照区垫位于偶联物垫下游，其中所述检测区固定有与靶分析物特异性结合的特异性结合试剂；检测区下游的对照区固定有第二捕获试剂。本发明专利技术还涉及生产所述试条的方法、通过使用所述试条检测口腔流体中分析物的侧向流免疫层析方法、以及包含此试条的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及口腔流体快速免疫层析检测。更具体地，本专利技术涉及用 于检测口腔流体中分析物的侧向流免疫层析检测试条，收集口腔流体标 本的方法，生产所述试条的方法、通过使用该试条检测口腔流体中分析 物的侧向流免疫层析方法、以及含有此试条的试剂盒。
技术介绍
人们已经开发了许多定性或定量检测生物体组织和流体中各种分 析物的分析方法。当前多数诊断检测是采用血液、尿、粪便、活组织检 查或口腔流体。与其它物质相比，收集口腔流体唾液和/或口腔粘膜渗 出物用于检测带来相对较少的隐私侵犯，其相对安全，并可相对容易地 快速完成。迄今，为开发用于口腔流体的收集、传送和样品处理的测试条以及 为开发基于口腔流体的分析，尤其是对各种抗体和代谢物的分析，人们 已付出了很多努力。例如，WO 88/07680公开了通过复杂的放射免疫分析法(RIA)、酶 联免疫分析法(ELISA)等定性或定量检测人或动物体液(选自唾液、 目艮泪、精液、尿和脑脊液)中特定IgM、 IgG和IgA的存在或其量的方 法，所述方法相对难以进行，费时且花费多。美国专利No. 5,103,836 >开了 一种从口腔收集物质用于检测的方 法，其包括以下步骤将以高渗盐溶液浸透的吸收垫插入口腔，其中高 渗溶液的盐在垫中的浓度可以有效地从口腔中回收高浓度的所述物质； 从口腔中移除所述垫；保存该垫以随后从垫中取出所收集物质用于 ELISA。在本公开文件中公开的吸收垫需要用高渗溶液预处理以提供高 浓度的分析物，且再次使用复杂的ELISA来检测分析物。美国专利No. 6,303,081公开了用于从口腔收集和转运水性流体到 用于检测的侧向层析试条的检测试条。侧向层析试条置于外罩 (housing)内并沿外罩中限定的腔伸展。向所述侧向层析试条提供至少一个检视(inspection)部位以实现在侧向层析试条上所选部位检视 测试结果。多孔芯条(wick)材料在一端从所述外罩伸出到外罩外部的 收集部位，在另一端与所述侧向层析试条相通。所述多孔芯条材料具有 微粒构造，所述微粒吸附水性口腔流体以将该流体从口传送到所述侧向 层析试条而基本上没有吸收。该多孔芯条材料容易将口腔流体释放到侧 向层析试条。由于该多孔芯条材料的迂回流路，自然防止从侧向层析试 条到口腔的反向流动。咬合板(bite plate)与所述外罩相连并可插入患 者牙齿间以将多孔芯条定位于口腔中来收集口腔流体。所述咬合板通常 通过牙齿咬合力(occlusal force)被保持在适当位置以将多孔芯条定位 于口腔空间中。当检测试条在口中时，通过观察侧向层析试条迅速得到 检测结果。在美国专利申请No. 2002/0192839、美国专利申请No. 2002/0155029中均公开了用于一步收集口腔流体以检测和/或定量口腔 流体中分析物的改进的检测试条和方法，这些专利或申请的内容均以其 整体通过参考并入本文。尽管通过上述检测试条的分析法具有直接、快速且不需要复杂步骤 的优点，但对于检测对象而言，在整个检测过程中都要咬合检测试条是 不方便的。此外，对于具有"无效"指示的分析，在无效结果需要重新 检测时，或者对于比如HIV这样的常规需要对收集标本进行确认检测 的诊断检测而言，对象将不得不一而再再而三地为检测而咬合检测试 条。然而，应当指出，在初次收集后长达一小时，口腔粘膜渗出物的收 集通常减少口腔组织表面可得的富含IgG的渗出物，这将使随后收集以 使用"一站式样品收集器/检测组合"重新检测不够方便，因为检测对 象必须等到渗出物水平更高，否则用样品来检测风险可能会有更低的灵 敏度(R. Mink，未出版数据)。
技术实现思路
本专利技术是谨记现有技术中存在的上述缺点而做出的，本专利技术的一个 目的是提供一种简单、方便且有成本效益的用侧向免疫层析试条的口腔 流体收集方法，其适于灵敏和快速地检测口腔流体中分析物。本专利技术的另 一个目的是提供一种生产所述侧向流免疫层析检测试 条的方法。本专利技术的另外一个目的是提供一种适于灵敏和快速地检测口腔流体中分析物的灵敏方法。本专利技术的另外一个目的是提供用于灵敏和快速地检测口腔流体中 分析物的试剂盒。因此，在第一个方面，本专利技术提供一种用于检测口腔流体中分析物 的侧向流免疫层析检测试条，其基本上由样品垫、偶联物垫、检测区和 对照区垫组成，所述垫由至少一种基质材料制成，其中所述偶联物垫位 于样品垫的下游且其上用偶联物划条紋，所述检测区和对照区垫位于该 偶联物垫的下游且包含检测区和对照区，其中检测区固定有特异性结合试剂，所述特异性结合试剂特异性地与靶分析物结合；且对照区固定有 第二捕获试剂。在此方面的一个实施方案中，待检测分析物选自抗以下抗原的抗 体传染性疾病、激素、生长因子、治疗药物、滥用药物及滥用药物的 代谢产物。在另一个实施方案中，所述基质材料选自无机粉末，比如二氧化硅 和氧化铝；玻璃纤维滤纸；天然聚合材料尤其是基于纤维素的材料、层 析纸；合成或改性的天然聚合物比如硝酸纤维素、醋酸纤维素、聚氯乙 烯、聚丙烯酰胺、交联葡聚糖、琼脂糖；以及其组合。在另一个实施方案中，样品垫的基质材料为玻璃纤维滤纸；偶联物 垫的基质材料为聚酯材料；检测垫和对照垫的基质材料为硝酸纤维素 膜。在另 一个实施方案中，偶联物包含与第一捕获试剂偶联的标记物， 所述第一捕获试剂捕获口腔流体中内源性抗体。所述标记物选自胶体金 颗粒；元素或金属溶胶颗粒，包括硒、银、铁或碳；其它珠状颗粒，包 括有色乳胶、脂质体和染料颗粒。优选地，所述标记物为胶体金颗粒。在另一个实施方案中，所述第一捕获试剂选自抗IgG、 IgM或IgA 的抗体，蛋白A,蛋白G和伴刀豆球蛋白A。优选地，所述第一捕获试 剂为蛋白A。在另一个实施方案中，所述特异性结合试剂选自以下的抗原传染 性疾病、激素、生长因子、治疗药物、滥用药物及滥用药物的代谢产物。在另一个实施方案中，传染性疾病的抗原为代表HIV蛋白免疫决定 区的重组或合成肽，所述HIV蛋白尤其是选自HIV-1的gpl20和gp41 以及HIV-2的gp36的HIV包膜蛋白。在另一个实施方案中，第二捕获试剂选自抗IgG、 IgM或IgA的 抗体、蛋白A、蛋白G和伴刀豆球蛋白A,其中所述抗IgG的抗体为 山羊抗人IgG抗体。在第二个方面，本专利技术提供生产权利要求1-17中任一项所定义的侧 向流免疫层析检测试条的方法，其包括a)将偶联物在偶联物垫上划 条紋；b)将所述特异性结合试剂固定到检测区和对照区垫的检测区上； c)将第二捕获试剂固定于检测区和对照区垫的对照区上；d)用封闭剂 封闭所述每个垫；以及e)对齐所得垫使得相互之间流体连通。在一个实施方案中，在划条紋之前，偶联物在简单或复合糖溶液中 被稳定化，其中所述糖溶液包含蔗糖、海藻糖、锡酸钾以及过氧化氢脲。在另 一个实施方案中，使用生物素/链亲合素连接子将所述特异性结 合试剂固定于检测区和对照区上。在另 一个实施方案中，使用生物素/链亲合素连接子将所述特异性结 合试剂固定于对照区上。在另一个实施方案中，所述封闭剂包含非离子型、阳离子型、阴离 子和两性离子型的去污剂；糖，包括蔗糖、果糖；或蛋白质，包括牛血 清白蛋白、动物全血清、酪蛋白和脱脂奶粉。在另一个实施方案中，动物全血清为胎牛血清。在另一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测口腔流体中分析物的侧向流免疫层析检测试条，其基本上由样品垫、偶联物垫、检测区和对照区垫组成，所述垫由至少一种基质材料制成，其中　所述偶联物垫位于所述样品垫的下游，并且用偶联物在其上划条纹；　所述检测区和对照区垫位于偶 联物垫的下游，且含有检测区和对照区，其中　所述检测区固定有特异性结合靶分析物的特异性结合试剂；且　所述对照区固定有第二捕获试剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：约翰迈克尔恩尼斯，保罗罗伯特史密斯，罗纳德威廉明克，詹姆斯理查德乔治，托比德沃拉赫戈特弗里德，格伦迈克尔福德，
申请(专利权)人：克利普特生物医药公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]