一种体外检测日本血吸虫虫卵对吡喹酮抗药性的方法，属于抗寄生虫药物技术领域。本发明专利技术方法将从日本血吸虫感染宿主粪便中收集的1000~2000个虫卵分别移入含5×10-6mol/L吡喹酮的生理盐水和单一对照生理盐水的50mL烧瓶中，置28℃黑暗环境中24h，后将虫卵移入新鲜脱氯自来水中，28℃白炽灯照射下孵化毛蚴，孵化开始后每30min用50mL离心管收集1次含毛蚴的自来水，加入数滴卢戈氏碘液后离心，收集毛蚴在显微镜下观察并计数，计算虫卵孵化率；设生理盐水对照，重复3次，通过观察虫卵孵化率，检测日本血吸虫虫卵对吡喹酮的抗药性。本发明专利技术方法快速、简便、敏感、可靠，适合现场快速检测和监测日本血吸虫吡喹酮抗药性的技术问题。
【技术实现步骤摘要】
，属于抗寄生虫药物
技术介绍
日本血吸虫病是一种危害人类健康，影响社会经济发展的重大传染病。吡喹酮是当前用于治疗日本血吸虫病的唯一商品化药物。长期大规模反复应用同一种抗虫药物往往会导致药物抗药性的产生，因此有必要建立现场监测和检测吡喹酮抗药性的方法。当前检测吡喹酮抗药性的主要方法是在疫区现场治疗病人，评估化疗结果，该方法时间长、病人依次性低，且存在漏查漏治现象。我们在实验室内建立了一种体外检测日本血吸虫虫卵对吡喹酮抗药性的技术，可方便、快速、敏感检测日本血吸虫虫卵对吡喹酮的抗药性，解决了吡喹酮抗药性难以检测的技术难题，有利于现场监测和检测日本血吸虫吡喹酮抗药性的产生。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供,解决现场监测和检测日本血吸虫吡喹酮抗药性的技术问题，快速、简便、敏感、可靠。本专利技术的技术方案取两只50 mL烧瓶，分别移入含5X 10_6 mol/L吡喹酮的生理盐水和单一对照生理盐水，将从日本血吸虫感染宿主粪便中收集的100(Γ2000个虫卵加入到含5 X 10_6 mol/L吡喹酮的生理盐水和单一对照生理盐水的烧瓶中，置28°C黑暗环境中24 h，后将虫卵移入新鲜脱氯自来水中，28°C白炽灯照射下孵化毛蝴，孵化开始后每30 min用 50 mL离心管收集I次含毛蝴的自来水，加入数滴卢戈氏碘液后离心，收集毛蝴在显微镜下观察并计数，计算虫卵孵化率，实验重复3次，通过观察虫卵孵化率，检测日本血吸虫虫卵对吡喹酮的抗药性。虫卵孵化率经吡喹酮处理的日本血吸虫虫卵孵化出的毛蝴数与经生理盐水浸泡的日本血吸虫虫卵孵化出的毛蝴数之比。吡喹酮药液为吡喹酮溶于I % 二甲基亚砜(DMSO)中配制成浓度为1Χ1(Γ3 mol/L 与水稀释备用。生理盐水为9 g氯化钠溶于1000 mL蒸馏水中配制而成。卢戈氏碘液为5%碘、10%碘化钾和脱氯水配制而成。，先在50 mL烧瓶中加入含 5X10_6 mol/L吡喹酮的生理盐水溶液，将从日本血吸虫感染宿主粪便中收集的100(Γ2000 个虫卵加入溶液中，置28°C黑暗环境中放置24 h，后将虫卵移入新鲜脱氯自来水中，28°C白炽灯照射下孵化毛蝴，孵化开始后每30 min用50 mL离心管收集I次含毛蝴的自来水，加入数滴卢戈氏碘液后离心，收集毛蝴在显微镜下观察并计数，计算虫卵孵化率，实验设生理盐水对照，重复6次，在5X10_6 mol/L吡喹酮药液作用24 h后，日本血吸虫虫卵孵化率〉3O,即认为该日本血吸虫虫卵对吡喹酮具有抗药性。本专利技术的有益效果,快速、 简便、敏感、可靠，适合现场快速检测和监测日本血吸虫吡喹酮抗药性的产生，可解决日本血吸虫吡喹酮抗药性现场检测和监测的技术问题。具体实施例方式实施例I :日本血吸虫吡喹酮敏感株虫卵对吡喹酮的敏感性测定取两只50 mL烧瓶，分别移入含5X 10_6 mol/L吡喹酮的生理盐水和单一参照生理盐水,将从日本血吸虫四川敏感株感染宿主粪便中收集的100(Γ2000个虫卵加入到烧瓶中， 置28°C黑暗环境中24 h，后将虫卵移入新鲜脱氯自来水中，28 °C白炽灯照射下孵化毛蝴。 孵化开始后每30 min用50 mL离心管收集I次含毛蝴的自来水，加入数滴卢戈氏碘液后离心，收集毛蝴在显微镜下观察并计数，计算虫卵孵化率。实验重复3次。结果显示，在经 5X10_6 mol/L吡喹酮作用24 h后，四川敏感株虫卵的孵化率为O。实施例2 :日本血吸虫吡喹酮敏感株虫卵对吡喹酮的敏感性测定取两只50 mL烧瓶，分别移入含5X 10_6 mol/L吡喹酮的生理盐水和单一参照生理盐水，将从日本血吸虫安徽敏感株感染宿主粪便中收集的100(Γ2000个虫卵加入到烧瓶中， 置28°C黑暗环境中24 h，后将虫卵移入新鲜脱氯自来水中，28°C白炽灯照射下孵化毛蝴。 孵化开始后每30 min用50 mL离心管收集I次含毛蝴的自来水，加入数滴卢戈氏碘液后离心，收集毛蝴在显微镜下观察并计数，计算虫卵孵化率。实验重复3次。结果显示，在经 5X10_6 mol/L吡喹酮作用24 h后，安徽敏感株虫卵的孵化率为O。实施例3 :日本血吸虫吡喹酮敏感株虫卵对吡喹酮的敏感性测定取两只50 mL烧瓶，分别移入含5X 10_6 mol/L批喹酮的生理盐水和单一参照生理盐水， 将从日本血吸虫湖南敏感株感染宿主粪便中收集的100(Γ2000个虫卵加入到烧瓶中，置28 °C黑暗环境中24 h，后将虫卵移入新鲜脱氯自来水中，28°C白炽灯照射下孵化毛蝴。孵化开始后每30 min用50 mL离心管收集I次含毛蝴的自来水，加入数滴卢戈氏碘液后离心，收集毛蝴在显微镜下观察并计数，计算虫卵孵化率。实验重复3次。结果显示，在经5X10_6 mol/L吡喹酮作用24 h后，湖南敏感株虫卵的孵化率为O。实施例4 :日本血吸虫吡喹酮敏感株虫卵对吡喹酮的敏感性测定取两只50 mL烧瓶，分别移入含5X 10_6 mol/L吡喹酮的生理盐水和单一参照生理盐水,将从日本血吸虫江苏敏感株感染宿主粪便中收集的100(Γ2000个虫卵加入到烧瓶中， 置28°C黑暗环境中24 h，后将虫卵移入新鲜脱氯自来水中，28 °C白炽灯照射下孵化毛蝴。 孵化开始后每30 min用50 mL离心管收集I次含毛蝴的自来水，加入数滴卢戈氏碘液后离心，收集毛蝴在显微镜下观察并计数，计算虫卵孵化率。实验重复3次。结果显示，在经 5X10_6 mol/L吡喹酮作用24 h后，江苏敏感株虫卵的孵化率为O。实施例5 :日本血吸虫吡喹酮抗性株虫卵对吡喹酮的敏感性测定取两只50 mL烧瓶，分别移入含5X 10_6 mol/L吡喹酮的生理盐水和单一参照生理盐水,将从日本血吸虫江苏抗性株感染宿主粪便中收集的100(Γ2000个虫卵加入到烧瓶中， 置28°C黑暗环境中24 h，后将虫卵移入新鲜脱氯自来水中，28 °C白炽灯照射下孵化毛蝴。 孵化开始后每30 min用50 mL离心管收集I次含毛蝴的自来水，加入数滴卢戈氏碘液后离心，收集毛蝴在显微镜下观察并计数，计算虫卵孵化率。实验重复3次。结果显示，在经 5X10_6 mol/L吡喹酮作用24 h后，江苏抗性株虫卵的孵化率为(11. 2±3. 5) %。实施例6 :日本血吸虫吡喹酮抗性株虫卵对吡喹酮的敏感性测定取两只50 mL烧瓶，分别移入含5X 10_6 mol/L吡喹酮的生理盐水和单一参照生理盐水,将从日本血吸虫湖南抗性株感染宿主粪便中收集的100(Γ2000个虫卵加入到烧瓶中， 置28°C黑暗环境中24 h，后将虫卵移入新鲜脱氯自来水中，28 °C白炽灯照射下孵化毛蝴。 孵化开始后每30 min用50 mL离心管收集I次含毛蝴的自来水，加入数滴卢戈氏碘液后离心，收集毛蝴在显微镜下观察并计数，计算虫卵孵化率。实验重复3次。结果显示，在经 5X10_6 mol/L吡喹酮作用24 h后，湖南抗性株虫卵的孵化率为(17. 5±6. 7) %。权利要求1.，其特征在于取两只50 mL烧瓶，分别移入含5X 10_6 mol/L吡喹酮的生理盐水和单一对照生理盐水，将从日本血吸虫感染宿主粪便中收集的100(Γ2000个虫卵分别移入含5Χ 10_6 mol/L吡喹酮的生理盐水和单一对照生理盐水的烧瓶中，置28°C本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：汪伟，李洪军，梁幼生，曲国立，邢云天，戴建荣，
申请(专利权)人：江苏省血吸虫病防治研究所，
类型：发明
国别省市：
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