抑制MPHOSPH1与PRC1之间的结合的作用剂的筛选方法技术

本发明专利技术提供用于鉴定阻碍或抑制ＭＰＨＯＳＰＨ１与ＰＲＣ１的结合的作用剂的方法。这样的作用剂预期可作为抑制表达ＭＰＨＯＰＨ１和ＰＥＣ１的细胞的增殖、以及预防或治疗癌症特别是膀胱癌的药物发挥作用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及采用M期磷蛋白(MPHOSPHl)和细胞质分裂蛋白蛋白调控 因子1 (PRC1)的结合为指标的筛选方法。可以根据本方法进行鉴定适用于 癌症，特别是膀胱癌的治疗或预防的作用剂。
技术介绍
膀胱癌是人群中第二常见的泌尿生殖器肿瘤，全世界每年约有357,000 例的新发病例(Parkin DM etal.，CA Cancer J Clin 2005, 55:74-108)。这其中 约有1/3的患者很可能在诊断时已成为浸润性疾病或转移性疾病(ParkinDM et al., CA Cancer J Clin 2005, 55: 74-108; Sternberg CN, Ann Oncol 1995, 6: 113-26; Ardavanis A et al., Br J Cancer 2005, 92: 645-50)。虽然对于那些4又发 生肌肉浸润性膀胱癌的患者的治疗而言根治性膀胱切除术被视为"黄金标 准"，然而这些患者中约有50%在接受膀胱切除术后2年出现转移，并随后 死于该疾病(SternbergCN， Ann Oncol 1995,6: 113-26)。近二十年间，CMV (顺铂(dsplatin)、曱氨蝶呤(methotrexate)、长春碱 (vinblastine)或M-VAC(甲氨蝶呤、长春碱、多柔比星、顺柏)等基于顺铂的 组合化学疗法成为晚期膀胱癌患者的首选(Ardavanis A et al.， Br J Cancer 2005, 92: 645-50; Lehmann J et al., World J Urol 2002， 20: 144-50)。然而，总 体预后仍然很差。而且，M-VAC化学疗法的副作用极大(Vaughn DJ, Semin Oncol 1999, 26(suppl 2): 117-22)。因此，人们热切希望开发新的针对膀胱癌 的分子靶向药物。cDNA微阵列已被证明是能够同时分析数千基因的表达图式的有效手 段。基于cDNA微阵列的癌细胞与正常细胞的全基因组表达模式的比较可 提供有用的信息来帮助发现用于癌症诊断和治疗开发的候选靶标分子(Debouck C et al., Na Genet 1999, 21: 48-50)。最近的药物开发研究着重以与 癌症发生相关的重要分子为靶标，以伊马替尼(imatinib)、去铁胺(mesylate) 和曲妥单抗(trastuzumab)为代表。通过将RNAi与癌表达模式分析相结合， 可望鉴定这才羊的治疗药物靶标(Clarke PA et al., Eur J Cancer 2004, 40: 2560-91)。通过全基因组表达分析，分离了与肝细胞癌(Hamamoto R et al., Nat Cell Biol2004, 6: 731-40; YagyuR et al., Int J Oncol2002, 20: 1173-8)、滑膜肉瘤 (Nagayama S et al.， Oncogene 2004， 23: 5551-7; Nagayama S et al.， Oncogene 2005. 24: 6201-12)、肾细胞癌(Togashi A et al.， Cancer Res 2005, 65: 4817-26) 和乳腺癌(WO 2005/28676)的发生和/或进展相关的多个癌基因。这样的分子 被认为是用于开发新治疗方法的良好候选分子。M-VAC等细胞毒剂屡屡产生严重的不良反应，因此，基于已经充分阐 明的机理来慎重地选择新的靶标分子，对于开发将副作用的危险性控制在 最小限度的有效抗癌剂而言是非常有益的。在此目标的基础上，曾经进行 了 26例膀胱癌与29例正常人组织的表达模式分析，发现了在膀胱癌中特 异性过表达的多个基因(Takata R et al" Clin Cancer Res April 1, 2005， 11(7): 2625-36; Saito-Hisaminato A et al" DNA Res 2002, 9: 35-45)。 MPHOSPHl(参 照C2093)被鉴定为膀胱癌中过表达的基因之一。而且，MPHOSPHl先前被鉴定为在G2/M过渡期被特异性磷酸化的蛋 白质，而且;f皮定性为正末端指向驱动蛋白相关蛋白(plus-end-directed kinesin related protein)(Abaza A et al.， J Biol Chem 2003, 278: 27844-52)。 M尸7/OS7W7 cDNA编码1780个氨基酸的蛋白质，该1780个氨基酸包括3个NH2型驱 动蛋白相关蛋白的特征结构域即NH2驱动蛋白马达域、中央巻曲螺旋-茎柄 域和C-球形尾域。而且，先前已经证明MPHOSPHl是在胞质分裂中起重要 作用的正末端指向分子马达，在HeLa细胞中MPHOSPHl从后期到末期在 纺锤体的中间区蓄积(Abaza A et al" J Biol Chem 2003, 278: 27844-52; Kamimoto T et al" J Biol Chem 2001， 276: 37520-8)。有报道称PRC1与数个驱动蛋白家族蛋白相互作用(BanRetal.， JBiol Chem 2004, 279: 16394-402; Kurasawa Y et al.， EMBO J 2004, 23: 3237-48; Zhu C & Jiang W， Proc Natl Acad Sci USA 2005, 102: 343-8; Gruneberg U et al., J Cell Biol 2006， 172: 363-72)。有报道称Hela细胞中抗PRC1抗体对PRC1的抑制引起双核细胞的增加(Mollinari C et al., J Cell Biol 2002， 157: 1175-86)。而且，有报道称PRCl可以与数种与细胞分裂事件特别是胞质 分裂相关的分子(例如KIF4或KIF14)相互作用(EMBO J 2004, 23: 3237-48; MollinariCetal.,Mol Biol Cell 2005, 16: 1043-55)。而且，PRCl已经由本发 明人等鉴定在乳腺癌中过表达(WO 2005/28676)。
技术实现思路
本专利技术基于，至少部分基于体内的MPHOHPH1与PRCl间的相互作用 的发现。MPHOSPHl和PRCl这两种蛋白均在膀胱癌细胞中过表达，而 MPHOSPHl的表达仅见于膀胱癌细胞和正常睾丸组织。如本说明书中揭示 的，如果抑制编码这些蛋白的基因中的一个，细胞质分裂就会受到抑制， 诱导多核化，从而最终导致表达该基因的细胞的增殖抑制。因此，本专利技术提供一种筛选抑制MPHOSPHl与PRCl的结合的作用剂 的方法。更具体地，该方法包括下述步骤a)在作用剂存在下使MPHOSPHl 与PRCl接触、b)检测MPHOSPHl与PRCl的结合水平、c)与不存在作用 剂的条件下检测出的MPHOSPHl与PRCl的结合水平相比较；d)选择降低 MPHOSPHl与PRCl的结合水平的作用剂。在本方法的语境中，也可以用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鉴定抑制ＭＰＨＯＳＰＨ１与ＰＲＣ１之间的结合的作用剂的方法，该方法包括下述步骤：　ａ）使第一多肽与第二多肽在作用剂的存在下相接触；其中，所述第一多肽选自下组：　ｉ）包含ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２的氨基酸序列的多肽；　ｉｉ） 包含添加、取代、缺失或插入了一个或多个氨基酸的ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２的氨基酸序列的多肽，条件是该多肽具有与由ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２的氨基酸序列构成的多肽等价的对ＰＲＣ１的结合活性，　ｉｉｉ）包含与ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２至少约８０％同源 的氨基酸序列的多肽，条件是该多肽具有与由ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２的氨基酸序列组成的多肽等价的对ＰＲＣ１的结合活性，和　ｖｉ）与由ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１的核苷酸序列组成的多核苷酸在严格条件下杂交的多核苷酸所编码的多肽，条件是该多肽具有与由 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２的氨基酸序列组成的多肽等价的对ＰＲＣ１的结合活性；　所述第二多肽选自下组：　ｉ）包含ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３７的氨基酸序列的多肽；　ｉｉ）包含添加、取代、缺失或插入了一个或多个氨基酸的ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ ：３７的氨基酸序列的多肽，条件是该多肽具有与由ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３７的氨基酸序列组成的多肽等价的对ＭＰＨＯＳＰＨ１的结合活性；　ｉｉｉ）包含与ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３７至少约８０％同源的氨基酸序列的多肽，条件是该多肽具有与由ＳＥＱ　Ｉ Ｄ　ＮＯ：３７的氨基酸序列组成的多肽等价的对ＭＰＨＯＳＰＨ１的结合活性；和　ｖｉ）与由ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３６的核苷酸序列组成的多核苷酸在严格条件下杂交的多核苷酸所编码的多肽，条件是该多肽具有与由ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３７的氨基酸序列组 成的多肽等价的对ＭＰＨＯＳＰＨ１的结合活性；　ｂ）检测所述第一多肽与第二多肽之间的结合水平；　ｃ）将所述第一和第二多肽的结合水平与不存在作用剂的条件下检出的所述第一和第二多肽的结合水平相比较；以及　ｄ）选择降低所述第一与第 二多肽之间的结合水平的作用剂。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：中村佑辅，片桐丰雅，中鹤修一，
申请(专利权)人：肿瘤疗法科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：JP[日本]