不抑制Ｎ型钙通道而治疗中风和其他疾病制造技术

本发明专利技术提供了用于治疗中风的方法和用于治疗中风的组合物。该方法使用活性肽和内化肽的嵌合肽。内化肽是促进其自身和相连的活性肽吸收进入细胞而不与Ｎ－型钙通道大量结合的ｔａｔ变体。Ｔａｔ变体的使用允许治疗中风而不具有与结合Ｎ－型钙通道相关的某些副作用。Ｔａｔ变体肽也可以与其他活性剂连接用于治疗其他疾病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交互参考本申请是非临时的，并且要求2007年3月2日提交的USSN 60/904,507的权益，该USSN 60/904,507通过完整引入本文用于所有的目的。
技术介绍
中风被预言为在美国每年影响多于600,000人。在1999年的报告中，超过167,000人死于中风，总死亡率为278,000。在1998年，仅对从短期护理医院(short-stay hospital)出院的医疗保险受益人就赔付了36亿，不包括＞1,000,000人的长期护理，据报道他们由于中风而在日常生活活动中具有功能限制和困难(Heart and Stroke Statistical update，American HeartAssociation，2002)。没有一种疗法被证实通过直接保护神经元免于死亡而减轻由中风引起的脑损伤。中风的特征是局部缺血区域、脑出血区域和/或创伤区域的神经元细胞死亡。细胞死亡由谷氨酸对神经元的过度激发(over-excitation)引发，导致提高的细胞内Ca2+和由nNOS(神经元氧化氮合酶)活性的提高而引起的增加的氧化氮。谷氨酸是中枢神经系统(CNS)中主要的兴奋性神经递质，并且介导跨过大部分兴奋性突触的神经传递。三类谷氨酸门控的离子通道受体(N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)、α-氨基-3-羟基-5-甲基异噁唑-4-丙酸(AMPA)和红藻氨酸(Kainate))转导突触后信号。其中，NMDA受体(NMDAR)负责谷氨酸兴奋性神经毒性的主要部分。NMDA受体是具有NR1亚基和一个或多个NR2亚基(2A、2B、2C或2D)的复合体(见例如McDain，C.和Caner，M.(1994)Physiol.Rev.74：723-760)，并且较不常见地具有NR3亚基-->(Chatterton等(2002)Nature 415：793-798)。NR1亚基已显示结合甘氨酸，而NR2亚基则结合谷氨酸。甘氨酸和谷氨酸结合均是打开离子通道并允许钙进入细胞所需要的。四个NR2受体亚基似乎决定了NMDA受体的药理学和特性，其他的贡献来自于NR1亚基的替代性剪接(Kornau等(1995)Science 269：1737-40)。尽管NR1和NR2A亚基在脑中遍在表达，但是NR2B被限制于前脑中，NR2C被限制于小脑中，NR2D与其他类型相比是稀少的。因为兴奋性神经毒性应答中NMDA受体具有关键作用，所以它们被认为是治疗的靶标。已经开发出了靶向以下的化合物：离子通道(氯胺酮、苯环利定、PCP、MK801、金刚烷胺)、外通道(镁)、NR1亚基上甘氨酸结合位点、NR2亚基上谷氨酸结合位点和NR2亚基上特异性位点(锌-NR2A；艾芬地尔、曲索罗地(Traxoprodil)-NR2B)。其中，NMDA受体的非选择性拮抗剂在中风的动物模型中是最具神经保护性的药剂。然而，在中风和创伤性脑损伤中用这些药物进行临床试验迄今为止是失败的，通常归因于严重的副作用例如幻觉和甚至昏迷。根据报道，突触后密度-95蛋白质(PSD-95)在介导兴奋性神经毒性和缺血性脑损害的通路中偶联NMDAR(Aarts等，Science 298，846-850(2002))。该偶联被转导神经元(transducing neuron)阻断，所述转导神经元具有来自NMDAR 2B C-端的肽，所述肽结合与标准tat内化肽(standardtat internalization peptide)融合的PSD-95。该处理减弱了下游NMDAR信号传导而不抑制NMDAR活性，保护经培养的皮质神经元免受兴奋性神经毒性损伤(excitotoxic insults)，并在经历了暂时性局部脑缺血(transientfocal cerebral ischemia)的大鼠中减小了脑梗死体积。专利技术概述本专利技术提供了经分离的嵌合肽或其拟肽(peptidomimetic)，其中所述嵌合肽包含下述活性肽和内化肽，所述活性肽抑制PSD-95与NMDA受体的结合，所述内化肽促进嵌合肽吸收进入细胞，并且相对于tat肽-->YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：1)而言具有降低的与N-型钙通道结合的能力。任选地，内化肽是tat肽的变体。任选地，活性肽具有下述氨基酸序列，所述氨基酸序列由来自NMDA受体C-端的3-25个氨基酸或来自PSD-95受体的PDZ结构域1和/或2组成。任选地，活性肽具有包含T/SXV/L(SEQ ID NO：14)的氨基酸序列，内化肽具有包含XGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：2)的氨基酸序列，其中X是除Y以外的氨基酸或者为空。任选地，X是F(SEQ ID NO：135)。任选地，X为空(SEQ IDNO：136)。任选地，内化肽由GRKKRRQRRRP(SEQ ID NO：3)组成。任选地，嵌合肽具有由GRKKRRQRRRKLSSIESDV(SEQ ID NO：4)组成的氨基酸序列。任选地，活性肽具有包含[E/D/N/Q]-[S/T]-[D/E/Q/N]-[V/L](SEQ IDNO：5)的氨基酸序列。任选地，活性肽包含选自以下的氨基酸序列：ESDV(SEQ ID NO：6)、ESEV(SEQ ID NO：7)、ETDV(SEQ ID NO：8)、ETEV(SEQ ID NO：9)、DTDV(SEQ ID NO：10)、DTEV(SEQ ID NO：11)。任选地，活性肽具有包含KLSSIESDV(SEQ ID NO：12)的氨基酸序列。任选地，活性肽具有包含KLSSIETDV(SEQ ID NO：13)的氨基酸序列。任选地，嵌合肽具有包含FGRKKRRQRRRKLSSIESDV(SEQ ID NO：19)或F(GRKKRRQRRRKLSSIETDV(SEQ ID NO：16)的氨基酸序列。任选地，嵌合肽具有由FGRKKRRQRRRKLSSIESDV(SEQ ID NO：19)或FGRKKRRQRRRKLSSIETDV(SEQ ID NO：16)组成的氨基酸序列。任选地，嵌合肽具有对N-型钙通道而言大于10nM的Kd。本专利技术还提供了药物组合物，其包含上文所述经分离的嵌合肽或其拟肽和可药用的载体。本专利技术还提供了在患有中风或其他CNS损伤，或处于中风或其他CNS损伤风险下的患者中治疗中风的损伤作用的方法，其包括对患者施用有效量的嵌合肽或其拟肽。嵌合肽包含活性肽和内化肽，所述活性肽具有包含T/SXV/L(SEQ ID NO：本文档来自技高网...

【技术保护点】
经分离的嵌合肽或其拟肽，其中所述嵌合肽包含下述活性肽和内化肽，所述活性肽抑制ＰＳＤ－９５与ＮＭＤＡ受体的结合，所述内化肽促进嵌合肽吸收进入细胞，并且相对于ｔａｔ肽ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１）具有降低的与Ｎ－型钙通道结合的能力。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2007-3-2 60/904,5071.经分离的嵌合肽或其拟肽，其中所述嵌合肽包含下述活性肽和内化
肽，所述活性肽抑制PSD-95与NMDA受体的结合，所述内化肽促进嵌合
肽吸收进入细胞，并且相对于tat肽YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：1)具
有降低的与N-型钙通道结合的能力。
2.权利要求1的经分离的嵌合肽，其中所述内化肽是tat肽的变体。
3.权利要求1的经分离的嵌合肽，其中所述活性肽具有下述氨基酸序
列，所述氨基酸序列由来自NMDA受体C-端的3-25个氨基酸组成或由来
自PSD-95受体的PDZ结构域1和/或2组成。
4.权利要求1的经分离的嵌合肽，其中所述活性肽具有包含T/SXV/L
(SEQ ID NO：14)的氨基酸序列，所述内化肽具有包含XGRKKRRQRRR
(SEQ ID NO：2)的氨基酸序列，其中X是除Y以外的氨基酸或者为空。
5.权利要求1的经分离的嵌合肽，其中X为F(SEQ ID NO：135)。
6.权利要求1的经分离的嵌合肽，其中X为空(SEQ ID NO：136)。
7.权利要求1的经分离的嵌合肽，其中所述内化肽由
GRKKRRQRRRP(SEQ ID NO：3)组成。
8.权利要求1的经分离的嵌合肽，其中所述嵌合肽具有由
GRKKRRQRRRKLSSIESDV(SEQ ID NO：4)组成的氨基酸序列。
9.权利要求1的经分离的嵌合肽，其中所述活性肽具有包含
[E/D/N/Q]-[S/T]-[D/E/Q/N]-[V/L](SEQ ID NO：5)的氨基酸序列。
10.权利要求1的经分离的嵌合肽，其中所述活性肽包含选自以下的
氨基酸序列：ESDV(SEQ ID NO：6)、ESEV(SEQ ID NO：7)、ETDV(SEQ
ID NO：8)、ETEV(SEQ ID NO：9)、DTDV(SEQ ID NO：10)、DTEV(SEQ ID
NO：11)。
11.权利要求1的经分离的嵌合肽，其中所述活性肽具有包含
KLSSIESDV(SEQ ID NO：12)的氨基酸序列。
12.权利要求1的经分离的嵌合肽，其中所述活性肽具有包含
KLSSIETDV(SEQ ID NO：13)的氨基酸序列。
13.权利要求1的经分离的嵌合肽，其中所述嵌合肽具有包含
FGRKKRRQRRRKLSSIESDV(SEQ ID NO：19)或
FGRKKRRQRRRKLSSIETDV(SEQ ID NO：16)的氨基酸序列。
14.权利要求1的经分离的嵌合肽，其中所述嵌合肽具有由
FGRKKRRQRRRKLSSIESDV(SEQ ID NO：19)或
FGRKKRRQRRRKLSSIETDV(SEQ ID NO：16)组成的氨基酸序列。
15.经分离的嵌合肽，其中所述嵌合肽对N-型钙通道具有大于10nM
的Kd。
16.药物组合物，其包含权利要求1的经分离的嵌合肽或其拟肽，以
及可药用的载体。
17.在患有中风或其他CNS损伤，或处于中风或其他CNS损伤风险
下的患者中治疗中风的损伤作用的方法，其包括对患者施用有效量的嵌合
肽或其拟肽，其中所述嵌合肽包含下述活性肽和内化肽，所述活性肽具有
包含T/SXV/L(SEQ ID NO：14)的氨基酸序列，所述内化肽具有包含
XGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：2)的氨基酸序列，其中X是除Y以外的其
他氨基酸或为空。
18.权利要求17的方法，其中X是F(SEQ ID NO：135)。
19.权利要求17的方法，其中X为空(SEQ ID NO：136)。
20.权利要求17的方法，其中所述内化肽由GRKKRRQRRRPQ(SEQ
ID NO：15)组成。
21.权利要求17的方法，其中所述嵌合肽具有包含
GRKKRRQRRRKLSSIESDV(SEQ ID NO：4)的氨基酸序列。
22.权利要求17的方法，其中所述活性肽具有包含
[E/D/N/Q]-[S/T]-[D/E/Q/N]-[V/L](SEQ ID NO：5)的氨基酸序列。
23.权利要求17的方法，其中所述活性肽包含选自以下的氨基酸序列：
ESDV(SEQ ID NO：6)、ESEV(SEQ ID NO：7)、ETDV(SEQ ID NO：8)、
ETEV(SEQ ID NO：9)、DTDV(SEQ ID NO...

【专利技术属性】
技术研发人员：MP贝尔马里斯，JD加曼，PS卢，MW萨尔特，M蒂米安斯基，
申请(专利权)人：阿尔伯维塔公司，诺诺公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]