辅助底物耦联提高重组菌不对称转化（Ｒ）－苯基乙二醇效率的方法技术

辅助底物耦联提高重组菌不对称转化（Ｒ）－苯基乙二醇效率的方法，属于生物催化不对称转化技术领域。本发明专利技术理性构建辅助底物耦联体系，实现良性的辅酶再生循环，大幅度提高（Ｒ）－苯基乙二醇的制备效率，以ｍＲＮＡ二级结构优化后的重组大肠杆菌ＢＬ２１／ｐＥＴ３２ａ－ｍｒｃｒ为生物催化剂，保藏编号ＣＣＴＣＣＮＯ：Ｍ２０９２８９，通过添加不同比例的辅助底物甘油和／或异丙醇，提高底物的溶解性，构建底物耦联再生辅酶循环体系，使反应时间由４８ｈ缩短为１．５ｈ，实现了高底物浓度下的（Ｒ）－苯基乙二醇的高效转化，这种经济简便的全细胞辅酶再生的方法，为重组菌高效、低成本制备光学纯（Ｒ）－苯基乙二醇提供了有效途径，以及手性醇的工业生产奠定了坚实的基础。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种利用重组菌ＣＣＴＣＣ　ＮＯ：Ｍ　２０９２８９不对称转化制备（Ｒ）－苯基乙二醇效率的方法，其特征在于以２－羟基苯乙酮为底物，进行不对称转化反应：在０．１　ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ　８．０～９．０的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液中，底物２－羟基苯乙酮浓度为５～１０　ｍｇ／ｍＬ，添加占反应体系总质量６％～１０％的甘油和／或６％～１０％的异丙醇，然后：釆用重组菌全细胞生物转化：添加重组菌ＣＣＴＣＣ　ＮＯ：Ｍ　２０９２８９细胞浓度为０．１　ｇ／ｍＬ，混匀后于３０℃反应１．５－４８　ｈ，反应过程中不需要加入辅酶，产物为（Ｒ）－苯基乙二醇；或釆用重组菌ＣＣＴＣＣ　ＮＯ：Ｍ　２０９２８９的细胞破碎后经纯化后的重组蛋白生物转化：重组蛋白浓度为１～２　μｇ／ｍＬ，再加５　ｍｍｏｌ／Ｌ辅酶ＮＡＤＨ，混匀后于３０℃反应８　ｈ，产物中（Ｒ）－苯基乙二醇纯度达８０％以上。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐岩，张荣珍，王珊珊，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]