一株高产耐热谷氨酰胺转氨酶的茂原链霉菌菌株制造技术

本发明专利技术公开了一株高产耐热谷氨酰胺转氨酶的茂原链霉菌菌株,属于基因工程技术领域。本发明专利技术提供一种通过ARTP诱变结合同源重组双交换获得高产重组耐热谷氨酰胺转氨酶菌株的方法，通过发酵测定，诱变菌株smY2022最高酶活为41.9U/mL，利用该诱变菌株得到的重组菌发酵后，重组TGm2酶活达到61.7U/mL。通过酶学性质测定，其比酶活是smTG的2.9倍；最适反应温度比smTG高10℃。重组TGm2在60℃的半衰期达到64.05min。以上结果表明，通过ARTP诱变结合同源重组双交换可以获得高产的耐热重组耐热谷氨酰胺转氨酶菌株。为其他基因在茂原链霉菌中的高效表达奠定理论基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一株高产耐热谷氨酰胺转氨酶的茂原链霉菌菌株,属于基因工程。

技术介绍

1、谷氨酰胺转氨酶(ec 2.3.2.13)是一种蛋白质交叉连接和蛋白质修饰酶,能够催化谷氨酰胺残基与蛋白质中不同的酰基受体之间形成ε-(γ-谷氨酰胺)异肽键,导致交联或小分子修饰。目前已被广泛应用于肉制品,乳制品和豆制品等食品领域，同时还应用于抗体-药物偶联,组织工程等非食品领域，微生物tgase最早从streptomyces mobaraenesis中分离,相较于动物和植物来源,s.mobaraenesis来源的tgase(smtg)具有不依赖ca2+的催化反应,生产成本低等优势。这也使s.mobaraenesis发酵成为目前商业tgase的主要来源。然而,smtg低热稳定性和低比酶活的问题限制了其应用效率。

2、到目前为止,许多耐热的smtg突变体被构建出来，例如,通过随机突变以及饱和突变获得的smtg热稳定性组合突变体tgm1(s2p-s23v-y24n-s199a-k294l),其在60℃的半衰期达到24.3min,是smtg的11.2倍；利用脯氨酸扫本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一株茂原链霉菌(Streptomyces mobaraenesis)SmY2022，已于2023年10月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 20231937，保藏地址为中国武汉，武汉大学。

2.一种发酵剂，其特征在，含有权利要求1所述的茂原链霉菌SmY2022。

3.制备权利要求2所述发酵剂的方法，其特征在于，将权利要求1所述茂原链霉菌SmY2022接种于培养基中，培养24-36h后离心获得菌体，将菌体冷冻干燥得到发酵剂。

4.权利要求1所述的茂原链霉菌SmY2022或权利要求2所述的发酵剂在制备谷氨酰胺转氨酶方面的...

【技术特征摘要】

1.一株茂原链霉菌(streptomyces mobaraenesis)smy2022，已于2023年10月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no:m 20231937，保藏地址为中国武汉，武汉大学。

2.一种发酵剂，其特征在，含有权利要求1所述的茂原链霉菌smy2022。

3.制备权利要求2所述发酵剂的方法，其特征在于，将权利要求1所述茂原链霉菌smy2022接种于培养基中，培养24-36h后离心获得菌体，将菌体冷冻干燥得到发酵剂。

4.权利要求1所述的茂原链霉菌smy2022或权利要求2所述的发酵剂在制备谷氨酰胺转氨酶方面的应用。

5.一种重组茂原链霉菌，其特征在于，所述重组茂原链霉菌是以权利要求1所述的茂原链霉菌smy2022为底盘细胞，采用核苷酸序列如seq id no.1所示的谷氨酰胺转氨酶tgm2基因替换了所述茂...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘松，叶佳才，周景文，堵国成，陈坚，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：