【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，制备出的间充质干细胞主要应 用于干细胞移植、组织工程、器官移植和免疫治疗等方面。
技术介绍
人脐带华通氏胶(Wharton’ s Jelly)内的细胞具有能自我更新和多向分化、增殖 能力强等干细胞的特征，我们称之为脐带间充质干细胞(huMS°C s)。间充质干细胞是干细 胞家族的重要成员，因其具有支持造血和促进干细胞植入、调控免疫等特点而日益受到人 们的关注，是用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复的理想种子细胞。干细胞培养是一个连续的过程，一旦离开活体开始原代培养，它的各种生物特性 都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化，而其 需求时间是不确定性的，因此制备过程中及时进行冻存十分必要。传统的间充质干细胞的 制备包括脐带的采集、运输、分离、原代培养和传代培养、冷冻保存和复苏，多采用完全培养 基添加10%的二甲基亚砜冻存制备好的间充质干细胞，细胞复苏后短时间内即应用于临 床。传统的制备方法存在以下缺点(1)细胞冻存需要一定的细胞浓度，前期的细胞培养过 程要耗费大量的人力物力；(2)细胞复苏后从复苏中完全恢复活性需要较...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
一种人脐带间充质干细胞的制备方法，包括以下步骤(1)脐带的采集胎儿娩出后即刻按产科常规结扎断脐截取脐带，用生理盐水冲洗脐带，再用医用酒精消毒，将脐带置于脐带保存液中2 8℃恒温保存，从母体中抽取母血以及从胎盘端抽取脐血各不少于4ml作为检测样本，从胎盘端另抽取脐血4ml做收集血清用；(2)脐带的运输将脐血、母血检测样本和置于脐带保存液中保存的脐带送至交接实验室；(3)脐带的交接交接实验室登记后将脐血、母血检测样本交给质控实验室做微生物学和免疫学检测，将脐带转交分离实验室分离；(4)脐带的分离脐血、母血检测样本检测合格后，将步骤(3)转交至分离实验室的脐带分离成1 3mm3的组织块；(5)组织块的冻存将组织块浸入2 8℃的冻存保护液中5 10分钟后分装到2ml的冻存管中，并将冻存管置于程序降温盒中放入 80℃冰箱，8 20小时后将冻存管转移至液氮罐内保存；(6)组织块的复苏将装有脐带组织块的冻存管于37℃水浴锅中解冻2 5分钟，将脐带组织块经复苏缓冲液洗涤1 5次后接种至含有完全培养基的培养瓶中；(7)原代培养将接种组织块的培养瓶置于37℃、含5％的CO2、饱和湿度的培养箱中培养，每3天更换一次完全培养基，培养10 20天后得到P0代脐带间充质干细胞；(8)传代培养待脐带间充质干细胞P0代长至细胞融合80％ 90％后传代，依此扩增可得到P5代的间充质干细胞。2.根据权利要求1所述的一...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨兵，欧阳溪，宋云庆，胡祥，
申请(专利权)人：江苏省北科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：32
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