用于调制丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶功能的氮杂苯并咪唑类化合物制造技术

本发明专利技术部分涉及用氮杂苯并咪唑类化合物调制丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶功能的方法。该方法引入了表达一种丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶、例如ＲＡＦ的细胞。另外，本发明专利技术描述了用由本发明专利技术鉴定的化合物预防和治疗生物体与丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶有关的异常状态的方法。而且，本发明专利技术涉及氮杂苯并咪唑化合物和包含这些化合物的药物组合物。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
用于调制丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶功能的氮杂苯并咪唑类化合物的制作方法
技术介绍
提供下列对专利技术背景的说明有助于理解本专利技术，但不承认其是专利技术的现有技术。细胞信号转导是一种把调节不同细胞过程的外部刺激传递到细胞内部的基本机理。信号转导关键的生物化学机理之一涉及蛋白质的可逆性磷酸化作用，该作用通过改变成熟蛋白质的结构和功能，能够调节其活性。真核生物中得到最佳表征的蛋白激酶在丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基的醇部分上磷酸化蛋白质。这些激酶主要分为两组一组特异性地磷酸化丝氨酸和苏氨酸，另一组特异性地磷酸化酪氨酸。有些激酶能够磷酸化酪氨酸以及丝氨酸/苏氨酸残基，被称为“双特异性”激酶。蛋白激酶也可以以它们在细胞内的位置为特征。有些激酶是跨膜受体蛋白质，能够结合细胞膜外部的配体。与配体结合，改变了受体蛋白激酶的催化活性。另一些是缺少跨膜结构域的非受体蛋白质。在各种细胞腔中，从细胞膜内表面到细胞核，都可以找到非受体蛋白激酶。很多激酶都涉及调节性级联，其中它们的底物可以包括活性受其磷酸化作用状态调节的其他激酶。最终，下游效应物的活性受由这样一种途径的活化作用所引起的磷酸化作用的调制。丝氨酸/苏氨酸激酶家族包括调节信号发送级联的许多步骤的激酶，信号发送级联包括控制细胞生长、迁移、分化、基因表达、肌肉收缩、糖代谢、细胞的蛋白质合成和细胞周期的调节的级联。一个在丝氨酸和苏氨酸残基上磷酸化蛋白质靶的非受体蛋白激酶的实例是RAF。RAF调制其他蛋白激酶的催化活性，其他蛋白激酶例如磷酸化并由此活化促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)的蛋白激酶。RAF本身被膜锚定蛋白质RAS所活化，后者的活化又是响应于配体活化酪氨酸受体蛋白激酶，例如表皮生长因子受体(EGFR)和血小板衍生生长因子受体(PDGFR)。变形的RAF可导致生物体的癌症，这一发现强调了RAF在控制细胞活动中的生物学重要性。Monia等《天然药物》2668，1996提供了RAF在恶性肿瘤中重要性的证据，其包括图表在内的全文引用在此作为参考文献。在为了发现针对癌症和其他疾病的新治疗方法所作的努力中，生物医学研究人员和化学家已对抑制蛋白激酶功能的分子进行了设计、合成和试验。一些小的有机分子构成了一类调制蛋白激酶功能的化合物。据报道抑制蛋白激酶功能的分子实例有双单环、二环或杂环芳基化合物(PCT WO 92/20642)、亚乙烯基-吖吲哚衍生物(PCTWO 94/14808)、1-环丙基-4-吡啶基喹诺酮(美国专利No.5,330,992)、苯乙烯基化合物(美国专利No.5,217,999)、苯乙烯基取代的吡啶基化合物(美国专利No.5,302,606)、某些喹唑啉衍生物(EP申请No.0 566 266 A1)、硒代吲哚和硒化物(PCT WO94/03427)、三环多羟基化合物(PCT WO 92/21660)和苄基膦酸化合物(PCT WO 91/15495)。能够横跨细胞膜并且抗酸解的化合物可能是有利的治疗剂，因为它们在对患者口服给药后有较高的生物利用度。不过，很多这些蛋白激酶抑制剂仅仅微弱地抑制蛋白激酶的功能。另外，很多抑制剂抑制了各种蛋白激酶，因此在作为疾病治疗剂时导致多种副作用。专利技术概述本专利技术部分涉及用氮杂苯并咪唑类化合物调制丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶功能的方法。该方法引入了表达丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶、如RAF的细胞。另外，本专利技术描述了用本专利技术鉴定的化合物预防和治疗生物体与丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶有关的异常状态的方法。而且，本专利技术涉及包含用本专利技术方法鉴定的化合物的药物组合物。I.筛选调制丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶功能的化合物的方法本专利技术方法提供了调制受体与胞质丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶二者的功能的手段。这些方法提供了体外与体内调制酶的手段。对体外应用来说，本专利技术方法部分涉及鉴定调制丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶功能的化合物的方法。因此在第一方面，本专利技术的特征在于用一种氮杂苯并咪唑类化合物调制丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶功能的方法。该氮杂苯并咪唑化合物可选地被有机基团取代。该方法包括使表达丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的细胞与该化合物接触。术语“功能”指的是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的细胞作用。丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族包括调节信号发送级联中许多步骤的激酶，信号发送级联包括控制细胞生长、迁移、分化、基因表达、肌肉收缩、糖代谢、细胞的蛋白质合成和细胞周期的调节的级联。术语“调制”指的是化合物改变蛋白激酶功能的能力。调制剂优选地活化蛋白激酶的催化活性，更优选地活化或抑制蛋白激酶的催化活性，活化或抑制取决于与蛋白激酶接触的化合物浓度，或者最优选地抑制蛋白激酶的催化活性。本专利技术上下文中的术语“催化活性”定义了蛋白激酶磷酸化底物的速率。催化活性是能够测量的，例如测定底物转化为产物的量随时间变化的函数。底物的磷酸化作用发生在蛋白激酶的活性部位上。活性部位在正常情况下是一种腔，在该腔中底物与蛋白激酶结合并被磷酸化。这里所用的术语“底物”指的是被丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶磷酸化的分子。底物优选是一种肽，更优选是一种蛋白质。关于蛋白激酶RAF，优选的底物是MEK和MEK底物MAPK。术语“活化”指的是提高蛋白激酶的细胞功能。蛋白激酶的功能优选是与天然结合配偶体的相互作用，最优选是催化活性。术语“抑制”指的是降低蛋白激酶的细胞功能。蛋白激酶的功能优选是与天然结合配偶体的相互作用，最优选是催化活性。术语“调制”也指的是通过增加或减少在蛋白激酶与天然结合配偶体之间形成复合体的概率，从而改变蛋白激酶的功能。调制剂优选地增加在蛋白激酶与天然结合配偶体之间形成复合体的概率，更优选地增加或减少在蛋白激酶与天然结合配偶体之间形成复合体的概率，增加或减少取决于与蛋白激酶接触的化合物浓度，最优选地减少在蛋白激酶与天然结合配偶体之间形成复合体的概率。术语“复合体”指的是至少两个彼此结合的分子组合。信号转导复合体通常含有至少两个彼此结合的蛋白质分子。例如，蛋白质酪氨酸受体蛋白激酶、GRB2、SOS、RAF和RAS装配形成响应于促分裂配体的信号转导复合体。术语“天然结合配偶体”指的是细胞中与蛋白激酶结合的多肽。天然结合配偶体在蛋白激酶信号转导过程中能够起到传播信号的作用。蛋白激酶与天然结合配偶体之间的相互作用的改变本身，能够表明相互作用的发生概率的增加或减少，或者能够表明蛋白激酶/天然结合配偶体复合体浓度的增加或减少。蛋白激酶天然结合配偶体能够与蛋白激酶的细胞内区高亲和性地结合。高亲和性表示，平衡结合常数为10-6M或以下的数量级。此外，天然结合配偶体也能瞬间与蛋白激酶细胞内区发生相互作用，从化学上修饰它。蛋白激酶天然结合配偶体选自但不限于SRC同源性2(SH2)或3(SH3)结构域、其他磷酰酪氨酸结合(PTB)域、鸟嘌呤核苷酸交换因子、蛋白磷酸酶和其他蛋白激酶。测定蛋白激酶与其天然结合配偶体之间相互作用的改变的方法是本领域容易获得的。术语“丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶”指的是这样一种酶，它的氨基酸序列的至少10％氨基酸等于其他在丝氨酸与苏氨酸残基上磷酸化蛋白质的酶。丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化了磷酸在丝氨酸与苏氨酸残基上加成到蛋白质上。丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶能够以膜结合蛋白或胞质蛋白形式存在。这里所用的术语“接触”指的是将包含本专利技术氮杂苯并咪唑化合物的溶液与浸泡有本文档来自技高网...

【技术保护点】
用氮杂苯并咪唑类化合物调制丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶功能的方法，包括使表达所述丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶的细胞与所述化合物接触的步骤。

【技术特征摘要】
US 1997-9-26 60/060,1451.用氮杂苯并咪唑类化合物调制丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶功能的方法，包括使表达所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的细胞与所述化合物接触的步骤。2.权利要求1的方法，其中所述的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶是RAF。3.鉴定调制丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶功能的化合物的方法，包括下列步骤(a)使表达所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的细胞与所述化合物接触；和(b)监测对所述细胞的效应。4.权利要求3的方法，其中所述的效应是细胞表型的改变或没有改变。5.权利要求3的方法，其中所述的效应是细胞增殖的改变或没有改变。6.权利要求3的方法，其中所述的效应是所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的催化活性的改变或没有改变。7.权利要求3的方法，其中所述的效应是所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶与天然结合配偶体之间的相互作用的改变或没有改变，如本文所述。8.权利要求3的方法，包括下列步骤(a)溶解所述细胞，使溶胞产物包含丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶；(b)把所述丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶吸附到抗体上；(c)用一种或几种底物培养所述被吸附的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶；和(d)把所述一种或几种底物吸附到固体载体或抗体上；其中所述监测对所述细胞的所述效应的步骤包括测量所述一种或几种底物的磷酸盐浓度。9.权利要求3的方法，其中所述的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶是RAF，该方法包括下列步骤(a)溶解所述细胞，使溶胞产物包含RAF；(b)把所述RAF吸附到抗体上；(c)用MEK和MAPK培养所吸附的RAF；和(d)把所述MEK和MAPK吸附到固体载体或一种或几种抗体上；其中所述测量对所述细胞的所述效应的步骤包括监测所述MEK和MAPK的磷酸盐浓度。10.权利要求1的方法，其中所述的氮杂苯并咪唑类化合物具有式I、II或III所示的结构其中(a)R1、R2、R3和R4独立地选自下组(i)氢；(ii)饱和或不饱和烷基；(iii)NX2X3，其中X2和X3独立地选自由氢、饱和或不饱和烷基和同素环或杂环部分组成的组；(iv)卤素或三卤甲基；(v)式-CO-X4的酮，其中X4选自由氢、烷基和同素环或杂环部分组成的组；(vi)式-(X5)n-COOH的羧酸或式-(X6)n-COO-X7的酯，其中X5、X6和X7独立地选自由烷基和同素环或杂环部分组成的组，其中n是0或1；(vii)式(X8)n-OH的醇或式-(X8)n-O-X9的烷氧基部分，其中X8和X9独立地选自由氢、饱和或不饱和烷基和同素环或杂环部分组成的组，其中所述的环可选地被一个或多个取代基取代，取代基独立地选自由烷基、烷氧基、卤素、三卤甲基、羧酸根、硝基和酯组成的组，其中n是0或1；(viii)式-NHCOX10的酰胺，其中X10选自由烷基、羟基和同素环或杂环部分组成的组，其中所述的环可选地被一个或多个取代基取代，取代基独立地选自由烷基、烷氧基、卤素、三卤甲基、羧酸根、硝基和酯组成的组；(ix)-SO2NX11X12，其中X11和X12选自由氢、烷基和同素环或杂环部分组成的组；(x)同素环或杂环部分，可选地被一个、两个或三个取代基取代，取代基独立地选自由烷基、烷氧基、卤素、三卤甲基、羧酸根、硝基和酯部分组成的组；(xi)式-CO-H的醛；和(xii)式-SO2-X13的砜，其中X13选自由饱和或不饱和烷基和同素环或杂环部分组成的组；(b)Z1和Z2独立地选自由氮、硫、氧、NH和NR4组成的组，其条件是如果Z1和Z2之一是氮、NH或NR4，那么Z1和Z2中的另一个是氮、硫、氧、NH或NR4；且(c)Z3和X1独立地选自由氮、硫和氧组成的组。11.权利要求10的方法，其中所述的氮杂苯并咪唑化合物选自由SABI化合物组成的组，如本文所定义。12.预防或治疗生物体异常状态的方法，包括将式I、II或III的氮杂苯并咪唑类化合物对所述生物体给药的步骤其中(a)R1、R2、R3和R4独立地选自下组(i)氢；(ii)饱和或不饱和烷基；(iii)NX2X3，其中X2和X3独立地选自由氢、饱和或不饱和烷基和同素环或杂环部分组成的组；(iv)卤素或三卤甲基；(v)式-CO-X4的酮，其中X4选自由氢、烷基和同素环或杂环部分组成的组；(vi)式-(X5)n-COOH的羧酸或式-(X6)n-COO-X7的酯，其中X5、X6和X7独立地选自由烷基和同素环或杂环部分组成的组，其中n是0或1；(vii)式(X8)n-OH的醇或式-(X8)n-O-X9的烷氧基部分，其中X8和X9独立地选自由氢、饱和或不饱和烷基和同素环或杂环部分组成的组，其中所述的环可选地被一个或多个取代基取代，取代基独立地选自由烷基、烷氧基、卤素、三卤甲基、羧酸根、硝基和酯组成的组，其中n是0或1；(viii)式-NHCOX10的酰胺，其中X10选自由烷基、羟基和同素环或杂环部分组成的组，其中所述的环可选地被一个或多个取代基取代，取代基独立地选自由烷基、烷氧基、卤素、三卤甲基、羧酸根、硝基和酯组成的组；(ix)-SO2NX11X12，其中X11和X12选自由氢、烷基和同素环或杂环部分组成的组；(x)同素环或杂环部分，可选地被一个、两个或三个取代基取代，取代基独立地选自由烷基、烷氧基、卤素、三卤甲基、羧酸根、硝基和酯部分组成的组；(xi)式-CO-...

【专利技术属性】
技术研发人员：G迈克马弘，H维恩伯格，B库茨切尔，H艾普，
申请(专利权)人：赞塔里斯有限公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]