导致或引起包括淋巴瘤细胞在内的细胞杀伤的人多肽制造技术

本发明专利技术涉及与细胞表面表位结合，和以多价形式导致或引起细胞（包括淋巴瘤细胞）杀伤的多肽组合物，和在单价形式下，导致免疫抑制或移植淋巴细胞活化的多肽组合物。本发明专利技术还涉及编码该多肽的核酸，产生多肽的方法，杀伤细胞的方法，免疫抑制病人的方法，含有多肽的药物、诊断和多价组合物和试剂盒以及多肽的用途。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】导致或引起包括淋巴瘤细胞在内的细胞杀伤的人多肽的制作方法
技术介绍
每一种迄今研究的哺乳动物携带一簇基因，编码所谓的主要组织相容性复合物(MHC)。该紧密连锁的基因簇编码表面抗原，它在体液和细胞介导的免疫应答中起到了中心作用。在人类中MHC编码的产物称作人淋巴细胞抗原或HLA。MHC-基因组织在编码三类分子(I-III类)的区域。I型MHC分子是45kD跨膜糖蛋白，与另一种糖蛋白，12kDβ-2微球蛋白非共价结合(Brown等，1993)。后者不插入细胞膜，编码在MHC外侧。人I型分子是三种不同的同型抗原，称为HLA-A、-B和-C，在独立的基因座编码。I型分子的组织表达是普遍存在并且是共显性的。MHC I型分子递呈激活细胞毒性T细胞必需的肽抗原。II型MHC分子与两种跨膜糖蛋白，35kDα链和28kDβ链的异二聚体非共价结合(Brown等，1993)。在人类中，II型分子作为三种不同的同型出现，称为人淋巴细胞抗原DR(HLA-DR)、HLA-DP和HLA-DQ。DR的多态性限于β链，而两条链在DP和DQ同型中都具有多态性。II型分子共显性表达，但与I型相反，显示有限的组织分布它们仅存在于免疫系统(例如树突细胞、巨噬细胞、B淋巴细胞和活化的T淋巴细胞)的细胞表面。它们还在正常肾上腺的网状带的人皮质细胞上表达，并在正常卵巢黄体的粒层细胞中表达(Kahoury等，1990)。它们的主要生物学作用是结合抗原肽并将其递呈到抗原递呈细胞(APC)表面，让CD4辅助T(Th)淋巴细胞识别(Babbitt等，1985)。MHC II型分子还可在非免疫系统细胞表面表达。例如在淋巴样细胞外的器官中的细胞可在病原性炎症反应中表达MHC II型分子。这些细胞可包括滑膜细胞、内皮细胞、甲状腺基质细胞和神经胶质细胞。III型MHC分子也与免疫应答有关，但编码某种程度上不同的产物。这些包括许多可溶性血清蛋白、酶和蛋白质，例如肿瘤坏死因子或类固醇-21羟化酶。在人中，III型分子有三种不同同型，称为Ca、C2和Bf(Kuby，1994)。由于Th细胞活化是几乎所有免疫应答引发的关键事件，并通过II类分子介导，II型MHC本身作为免疫调节的目标(Baxevanis等，1980；Rosenbaum等，1981；Adorini等，1988)。除了肽递呈，II型分子可转导各种影响APC生理性质的信号。这些信号是由于多个II型分子与抗体或Th细胞的抗原受体相互作用产生的(Vidovic等，1995a；Vidovic等，1995b)，并且能够诱导B细胞活化和免疫球蛋白分泌(Cambier等，1991；Palacios等，1983)，单核细胞的细胞因子产生(Palacios，1985)以及上调共刺激(Nabavi等，1992)和细胞粘着分子(Mourad等，1990)。还有一组观察结果提示在某些条件下II型连接可导致细胞生长停止或可以是细胞毒性的。在这些条件下的连接是多肽与II型MHC分子相互作用。对于后一种作用和它们可能的机制有很多矛盾。一些作者声称B细胞上II型分子复合物的形成导致生长抑制(Vaickus等，1989；Kabelitz等，1989)，而根据其它的报道，II型复合物形成导致细胞死亡(Vidovic等，1995a；Newell等，1993；Truman等，1994；Truman等，1997；Drenou等，1999)。在一些实验系统中，仅休眠的B细胞观察到现象(Newell等，1993)，或在其它系统中仅用活化的B细胞(Vidovic等，1995a；Truman等，1994)。基于这些观察结果，许多年来已设想用抗-II型单克隆抗体(mAb)作为候选治疗剂。事实上，在一系列动物疾病模型中小鼠衍生抗II型mAb的益处支持了该提议(Waldor等，1983；Jonker等，1988；Stevens等，1990；Smith等，1994；Vidovic&Torral，1998；Vidovic & Laus，2000)。尽管有这些早期的支持性的数据，迄今未描述显示所需细胞毒性和其它生物性质(可能包括亲和力、增殖抑制或细胞因子分泌的减少)的人组合物的抗-MAb II类组合物。事实上，尽管可相对简单的衍生出小鼠衍生的mAb，但用小鼠衍生mAb的工作证明了获得具有所需生物性质的抗体的困难。例如，在不同小鼠抗-II型mAb的T细胞抑制能力中观察到显著和不能充分理解的差异(Naquet等，1983)。另外，体内使用某些小鼠衍生的mAb与未预期的副作用相联系，有时引起实验灵长类的死亡(Billing等，1983；Jonker等，1991)。普遍认为小鼠衍生的mAb(包括嵌合和所谓的“人源化”mAb)与人mAb(例如Vose等，2000；Kashmiri等，2001)相比，伴有在病人体内产生不良免疫应答的增长的危险(人抗-小鼠抗体HAMA)。当用任何小鼠衍生的mAb治疗慢性病，如类风湿性关节炎或多发性硬化时，或需要常规治疗，例如当治疗一些癌症时，该危险可能增加；人免疫系统持续接触非人分子常常导致不良免疫反应。另外，已证明获得具有对所需抗原具有所需特异性或亲和性的小鼠衍生抗体非常难(Pichla等，1997)。这些观察结果可对小鼠衍生的mAb的疗效和优点具有显著影响，或降低疗效和优点。小鼠衍生的mAb的缺点的例子包括下列第一，小鼠衍生的mAb可能受到医药条件，或治疗它们适合的病况的治疗长短的限制。第二，小鼠衍生的mAb的剂量水平可能需要较高，以补偿较低的亲和力或疗效(低亲和力或疗效与小鼠来源无关，然而人体内的半衰期可能有关，因为小鼠mAb可能更容易从血液中被快速清除，这可能还需要更高的剂量)，因此，使得剂量不仅更重，而且可能免疫原性更强，可能更危险。第三，合适的治疗方案和需要高产量的高剂量比中的限制可能更加显著增加了治疗成本，意味着这些小鼠衍生的mAb对于开发作为商品治疗剂是不经济的。最后，即使能鉴定出显示所需特异性或亲和性的小鼠mAb，通常这些理想特征在减少免疫原性的“人源化”或“嵌合”过程中受到有害影响(Slavin-Chiorini等，1997)。一旦小鼠衍生的mAb被人源化或嵌合化，就非常难于优化其特异性或亲和性。许多年来，本领域一直在寻找具有适用于治疗人类的药物组合物的生物性质的人抗-MHC II型mAb复合物。该领域的工作人员已实践了步骤首先鉴定一种小鼠衍生的mAb，然后在改善该用于人类病人的非人分子的免疫耐受的帮助下修饰该mAb的结构(对于进一步的细节，见Jones等，1986；Riechmann等，1988；Presta，1992)。通常用所谓的“人源化”过程或通过构建人-小鼠嵌合mAb实现该修饰。其它工作人员尝试了鉴定在人抗体多样性天然库中与人抗原结合的人抗体。例如，通过探索孕妇中的胎儿耐受机制(Bonegura等，1987)或通过筛选抗体天然多样性文库(Stausbl-Grn等，1996；Winter等，1994)。然而，迄今未描述过显示所需细胞毒性、特异性、低免疫原性和亲和性的生物性质的人复合物MHCII型mAb。为了治疗目的，与许多或至少大部分人II型MHC分子的等位基因形式反应的多肽本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有多肽的组合物，其特征在于，该多肽含有基于抗体的人组合物的抗原结合域，具有对细胞表面上表达的一种抗原的结合特异性，其中用具有两种或多种所述抗原结合域的多价多肽处理表达所述抗原的细胞，导致或引起所述细胞杀伤，所述杀伤不需要细胞毒性或免疫学机制。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】EP 2000-5-12 00110065.0;US 2000-10-6 60/238,4921.一种含有多肽的组合物，其特征在于，该多肽含有基于抗体的人组合物的抗原结合域，具有对细胞表面上表达的一种抗原的结合特异性，其中用具有两种或多种所述抗原结合域的多价多肽处理表达所述抗原的细胞，导致或引起所述细胞杀伤，所述杀伤不需要细胞毒性或免疫学机制。2.一种含有多肽的组合物，其特征在于，该多肽含有基于抗体的与人HLA DR抗原以1μM或以下的Kd结合的抗原结合域，其中用具有两种或多种所述抗原结合域的多价多肽处理表达所述抗原的细胞，导致或引起所述细胞杀伤，所述杀伤不需要细胞毒性或免疫学机制。3.一种含有多价多肽的组合物，其特征在于，该多价多肽含有多个基于抗体的对人HLA DR具有结合特异性的抗原结合域，其中用所述多价多肽处理表达HLA DR的细胞，导致或引起所述细胞杀伤，所述杀伤不需要细胞毒性或免疫学机制，其中所述抗原结合域单独以1μM或以下的Kd与人HLA DR结合。4.一种含有多肽的组合物，其特征在于，该多肽含有多个基于抗体的对人HLADR具有结合特异性的抗原结合域，其中用所述多价多肽处理表达HLA DR的细胞，导致或引起所述细胞杀伤，所述杀伤不需要细胞毒性或免疫学机制，其中所述多价多肽以100nm或以下的EC50杀伤活化的淋巴细胞。5.一种含有多价多肽的组合物，其特征在于，该多肽含有至少一个基于抗体的与人HLA DR抗原以1μM或以下的Kd结合的抗原结合域，所述抗原结合域是通过包括从重组抗体文库用与人HLA DR至少一个表位结合的能力分离出VL和VH结构域的方法分离的，其中用具有两个或多个所述抗原结合域的多价多肽处理表达HLA DR的细胞，导致或引起所述细胞杀伤，所述杀伤不需要细胞毒性或免疫学机制。6.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，分离抗原结合域的方法还包括步骤a.产生VL和VH结构域之一或两者的CDR1、CDR2和CDR3序列中至少一个的变体文库，和b.用与人HLA DR以1μM或以下的Kd结合的能力从变体文库中分离出VL和VH结构域。7.如权利要求1-6任一所述的组合物，其特征在于，所述多价多肽杀伤转化细胞的EC50比杀伤正常细胞的EC50低至少5倍。8.如权利要求1-6任一所述的组合物，其特征在于，所述多价多肽杀伤活化的细胞的EC50比杀伤未活化的细胞的EC50低至少5倍。9.如权利要求1-6任一所述的组合物，其特征在于，所述多价多肽以50nM或以下的EC50杀伤转化的细胞。10.如权利要求1-6任一所述的组合物，其特征在于，所述多价多肽以10nM或以下的EC50杀伤淋巴瘤细胞。11.如权利要求1-6或8任一所述的组合物，其特征在于，所述多价多肽杀伤活化的淋巴细胞。12.如权利要求11所述的组合物，其特征在于，所述活化的淋巴细胞是淋巴瘤细胞，代表选自B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞急性淋巴白血病、Burkitt淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、毛细胞白血病、急性骨髓性白血病、T-细胞淋巴瘤、T-细胞非霍奇金氏淋巴瘤、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴白血病和多发性骨髓性白血病的疾病。13.如权利要求11所述的组合物，其特征在于，所述活化的淋巴细胞是选自Priess、GRANTA-519、KARPAS-422、KARPAS-299、DOHH-2、SR-786、MHH-CALL-4、MN-60、BJAB、RAJI、L-428、HDLM-2、HD-MY-Z、KM-H2、L1236、BONNA-12、HC-1、NALM-1、L-363、EOL-1、LP-1、RPMI-8226和MHH-PREB-1细胞系的细胞系。14.如权利要求1-6任一所述的组合物，其特征在于，所述多价多肽以100nM或以下的EC50杀死选自KARPAS-422、DOHH-2、SR-7、MHH-CALL-4、MN-60、HD-MY-Z、NALM-1和LP-1的至少一种淋巴瘤细胞系的细胞。15.如权利要求1-6任一所述的组合物，其特征在于，所述多价多肽以50nM或以下的EC50杀死选自KARPAS-422、DOHH-2、MN-60、NALM-1和LP-1的至少一种淋巴瘤细胞系的细胞。16.如权利要求1-6任一所述的组合物，其特征在于，所述多价多肽以50nM或以下的EC50杀死选自LG2和PRIESS的至少一种B细胞淋巴母细胞细胞系的细胞。17.如权利要求1-6任一所述的组合物，其特征在于，所述细胞是表达MHC II型分子的非淋巴细胞。18.如权利要求1-6任一所述的组合物，其特征在于，所述抗原结合域与HLA-DR的β链结合。19.如权利要求18所述的组合物，其特征在于，所述抗原结合域与HLA-DR的β链的第一个结构域结合。20.如权利要求1-6任一所述的组合物，其特征在于，所述抗原结合域与一种或多种选自DR1-0101、DR2-15021、DR3-0301、DR4Dw4-0401、DR4Dw10-0402、DR4Dw14-0404、DR6-1302、DR6-1401、DR8-8031、DR9-9012、DRw53-B4*0101和DRw52-B3*0101的HLA-DR型结合。21.如权利要求20所述的组合物，其特征在于，所述抗原结合域与至少5种不同的所述HLA DR类型结合。22.如权利要求1-6任一所述的组合物，其特征在于，所述抗原结合域包括VH和VL结构域的组合，其中所述组合可在MS-GPC-1、MS-GPC-6、MS-GPC-8、MS-GPC-10、MS-GPC-8-1、MS-GPC-8-6、MS-GPC-8-9、MS-GPC-8-10、MS-GPC-8-17、MS-GPC-8-18、MS-GPC-8-27、MS-GPC-8-6-2、MS-GPC-8-6-19、MS-GPC-8-6-27、MS-GPC-8-6-45、MS-GPC-8-6-13、MS-GPC-8-6-47、MS-GPC-8-10-57、MS-GPC-8-27-7、MS-GPC-8-27-10和MS-GPC-8-27-41的克隆之一中找到。23.如权利要求1-6任一所述的组合物，其特征在于，所述抗原结合域包括HuCAL VH2和HuCAL Vλ1的组合，其中VH CR3、VL CDR1和VL CDR3在MS-GPC-1、MS-GPC-8、MS-GPC-10、MS-GPC-8-1、MS-GPC-8-6、MS-GPC-8-9、MS-GPC-8-10、MS-GPC-8-17、MS-GPC-8-18、MS-GPC-8-27、MS-GPC-8-6-2、MS-GPC-8-6-19、MS-GPC-8-6-27、MS-GPC-8-6-45、MS-GPC-8-6-13、MS-GPC-8-6-47、MS-GPC-8-10-57、MS-GPC-8-27-7、MS-GPC-8-27-10和MS-GPC-8-27-41的克隆之一中找到。24.如权利要求1-23任一所述的组合物，其特征在于，所述抗原结合域包括HuCAL VH2和HuCAL Vλ1的组合，其中VH CDR3序列选自共有CDR3序列nnnnRGnFDn其中每个n分别代表任何氨基酸残基；和/或其中VL CDR3选自共有CDR3序列QSYDnnnn其中每个n分别代表任何氨基酸残基。25.如权利要求24所述的组合物，其特征在于，所述VH CDR3序列是SPRYGAFDY和/或VL CDR3序列是QSYDLIRH或QSYDMNVH。26.如权利要求1-23任一所述的组合物，其特征在于，所述抗原结合域与包括HuCAL VH2和HuCAL Vλ1组合的抗体竞争抗原结合，其中VH CDR3序列选自共有CDR3序列nnnnRGnFDn每个n分别代表任何氨基酸残基；和/或VL CDR3选自共有CDR3序列QSYDnnnn每个n分别代表任何氨基酸残基。27.如权利要求21所述的组合物，其特征在于，VH CDR3序列是SPRYGAFDY和/或VL CDR3序列是QSYDLIRH或QSYDMNVH。28.如权利要求1-27任一所述的组合物，其特征在于，所述基于抗体的抗原结合域包括用下列通式代表的VL CDR1序列SGSnnNIGnNYVn其中每个n分别代表任何氨基酸残基。29.如权利要求28所述的组合物，其特征在于，所述CDR1序列是SGSESNIGNNYVQ。30.如权利要求1-29任一所述的组合物，其特征在于，所述杀伤是由所述细胞的天然的预编程的过程介导的。31.如权利要求30所述的组合物，其特征在于，所述杀伤是非凋亡性的。32.如权利要求30所述的组合物，其特征在于，所述杀伤依赖于天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶，和/或其中所述杀伤不被zVAD-fmk或zDEVD-fmk抑制。33.如权利要求1-32任一所述的组合物，其特征在于，所述基于抗体的抗原结合域是含有至少一个F(ab′)2抗体片段或小抗体片段的多价多肽的部分。34.如权利要求1-32任一所述的组合物，其特征在于，所述基于抗体的抗原结合域是含有选自Fv、scFv、dsFv、Fab片段的至少两个单价抗体片段的多价多肽的部分，还含有一个或多个交联部分。35.如权利要求1-32任一所述的组合物，其特征在于，所述基于抗体的抗原结合域是含有选自IgG1、2a、2b、3、4、IgA和IgM家族的抗体的至少一种完整抗体的多价多肽的部分。36.如权利要求1-32任一所述的组合物，其特征在于，所述基于抗体的抗原结合域是在与细胞结合前形成的多价多肽的部分。37.如权利要求1-32任一所述的组合物，其特征在于，所述基于抗体的抗原结合域是在与细胞结合后形成的多价多肽的部分。38.如权利要求3或4所述的组合物，其特征在于，所述抗原结合位点与聚合物交联。39.一种核酸，其特征在于，该核酸是权利要求1-32中任一所包含的抗原结合域或其多价多肽的蛋白质编码序列。40.一种载体，其含有权利要求39所述的核酸和与其可操纵性连接的转录调节序列。41.一种携带权利要求39所述的核酸或权利要求40所述的载体中的至少一个的宿主细胞。42.一种产生含有导致或引起细胞杀伤，所述杀伤不需要细胞毒性或免疫学机制的组合物的方法，其特征在于，该方法包括在核酸表达成多价多肽或含有至少一个抗原结合域，所述抗原结合域随后被加工形成多价多肽组合物的多肽的条件下，培养权利要求41所述的细胞。43.如权利要求1-38任一所述的组合物，其特征在于，该组合物配制在药物可接受的载体和/或稀释剂中。44.权利要求1-38任一所述的组合物用于制备治疗动物的药物制剂的用途。45.权利要求39所述的核酸用于制备治疗动物的药物制剂的用途。46.权利要求41所述的宿主细胞用于制备治疗动物的药物制剂的用途。47.权利要求42所述方法用于制备治疗动物的药物制剂的用途。48.如权利要求44-47所述的用途，其特征在于，所述动物是人。49.如权利要求44-48所述的用途，其特征在于，用于治疗细胞增殖性疾病，其中所述基于抗体的抗原结合域是多价多肽的部分。50.如权利要求49所述的用途，其特征在于，所述治疗是治疗与表达MHC II型抗原的转化的细胞有关的疾病。51.如权利要求49或50所述的用途，其特征在于，所述治疗是治疗选自B细胞非霍奇金氏淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、B细胞急性淋巴白血病、Burkitt淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、毛细胞白血病、急性骨髓性白血病、T-细胞淋巴瘤、T-细胞非霍奇金氏淋巴瘤、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴白血病和多发性骨髓性白血病的疾病。52.如权利要求44-48任一所述的用途，其特征在于，所述治疗是治疗与不良活化免疫系统的细胞，例如表达MHC II型的淋巴细胞有关的疾病。53.如权利要求44-48任一所述的用途，其特征在于，所述治疗是治疗选自类风湿性关节炎、幼年期关节炎、多发性硬化、Grave氏病、胰岛素依赖性糖尿病、发作性睡病、牛皮癣、系统性红斑狼疮、强直性脊柱炎、移植排斥，移植物抗宿主病、Hashimoto氏病、重症肌无力、慢性天疱疮、肾小球肾炎、甲状腺炎、胰腺炎、胰岛炎、原发性胆汁性肝硬化、刺激性肠病和Sjogren综合征的疾病。54.如权利要求44-48任一所述的用途，其特征在于，所述疾病选自重症肌无力、类风湿性关节炎、多发性硬化、移植排斥和移植物抗宿主病。55.一种含有权利要求1-38任一所述的组合物的诊断组合物。56.一种含有权利要求1-38任一所述的组合物和一种或多种交联部分的诊断组合物。57.一种杀死在所述细胞表面表达抗原的细胞的方法，其特征在于，该方法包括步骤用多个权利要求1-38任一所述的抗原结合域处理细胞，其中所述基于抗体的抗原结合域是多价多肽的部分，其中不需要细胞毒性或免疫学机制导致或引起所述杀伤。58.一种鉴定能用配制在药物学上可接受的载体和/或稀释剂中的权利要求1-38任一所述的组合物治疗的病人的方法，其特征在于，该方法包括步骤a.从病人分离细胞；b.使所述细胞与权利要求1-38任一所述的组合物接触；和c.测定所述细胞杀伤或免疫抑制的程度。59.一种鉴定可用配制在药物学上可接受的载体和/或稀释剂的权利要求1-38任一所述的组合物治疗的病人的试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有a.权利要求1-38任一所述的组合物；和b.测定所述细胞杀伤或免疫抑制的程度的工具。60.一种试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有a.权利要求1-38任一所述的组合物，和b.一种交联部分。61.一种试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有a.权利要求1-38任一所述的组合物，和b.一种或多种可检测分子，和c.影响和/或检测(i)与抗原的结合的试剂和/或溶液。62.一种细胞毒性组合物，其特征在于，该组合物含有与细胞毒性剂可操纵性连接的权利要求1-38任一所...

【专利技术属性】
技术研发人员：Z纳吉，C布鲁纳，M特萨日，E托马森沃尔夫，
申请(专利权)人：GPC生物技术股份公司，莫弗西斯股份公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]