免疫层析试纸及其检测方法技术

本发明专利技术公开一种免疫层析试纸，包括结合物垫、测试线和质控线；所述结合物垫上设有已标记检测抗体或检测抗原的长余辉发光纳米粒子。所述测试线包被有针对待检测样品中目标物的捕获抗体或捕获抗原；所述质控线包被有用于识别已标记在长余辉发光纳米粒子上的检测抗体的抗体或检测抗原的抗体。本发明专利技术的优点是利用长余辉发光材料独特的长余辉发光性能，用余辉光信号作为准确的定量读数检测结果；有效消除了干扰信号，极大提升了对待检测物的检测灵敏度和定量准确性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫层析试纸的
，具体涉及一种免疫层析试纸及其检测方法。
技术介绍
对生物样品中待检测物的现场、快速、灵敏和定量检测是目前体外诊断(in vitro diagnosis，IVD)所追求的要素。近些年来，基于免疫层析试纸条的生物医学检测，因其具有快速、简便、成本低等优势越来越受到研究者和医疗工作者的青睐。免疫层析试纸技术是基于抗原-抗体特异性识别结合原理，在具有一定孔径的硝酸纤维素膜与毛细管作用下，标记了抗体的指示剂会特异性识别与结合如尿样、血样或是唾液等生物样本中的特定待测物，且在试纸条检测区域滞留与显色，并可结合读数仪进行定量检测。近些年来由于医疗事业的不断革新与进步，对所涉及到的免疫层析试纸条的定量检测要求也有所增加。基于胶体金作为指示剂的免疫层析试纸最早应用在早孕检测领域，目前已扩展到多个领域，如生物医学、食品安全、环境、农药残留等，取得了巨大的成功。但其在定量检测和超灵敏检测上早也无能为力，其充其量只能定义为半定量常规检测。因此，基于社会的快速发展，急需一种或多种能快速灵敏定量检测的免疫层析试纸方法。近几年发展起来的基于荧光纳米粒子(如掺杂稀土发光化合物或有机荧光染料分子的聚苯乙烯纳米粒子和荧光量子点)作为指示剂的免疫层析试纸虽然在定量和灵敏检测上有所进步，但由于在定量读数检测过程中，必须保证激发光一直照射在试纸条区域上，由于在激发光照射过程中，试纸条上的硝酸纤维素膜和生物样品本身也会受激发出荧光，导致定量读数检测得到的发光量，不仅包含了作为检测目标的荧光纳米粒子的受激发光量，还包含了作为干扰信号的硝酸纤维素膜和生物样品本身的受激发光量，降低了荧光纳米粒子指示剂与背景信号的信噪比，从而削弱了对待检测物的检测灵敏度和定量准确性。尤其是对于检测灵敏度
和准确性有较高要求的检测项目，如传染性疾病、心肌损伤、感染类等疾病，一般传统的免疫层析试纸很难满足检测要求。因此，市场上急需一种检测灵敏度高、定量准确的发光指示剂免疫层析试纸及定量检测方法。这是本申请需要着重改善的地方。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是要提供一种有效消除干扰发光信号，能够提升定量检测灵敏度和准确度的免疫层析试纸。本专利技术所要解决的另一技术问题是要提供能够提升定量检测灵敏度和准确度的免疫层析试纸的定量检测方法。为了解决本专利技术的第一个技术问题所采用的技术方案是：一种免疫层析试纸，包括结合物垫、测试线和质控线；所述结合物垫上设有已标记检测抗体或检测抗原的长余辉发光纳米粒子。上述方案中，所述测试线包被有针对待检测样品中目标物的捕获抗体或捕获抗原；所述质控线包被有用于识别已标记在长余辉发光纳米粒子上的检测抗体的抗体或检测抗原的抗体。上述方案中，所述免疫层析试纸还包括底板、样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述底板上依次搭接样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述测试线和质控线设在所述硝酸纤维素膜上。上述方案中，所述样品垫为玻璃纤维膜或聚酯纤维膜；所述结合物垫为玻璃纤维膜；所述底板为聚氯乙烯胶板。上述方案中，所述免疫层析试纸还包括设置在外面的卡壳，所述卡壳上设有用于滴加检测样品的加样区和用于观察或读取信号的显色区；所述检测样品为血清、全血、尿液和组织液中的一种或多种。上述方案中，所述长余辉发光纳米粒子的尺寸小于等于300纳米，且大于等于5纳米。所述长余辉发光纳米粒子的余辉时间不少于30秒，优选是大于1分钟。所述长余辉发光纳米粒子优选采用以下几类：(1)硫化物型长余辉材料，如ZnS:Cu2+、CaS:Eu2+、SrGa2S4:Eu2+或Y2O2S:Eu3+。(2)铝酸盐长余辉材料，尤其是Eu2+激活的稀土铝酸盐系列长余辉材料，其中发绿光性能较好的有SrAlO4:Eu2+,Dy3+，发蓝光性能较好的有CaAlO4:Eu2+,Nd3+。(3)硅酸盐长余辉材料，如Ba5Si8O21:Eu2+,Dy3+。(4)钛酸盐长余辉材料，如CaTiO3:Pr3+，以及添加辅助掺杂元素或者电荷补偿剂的CaTiO3:Pr3+。(5)镓酸盐长余辉材料，如ZnGa2O4:Cr3+，以及添加辅助掺杂元素或者电荷补偿剂的ZnGa2O4:Cr3+。本专利技术利用长余辉发光纳米粒子作为指示剂，提供一种检测灵敏度和检测准确度高的免疫层析试纸。具体方案是将检测目标物的抗体或抗原通过化学偶联的方法标记到长余辉发光纳米粒子上，然后将标记好抗体或抗原的长余辉发光纳米粒子设在结合物垫上，用于检测待测样品中的目标物；硝酸纤维素膜上设立的测试线事先包被有针对目标物的捕获抗体或抗原；硝酸纤维素膜上设立的质控线事先包被有针对标记在长余辉发光纳米粒子上的抗体，或抗原的抗体。上述结合物垫和包被有测试线和质控线的硝酸纤维素膜同其他样品垫、吸水垫、卡壳和底板按照传统试纸制作方法组装形成本专利技术的免疫层析试纸。为了解决本专利技术的第二个技术问题所采用的技术方案是：所述免疫层析试纸的检测方法，步骤如下：(1)向样品垫上滴入待检测样品；(2)用激发光照射测试线和质控线；(3)停止激发光照射后，再用发光读数仪读取测试线和质控线的发光信号。上述方案中，所用激发光的波长是254nm至488nm，照射功率是50mW/cm2至300mW/cm2，照射时间是5秒至1分钟。本专利技术的优越功效在于：本专利技术采用长余辉发光纳米粒子代替传统的荧光纳米粒子用于标记抗体或抗原，由于长余辉发光材料具有独特的长余辉发光性能，其事先吸收激发光照射的能量后，关闭激发光照射仍可长时间发射光子信号，发射时间可长达数小时；但是试纸条上的硝酸纤维素膜和生物样品本身不具有余辉
性能，当激发光不再照射时将不再发光，即不会产生干扰的光信号；所以在激发光照射并关闭后，再利用光子读数仪读取长余辉发光纳米粒子的余辉光信号，得到的余辉光信号作为准确的定量读数检测结果；因此，本专利技术有效消除了硝酸纤维素膜和生物样品本身的受激产生的干扰信号，极大提升了对待检测物的检测灵敏度和定量准确性。附图说明构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：图1为本专利技术的结构示意图；图中标号说明1—PVC底板； 2—样品垫；3—结合物垫； 4—硝酸纤维素膜；5—吸水垫； 6—测试线；7—质控线。具体实施方式以下结合附图对本专利技术的实施例进行详细说明，但是本专利技术可以由权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。下面结合图1详细说明本专利技术的实施例。图1示出了本专利技术实施例的结构示意图。实施例1本实施例是一种用于定量检测甲胎蛋白(AFP)的免疫层析试纸，如图1所示，本专利技术提供一种免疫层析试纸，包括PVC底板1，底板1上依次设有样品垫2、结合物垫3、硝酸纤维素膜4和吸水垫5；硝酸纤维素膜4上沿着从样品垫2到吸水垫5的方向，还依次设有测试线6和质控线7。层析方向如图1中箭头的指示方向。结合物垫3上设有已标记有检测抗体的长余辉发光纳米粒子。该检测抗体是能特异性检测甲胎蛋白(AFP)的抗体(anti-AFP antibody)；测试线6上包被有能特异性捕获甲胎蛋白(AFP)的另一抗体；质控线7上包被有能特本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫层析试纸，包括结合物垫、测试线和质控线；其特征在于：所述结合物垫上设有已标记检测抗体或检测抗原的长余辉发光纳米粒子。

【技术特征摘要】
1.一种免疫层析试纸，包括结合物垫、测试线和质控线；其特征在于：所述结合物垫上设有已标记检测抗体或检测抗原的长余辉发光纳米粒子。2.根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征在于：所述测试线包被有针对待检测样品中目标物的捕获抗体或捕获抗原；所述质控线包被有用于识别已标记在长余辉发光纳米粒子上的检测抗体的抗体或检测抗原的抗体。3.根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征在于：所述免疫层析试纸还包括底板、样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述底板上依次搭接样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述测试线和质控线设在所述硝酸纤维素膜上。4.根据权利要求3所述的免疫层析试纸，其特征在于：所述样品垫为玻璃纤维膜或聚酯纤维膜；所述结合物垫为玻璃纤维膜；所述底板为聚氯乙烯胶板。5.根据权利要求3所述的免疫层析试纸，其特征在于：所述免疫层析...

【专利技术属性】
技术研发人员：张兵波，
申请(专利权)人：同济大学，
类型：发明
国别省市：上海;31