日本血吸虫蛋白质及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种日本血吸虫蛋白质，该蛋白质具有免疫原性，且包含ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１所示的氨基酸序列。本发明专利技术还公开了该日本血吸虫蛋白质在制备预防或治疗血吸虫病的疫苗中的应用。本发明专利技术的日本血吸虫蛋白质，对血吸虫病有良好的免疫预防效果，适于成为抗血吸虫病的新疫苗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程
，尤其涉及一种日本血吸虫蛋白质及其应用。
技术介绍
血吸虫病是一种人和动物都会受传染的寄生虫病，血吸虫发育的不同阶段，尾蚴、 童虫、成虫和虫卵均可对宿主引起不同的损害和复杂的免疫病理反应，流行范围广，对人和 家畜均产生严重危害。目前，主要采用药物，例如吡喹酮，对已经感染血吸虫病的人或动物 进行治疗，但是这不能解决再次感染的问题。要想更有效的防治血吸虫病，比较可行的措施 是采用疫苗与药物治疗相结合的方式。因此，寻找新的疫苗候选抗原仍是当今血吸虫疫苗 研究的重点之一。UDP-葡萄糖-4-差向异构酶(UDP-glucose-4-印imerase，GALE)主要参与半乳糖 代谢途径，可以催化UDP-葡萄糖和UDP-半乳糖的可逆反应，其重要性在于真核生物可以利 用UDP-葡萄糖来合成海藻糖、蔗糖、肝醣等多种糖类，为生物体的生长代谢提供能量供应。SjGALE是日本血吸虫中编码UDP-葡萄糖-4-差向异构酶的基因，目前尚没有关于 该基因及其表达的蛋白质作为日本血吸虫疫苗的相关报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种日本血吸虫蛋白质，该蛋白质包含UDP-葡 萄糖-4-差向异构酶的部分氨基酸序列，具有免疫原性，可作为抗血吸虫的疫苗候选抗原。此外，还需要提供一种日本血吸虫蛋白质在制备预防或治疗血吸虫病的疫苗中的 应用。为了解决上述技术问题，本专利技术通过如下技术方案实现在本专利技术的一个方面，提供了一种日本血吸虫蛋白质，所述蛋白质具有免疫原性， 且包含SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列。在本专利技术的另一方面，提供了一种编码上述日本血吸虫蛋白质的核苷酸序列。优 选的，所述核苷酸序列为SEQ ID NO :2所示的核苷酸序列。在本专利技术的另一方面，还提供了一种抗血吸虫疫苗，该疫苗包含上述日本血吸虫 蛋白质。在本专利技术的另一方面，还提供了一种能与上述日本血吸虫蛋白质特异性结合的抗 体。在本专利技术的另一方面，还提供了 一种包含上述核苷酸序列的重组载体。在本专利技术的另一方面，还提供了一种宿主细胞，包含上述重组载体，或已用上述核 苷酸序列转化或转染。在本专利技术的另一方面，还提供了上述日本血吸虫蛋白质在制备预防或治疗血吸虫 病的疫苗中的应用。在本专利技术的另一方面，还提供了上述日本血吸虫蛋白质在制备诊断血吸虫病的产品中的应用。本专利技术具有免疫原性的日本血吸虫蛋白质可以作为诊断抗原对血吸虫病畜进行 诊断。在本专利技术的另一方面，还提供了上述日本血吸虫核苷酸序列在制备预防或治疗血 吸虫病的疫苗中的应用。本专利技术日本血吸虫蛋白质，在小鼠免疫保护性实验中，使免疫组小鼠的减虫率与 肝脏减卵率分别达到35. 7%和53% (与佐剂对照组相比)，表明本专利技术具有免疫原性的日 本血吸虫蛋白质对血吸虫病有良好的免疫预防效果，能有效降低宿主体内虫体数目，更重 要的是肝脏内虫卵数目的减少可以大大降低宿主肝脏的病理反应。附图说明下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明。图1是本专利技术实施例1重组蛋白质表达与纯化SDS-PAGE电泳图；图2是本专利技术实施例2重组蛋白质免疫原性Western blot检测结果图；图3是本专利技术实施例4免疫动物血清特异性抗体水平检测结果图；图4是本专利技术实施例5产生保护性的免疫反应类型分析图。具体实施例方式下列实施例中，未注明具体条件的实验方法，通常按常规条件，如《分子克隆实验 指南》(J.萨姆布鲁克，D. W.拉塞尔著，黄培堂，汪嘉玺，朱厚础，等译.第3版，北京科学 出版社，200 中所述的方法进行。本专利技术对日本血吸虫UDP-葡萄糖-4-差向异构酶基因(SjGALE)编码的蛋白质进 行重组表达和纯化，并将重组蛋白质进行免疫保护性实验，验证其对宿主的免疫保护效果， 为开发抗血吸虫新疫苗和药物提供候选抗原分子。实施例IrSjGALE重组蛋白质的表达和纯化将日本血吸虫UDP-葡萄糖-4-差向异构酶基因(SjGALE)的编码序列(SEQ ID NO 2)插入原核表达载体pET28a(+)的多克隆酶切位点，构建成pET28a_SjGALE重组表达载体， 该重组表达载体经测序鉴定正确后进行下面的表达和纯化步骤。1.重组蛋白质的原核表达1)取含有重组质粒单克隆菌落接种于含有相应抗生素的LB培养液中，37°C振荡 培养过夜。2) 37°C振荡培养至0D600达0.4-0. 6，加入IPTG至终浓度为ImM进行诱导表达。3)分别收集诱导前及诱导后的菌液，用SDS-PAGE电泳分析验证，结果如图1所 示，在图1中，M 蛋白质分子量标准；1-5标注的泳道依次分别是大肠杆菌诱导前裂解 物，IPTG诱导蛋白表达后菌体裂解物，诱导表达的菌体裂解后上清，诱导表达的菌体裂解 后沉淀，过柱纯化的融合蛋白。约39KD大小的条带为目的蛋白(日本血吸虫UDP-葡萄 糖-4-差向异构酶基因所编码的蛋白质氨基酸序列如SEQ ID NO :1所示，重组载体表达出 的产物为包含部分载体序列6个组氨酸标签和SEQ ID NO :1所示氨基酸序列的重组蛋白质 rSjGALE)。2.可溶性蛋白的纯化1)加有树脂的His结合层析柱，依次用3倍柱床体积的无菌去离子水，5倍柱床体 积的IX离子化缓冲液(Charge buffer)，3倍体积的IX结合缓冲液洗涤柱子。2)将蛋白上柱。3)用10倍柱床体积的1 X结合缓冲液平衡柱子。4)用6倍柱床体积的1 X冲洗缓冲液洗涤。5)用6倍柱床体积的1 X洗提缓冲液洗脱目的蛋白。6)用6倍柱床体积的IX洗脱缓冲液洗涤柱子，用20%的酒精保存树脂。7) SDS-PAGE检测纯化的蛋白。结果如图1所示，表达的重组蛋白得到了纯化(见图1第“5”泳道箭头所指的条 带)，且纯度较高。 实施例2重组蛋白质的免疫原性检测1)将表达纯化后的重组蛋白质跑SDS-PAGE电泳。2)剪与胶块同样大小硝酸纤维素膜和六层滤纸，并将硝酸纤维素膜和滤纸放入缓 冲液中侵泡；负极向正极依次放置三层滤纸、凝胶、硝酸纤维素膜、三层滤纸；在槽中加满 转移缓冲液和冰袋，280mA，转移池；3)电泳转移结束后，将转移好的硝酸纤维素膜放入3%牛血清白蛋白中4°C封闭 过夜；4)弃去封闭液，用TBST洗三次，每次IOmin ；5)加入1 200稀释的抗日本血吸虫成虫可溶性抗原抗体(实验室保存)作为一 抗，室温孵育Ih;6) TBST 洗三次，每次 IOmin ；7)加入1 5000稀释的HRP标记的羊抗兔抗体，室温孵育Ih ；8) TBST 洗三次，每次 IOmin ；9)把滤膜放入增强型DAB底物显色液中显色，室温下轻摇，蛋白条带的颜色深度 达到要求后，立即用水漂洗，拍照、记录实验结果。Western blot检测结果如图2所示，在图2中，M 蛋白质分子量标准；1 :rSjGALE 重组蛋白质。由图2可知，rSjGALE重组蛋白质具有免疫原性。实施例3免疫保护性实验1.动物免疫实验1) BalB/C鼠，随机分为2组，每组10只。2)用日本血吸虫SjGALE部分氨基酸序列(SEQ ID NO 1)的重组蛋白质rSjGALE 进行免疫保护试验，同时设佐剂对照组。3)实验每只小鼠注射50μ g重组蛋白质与等体积的弗氏完全/不完全佐剂的混合 物，佐剂对照组注射PBS与本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种日本血吸虫蛋白质，其特征在于，所述蛋白质具有免疫原性，且包含ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：金亚美，刘萍萍，刘金明，林矫矫，
申请(专利权)人：中国农业科学院上海兽医研究所，
类型：发明
国别省市：31[]