修饰的T淋巴细胞制造技术

本文提供当细胞死亡多肽被多聚化或二聚化时，引起细胞例如表达细胞死亡多肽的细胞(例如T淋巴细胞)死亡的表达人工细胞死亡多肽的细胞(例如T细胞)。本文还提供所述细胞(例如T淋巴细胞)治疗疾病或癌症的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本申请要求2013年3月15日提交的美国临时专利申请号61/794,294的优先权，其公开内容通过引用以其整体结合到本文中。1.专利
本文的公开内容涉及免疫学领域，更具体地说，涉及T淋巴细胞或其它免疫细胞的修饰。2.专利技术背景T淋巴细胞识别并与包括肿瘤相关或肿瘤特异性抗原在内的特异性抗原相互作用。因为T淋巴细胞能够杀死肿瘤细胞，所以最近25年一直对用T淋巴细胞(抗原特异性T淋巴细胞或经遗传修饰表达一种或多种嵌合抗原受体(CAR；参见例如Eshhar，美国专利号7,741,465；Eshhar，美国专利申请公布号2012/0093842)的T淋巴细胞)靶向肿瘤细胞都十分感兴趣。然而，鉴于T淋巴细胞不仅仅有杀死呈递某种抗原的肿瘤细胞而且还有杀死呈递相同抗原的正常细胞的能力，因此需要将在给予患者后如果脱靶效应证明对患者有害则能够快速杀死所述细胞的安全机制掺入T淋巴细胞中。虽然描述了杀死T细胞的系统(Straathof等(2005)Blood105(11):4247-4254)，但该系统依赖于特殊且难以进行的蛋白质修饰，使该系统不便于实际应用。因此，本领域存在对相对简单且易于构建的快速杀死治疗性T淋巴细胞的安全系统的需要。本文提供包含这类安全系统的T淋巴细胞。专利技术概述本文提供包含当通过多聚试剂(multimerizingagent)(例如二聚试剂(dimerizingagent))多聚化(例如二聚化)时在表达多肽的细胞(例如T淋巴细胞)中产生凋亡诱导信号，导致细胞死亡(例如通过细胞凋亡)的人工可多聚化的(例如可二聚化的)多肽(本文亦称为“细胞死亡多肽”)的遗传修饰细胞，例如免疫细胞，例如T淋巴细胞，例如人T淋巴细胞。虽然不希望受任何特殊机制或理论的束缚，但是认为当细胞的足够数目的多个细胞死亡多肽多聚化(例如二聚化)时，由此产生的聚集的凋亡诱导信号足以杀死细胞，例如使细胞进行细胞凋亡。本文提供的细胞死亡多肽可与任何细胞，特别是任何哺乳动物细胞，例如任何人细胞结合使用。例如，所述细胞死亡多肽提供例如用于细胞治疗剂的有用的安全特征。因此，细胞死亡多肽例如对于包含细胞治疗剂(例如表达嵌合抗原受体的CART淋巴细胞)的药物产品可能是重要的，因为如果这种快速杀死变成需要的，例如如果给予的细胞在接受它们的患者中引起任何不需要的或有害的作用，或如果不再需要在受试者中存在细胞治疗剂(例如T淋巴细胞)，则细胞死亡多肽能够快速杀死细胞治疗剂(例如T淋巴细胞)。因此，在某些实施方案中，本文提供的细胞死亡多肽可与任何可给予的细胞，例如细胞治疗剂、例如哺乳动物细胞治疗剂、例如人细胞治疗剂联合使用。其中可以使用细胞死亡多肽和多聚试剂或二聚试剂的细胞的非限制性实例包括但不限于自然杀伤(NK)细胞、树突细胞(DC)、胚胎干细胞(例如公开于美国专利号7,468,276、8,057,788和8,202,703的胚胎干细胞，其公开内容通过引用以其整体结合到本文中)、来自脐带血、胎盘血、外周血、骨髓、牙髓、脂肪组织、骨软组织等的间充质样干细胞；胚胎干细胞、胚胎生殖细胞、神经嵴干细胞、神经干细胞和分化细胞(例如成纤维细胞等)。细胞死亡多肽和多聚试剂或二聚试剂也可用于肿瘤细胞系，例如用于动物模型实验目的。通常，细胞死亡多肽是使用可给予的多聚试剂或二聚试剂，例如小分子、多肽(非细胞死亡多肽)例如抗体、寡核苷酸或多糖可多聚化的或可二聚化的。细胞死亡多肽不包含FK506结合蛋白(FKBP)、其功能部分、其修饰部分，且多聚试剂或二聚试剂不是FKBP配体。第一个方面，本文提供包含含有凋亡诱导结构域的细胞死亡多肽的细胞(例如T淋巴细胞)，其中所述细胞死亡多肽是使用多聚试剂可多聚化的，其中当所述多聚试剂使所述多肽多聚化时，在所述细胞中产生凋亡诱导信号。在一个具体的实施方案中，所述多聚试剂是二聚试剂；即，多聚试剂引起细胞死亡多肽二聚化。在另一个具体的实施方案中，当所述二聚试剂使所述多肽二聚化时，在所述细胞中产生凋亡诱导信号。在某些实施方案中，所述细胞死亡多肽是包含胞外结构域、跨膜结构域和包含所述凋亡诱导结构域的胞内结构域的跨膜多肽。在具体的实施方案中，细胞死亡多肽的凋亡诱导结构域是或包含胱天蛋白酶，例如胱天蛋白酶9、胱天蛋白酶8或胱天蛋白酶3，例如人胱天蛋白酶9、胱天蛋白酶8或胱天蛋白酶3。在某些实施方案中，二聚试剂是包含与细胞死亡多肽(例如细胞死亡多肽的胞外结构域)特异性结合的至少两个部位的多肽。在具体的实施方案中，多肽是抗体，例如包含至少两个表位或模拟表位结合部位的抗体。在某些实施方案中，仅抗体的抗原结合结构域用作多聚试剂或二聚试剂。在某些实施方案中，细胞死亡多肽的胞外结构域包含抗体与之特异性结合的至少一个表位或模拟表位。在具体的实施方案中，抗体是包含结合存在于细胞死亡多肽的胞外结构域上的两个不同表位或模拟表位的两个不同表位结合部位或模拟表位结合部位的双特异性抗体。在某些实施方案中，抗体是IgG或IgM抗体。在一个具体的实施方案中，可用作多聚试剂或二聚试剂的抗体是通过美国食品与药物管理局(UnitedStatesFoodandDrugAdministration)批准用于任何用途的抗体。在一个实施方案中，可用作多聚试剂或二聚试剂的抗体是与CD20表位或模拟表位(例如人CD20表位或模拟表位)特异性结合的抗体，且细胞死亡多肽的胞外结构域包含抗体与之特异性结余的CD20表位或模拟表位。在某些具体的实施方案中，抗体是利妥昔单抗，且细胞死亡多肽的胞外结构域包含与所述利妥昔单抗特异性结合的CD20表位或CD20模拟表位。在另一个具体的实施方案中，抗体是托西莫单抗(tositumumab)，且细胞死亡多肽的胞外结构域包含与所述托西莫单抗特异性结合的CD20表位或CD20模拟表位。在又一个实施方案中，抗体是替伊莫单抗(ibritumomab)，且细胞死亡多肽的胞外结构域包含与所述替伊莫单抗特异性结合的CD20表位或CD20模拟表位。在又一个实施方案中，抗体是奥法本单抗，且细胞死亡多肽的胞外结构域包含与所述奥法本单抗特异性结合的CD20表位或CD20模拟表位。在另一个具体的实施方案中，抗体是阿仑珠单抗，且细胞死亡多肽的胞外结构域包含与所述阿仑珠单抗特异性结合的CD52表位或CD52模拟表位。在又一个实施方案中，抗体是巴利昔单抗，且细胞死亡多肽的胞外结构域包含与所述巴利昔单抗特异性结合的C本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种T淋巴细胞，其含有包含凋亡诱导结构域的人工细胞死亡多肽，其中所述多肽是使用多聚试剂可多聚化的，其中所述多聚试剂不是FK506结合蛋白(FKBP)配体，且其中当所述多聚试剂使所述多肽多聚化时，在所述T淋巴细胞中产生凋亡诱导信号。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.03.15 US 61/794,2941.一种T淋巴细胞，其含有包含凋亡诱导结构域的人工细胞死亡多肽，
其中所述多肽是使用多聚试剂可多聚化的，其中所述多聚试剂不是FK506
结合蛋白(FKBP)配体，且其中当所述多聚试剂使所述多肽多聚化时，在所
述T淋巴细胞中产生凋亡诱导信号。
2.权利要求1的T淋巴细胞，其中所述多聚试剂是二聚试剂。
3.权利要求2的T淋巴细胞，其中当所述二聚试剂使所述多肽二聚化
时，在所述T淋巴细胞中产生凋亡诱导信号。
4.权利要求1-3中任一项的T淋巴细胞，其中所述多肽是包含胞外结
构域、跨膜结构域和包含所述凋亡诱导结构域的胞内结构域的跨膜蛋白。
5.权利要求4的T淋巴细胞，其中所述多肽的所述凋亡诱导结构域是
或包含胱天蛋白酶。
6.权利要求5的T淋巴细胞，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶9。
7.权利要求5的T淋巴细胞，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶8。
8.权利要求3的T淋巴细胞，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶3。
9.权利要求1或权利要求2的T淋巴细胞，其中所述多聚试剂是蛋白
质、寡核苷酸或多糖。
10.权利要求4-8中任一项的T淋巴细胞，其中所述二聚试剂是蛋白质、
寡核苷酸或多糖。
11.权利要求10的T淋巴细胞，所述二聚试剂是蛋白质。
12.权利要求3-11中任一项的T淋巴细胞，所述二聚试剂是抗体。
13.权利要求3-12中任一项的T淋巴细胞，其中所述抗体包含至少两
个表位结合部位。
14.权利要求4-13中任一项的T淋巴细胞，其中所述多肽的胞外结构
域包含表位。
15.权利要求14的T淋巴细胞，其中所述抗体与所述表位结合。
16.权利要求4-13中任一项的T淋巴细胞，其中所述多肽的胞外结构
域包含模拟表位。
17.权利要求16的T淋巴细胞，其中所述抗体与所述模拟表位结合。
18.权利要求12-17中任一项的T淋巴细胞，其中所述抗体是IgG或IgM
抗体。
19.权利要求12-17中任一项的T淋巴细胞，其中所述抗体已经美国食
品和药物管理局批准用于任何用途。
20.权利要求12-17中任一项的T淋巴细胞，其中所述抗体是利妥昔单
抗，且所述胞外结构域包含与所述利妥昔单抗结合的CD20表位或CD20
模拟表位。
21.权利要求12-17中任一项的T淋巴细胞，其中所述抗体是托西莫单
抗，且所述胞外结构域包含与所述托西莫单抗结合的CD20表位或CD20
模拟表位。
22.权利要求12-17中任一项的T淋巴细胞，其中所述抗体是替伊莫单
抗，且所述胞外结构域包含结合所述替伊莫单抗的CD20表位或CD20模拟
表位。
23.权利要求12-17中任一项的T淋巴细胞，其中所述抗体是奥法本单
抗，且所述胞外结构域包含结合所述奥法本单抗的CD20表位或CD20模拟
表位。
24.权利要求12-17中任一项的T淋巴细胞，其中所述抗体是阿仑珠单
抗，且所述胞外结构域包含与所述阿仑珠单抗结合的CD52表位或CD52
模拟表位。
25.权利要求12-17中任一项的T淋巴细胞，其中所述抗体是巴利昔单
抗，且所述胞外结构域包含结合所述巴利昔单抗的CD25表位或CD25模拟
表位。
26.权利要求12-17中任一项的T淋巴细胞，其中所述抗体是达克珠单
抗，且所述胞外结构域包含结合所述达克珠单抗的CD25表位或CD25模拟
表位。
27.权利要求12-17中任一项的T淋巴细胞，其中所述抗体是
brentuximab，且所述胞外结构域包含结合所述brentuximab的CD30表位或
CD30模拟表位。
28.权利要求12-17中任一项的T淋巴细胞，其中所述抗体是贝利木单
抗，且所述胞外结构域包含结合所述贝利木单抗的B细胞活化因子(BAFF)
表位或BAFF模拟表位。
29.权利要求12-17中任一项的T淋巴细胞，其中所述抗体是西妥昔单
抗，且所述胞外结构域包含结合所述西妥昔单抗的表皮生长因子受体(EGFR)
表位或EGFR模拟表位。
30.权利要求12-17中任一项的T淋巴细胞，其中所述抗体是帕尼单抗，
且所述胞外结构域包含结合所述帕尼单抗的表皮生长因子受体(EGFR)表位
或EGFR模拟表位。
31.权利要求12-17中任一项的T淋巴细胞，其中所述抗体是依法珠单
抗，且所述胞外结构域包含与所述依法珠单抗结合的CD11a的表位或
CD11a的模拟表位。
32.权利要求12-17中任一项的T淋巴细胞，其中所述抗体是伊匹木单
抗，且所述胞外结构域包含结合所述伊匹木单抗的CD152表位或CD152
模拟表位。
33.权利要求12-17中任一项的T淋巴细胞，其中所述抗体是那他珠单
抗，且所述胞外结构域包含结合所述那他珠单抗的α4整联蛋白的表位或α4
整联蛋白的模拟表位。
34.权利要求12-17中任一项的T淋巴细胞，其中所述抗体是巴利昔单
抗，且所述胞外结构域包含结合所述巴利昔单抗的CD25表位或CD25模拟
表位。
35.权利要求12-15或18-35中任一项的T淋巴细胞，其中当所述抗体
与至少两个所述多肽的所述表位结合时，所述多肽的胞内结构域二聚化。
36.权利要求12-15或18-35中任一项的T淋巴细胞，其中当所述抗体
与至少两个所述多肽的所述表位结合时，所述胞内结构域中的相应的胱天
蛋白酶二聚化。
37.权利要求16-35中任一项的T淋巴细胞，其中当所述抗体与至少两
个所述多肽的所述模拟表位结合时，所述多肽的胞内结构域二聚化。
38.权利要求16-34中任一项的T淋巴细胞，其中当所述抗体与至少两
个所述多肽的所述模拟表位结合时，所述胞内结构域中的相应的胱天蛋白
酶二聚化。
39.权利要求2-38中任一项的T淋巴细胞，其中所述胞内结构域的所
述二聚化在所述T淋巴细胞中引发凋亡诱导信号。
40.权利要求1-10中任一项的T淋巴细胞，其中所述胞外结构域是或
包含受体或其配体结合部分。
41.权利要求40的T淋巴细胞，其中所述二聚试剂是或包含所述受体
的两种配体或其配体结合部分。
42.权利要求41的T淋巴细胞，其中当所述二聚试剂与两个所述多肽
的所述受体或其所述配体结合部分结合时，所述多肽被二聚化。
43.权利要求42的T淋巴细胞，其中当所述多肽被二聚化时，在所述
T淋巴细胞中产生凋亡诱导信号。
44.权利要求1-10中任一项的T淋巴细胞，其中所述胞外结构域包含
受体的配体。
45.权利要求44的T淋巴细胞，其中所述二聚试剂包含与所述配体结
合的两个受体或其配体结合部分。
46.权利要求45的T淋巴细胞，其中当所述二聚试剂与两个所述多肽
的所述受体或其所述配体结合部分结合时，所述多肽被二聚化。
47.权利要求46的T淋巴细胞，其中当多肽被二聚化时，在所述T淋
巴细胞中产生凋亡诱导信号。
48.权利要求1-10中任一项的T淋巴细胞，其中所述多肽的所述胞外
结构域包含人工寡核苷酸序列。
49.权利要求48的T淋巴细胞，其中所述二聚试剂是包含通过接头连
接的第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的人工寡核苷酸。
50.权利要求49的T淋巴细胞，其中所述第一寡核苷酸和所述第二寡
核苷酸具有相同序列。
51.权利要求49或权利要求50的T淋巴细胞，其中所述第一寡核苷酸
和所述第二寡核苷酸以头-头或尾-尾构象连接。
52.权利要求48-51中任一项的T淋巴细胞，其中在所述胞外结构域中
所述人工寡核苷酸的核苷酸序列与所述二聚试剂的核苷酸序列互补。
53.权利要求48-51中任一项的T淋巴细胞，其中当所述二聚试剂与两
个所述多肽杂交时，所述多肽被二聚化。
54.权利要求53的T淋巴细胞，其中当所述多肽被二聚化时，在所述
T淋巴细胞中产生凋亡诱导信号。
55.权利要求1-10中任一项的T淋巴细胞，其中所述二聚试剂是包含
通过接头连接的2个结合结构域的人工多肽。
56.权利要求55的T淋巴细胞，其中所述二聚试剂能够结合两个或更
多个所述多肽。
57.一种包含人工细胞死亡多肽的T淋巴细胞，所述人工细胞死亡多肽
含有包含表位的胞外结构域、跨膜结构域和包含胱天蛋白酶9或其功能部
分的胞内结构域。
58.一种包含人工细胞死亡多肽的T淋巴细胞，所述人工细胞死亡多肽
含有包含受体或其配体结合部分的胞外结构域和包含胱天蛋白酶9或其功
能部分的胞内结构域。
59.一种包含人工细胞死亡多肽的T淋巴细胞，所述人工细胞死亡多肽
含有包含配体或其受体结合部分的胞外结构域和包含胱天蛋白酶9或其功
能部分的胞内结构域，其中所述配体结合受体或其配体结合部分。
60.一种包含T淋巴细胞的T淋巴细胞安全系统，所述T淋巴细胞包
含：(a)含有包含表位的胞外结构域、跨膜结构域和包含胱天蛋白酶或其功

\t能部分的胞内结构域的人工细胞死亡多肽；和(b)当与两个所述多肽接触时
使所述多肽二聚化的包含2个表位结合结构域或模拟表位结合结构域的二
聚试剂，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8或胱天蛋白酶
9，且其中所述二聚化在所述T淋巴细胞中产生凋亡诱导信号。
61.一种T淋巴细胞安全系统，其包含(a)包含人工细胞死亡多肽的T
淋巴细胞，所述人工细胞死亡多肽含有包含受体或其配体结合部分的胞外
结构域和包含胱天蛋白酶或其功能部分的胞内结构域；和(b)包含与所述受
体或其配体结合部分结合的两个配体的二聚试剂，其中当所述二聚试剂与
两个所述多肽接触时，所述二聚试剂使所述多肽二聚化，其中所述胱天蛋
白酶是胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8或胱天蛋白酶9，且其中所述二聚化在
所述T淋巴细胞中产生凋亡诱导信号。
62.一种T淋巴细胞安全系统，其包含(a)含有包含配体或其受体结合
部分的胞外结构域和包含胱天蛋白酶或其功能部分的胞内结构域的人工细
胞死亡多肽；和(b)包含与所述配体或其受体结合部分结合的两个受体或其
配体结合部分的二聚试剂，其中当所述二聚试剂与两个所述多肽接触时，
所述二聚试剂使所述多肽二聚化，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶3、胱
天蛋白酶8或胱天蛋白酶9，且其中所述二聚化在所述T淋巴细胞中产生凋
亡诱导信号。
63.权利要求1-62中任一项的T淋巴细胞，其中当在所述T淋巴细胞
中产生多个所述凋亡诱导信号时，所述信号足以杀死所述T淋巴细胞。
64.一种杀死T淋巴细胞的方法，
其中所述T淋巴细胞包含多个各自包含凋亡诱导结构域的人工细胞死
亡多肽，
其中所述多肽可使用不是FK506结合蛋白(FKBP)配体的二聚试剂二聚
化，且其中当所述二聚试剂使所述多肽二聚化时，在所述T淋巴细胞中产
生凋亡诱导信号，
所述方法包括使所述T淋巴细胞与足以用于所述多个人工细胞死亡多
肽二聚化并产生足以杀死所述T淋巴细胞的聚集的凋亡诱导信号的一定量
的所述二聚试剂接触。
65.权利要求64的方法，其中所述多肽是包含胞外结构域、跨膜结构
域和包含所述凋亡诱导结构域的胞内结构域的跨膜蛋白。
66.权利要求64的方法，其中所述多肽的所述凋亡诱导结构域是或包
含胱天蛋白酶。
67.权利要求66的方法，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶9。
68.权利要求66的方法，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶8。
69.权利要求66的方法，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶3。
70.权利要求64-69中任一项的方法，其中所述二聚试剂是蛋白质、寡
核苷酸或多糖。
71.权利要求70的方法，其中所述二聚试剂是蛋白质。
72.权利要求64-71中任一项的方法，其中所述二聚试剂是抗体。
73.权利要求72的方法，其中所述抗体包含至少两个表位结合部位或
至少两个模拟表位结合部位。
74.权利要求64-73中任一项的方法，其中所述多肽的胞外结构域包含
表位。
75.权利要求74的方法，其中所述抗体与所述表位结合。
76.权利要求64-73中任一项的方法，其中所述胞外结构域或所述多肽
包含模拟表位。
77.权利要求76的方法，其中所述抗体与所述模拟表位结合。
78.权利要求72-77中任一项的方法，其中所述抗体是IgG或IgM抗体。
79.权利要求72-77中任一项的方法，其中所述抗体已经美国食品和药
物管理局批准用于任何用途。
80.权利要求72-77中任一项的方法，其中所述抗体是利妥昔单抗，且
所述胞外结构域包含与所述利妥昔单抗结合的CD20表位或CD20模拟表
位。
81.权利要求72-77中任一项的方法，其中所述抗体是托西莫单抗，且
所述胞外结构域包含与所述托西莫单抗结合的CD20表位或CD20模拟表
位。
82.权利要求72-77中任一项的方法，其中所述抗体是替伊莫单抗，且
所述胞外结构域包含结合所述替伊莫单抗的CD20表位或CD20模拟表位。
83.权利要求72-77中任一项的方法，其中所述抗体是奥法本单抗，且
所述胞外结构域包含结合所述奥法本单抗的CD20表位或CD20模拟表位。
84.权利要求72-77中任一项的方法，其中所述抗体是阿仑珠单抗，且
所述胞外结构域包含与所述阿仑珠单抗结合的CD52表位或CD52模拟表
位。
85.权利要求72-77中任一项的方法，其中所述抗体是巴利昔单抗，且
所述胞外结构域包含结合所述巴利昔单抗的CD25表位或CD25模拟表位。
86.权利要求72-77中任一项的方法，其中所述抗体是达克珠单抗，且
所述胞外结构域包含结合所述达克珠单抗的CD25表位或CD25模拟表位。
87.权利要求72-77中任一项的方法，其中所述抗体是brentuximab，且
所述胞外结构域包含结合所述brentuximab的CD30表位或CD30模拟表位。
88.权利要求72-77中任一项的方法，其中所述抗体是贝利木单抗，且
所述胞外结构域包含结合所述贝利木单抗的B细胞活化因子(BAFF)表位或
BAFF模拟表位。
89.权利要求72-77中任一项的方法，其中所述抗体是西妥昔单抗，且
所述胞外结构域包含结合所述西妥昔单抗的表皮生长因子受体(EGFR)表位
或EGFR模拟表位。
90.权利要求72-77中任一项的方法，其中所述抗体是帕尼单抗，且所
述胞外结构域包含结合所述帕尼单抗的表皮生长因子受体(EGFR)表位或
EGFR模拟表位。
91.权利要求72-77中任一项的方法，其中所述抗体是依法珠单抗，且
所述胞外结构域包含与所述依法珠单抗结合的CD11a的表位或CD11a的模
拟表位。
92.权利要求72-77中任一项的方法，其中所述抗体是伊匹木单抗，且
所述胞外结构域包含结合所述伊匹木单抗的CD152表位或CD152模拟表
位。
93.权利要求72-77中任一项的方法，其中所述抗体是那他珠单抗，且
所述胞外结构域包含结合所述那他珠单抗的α4整联蛋白的表位或α4整联
蛋白的模拟表位。
94.权利要求72-77中任一项的方法，其中所述抗体是巴利昔单抗，且
所述胞外结构域包含结合所述巴利昔单抗的CD25表位或CD25模拟表位。
95.权利要求64-75或78-94中任一项的方法，其中当所述抗体与至少
两个所述多肽的所述表位结合时，所述多肽的胞内结构域二聚化。
96.权利要求64-75或78-94中任一项的方法，其中当所述抗体与至少
两个所述多肽的所述表位结合时，所述胞内结构域中的相应的胱天蛋白酶
二聚化。
97.权利要求76-94中任一项的方法，其中当所述抗体与至少两个所述
多肽的所述模拟表位结合时，所述多肽的胞内结构域二聚化。
98.权利要求76-94中任一项的方法，其中当所述抗体与至少两个所述
多肽的所述模拟表位结合时，所述胞内结构域中的相应的胱天蛋白酶二聚
化。
99.权利要求64-94中任一项的方法，其中当所述抗体与两个或更多个
所述多肽的所述表位或所述模拟表位结合时，所述两个或更多个多肽二聚
化。
100.权利要求99的方法，其中当所述抗体与两个所述多肽的所述表位
结合时，相应的胞内结构域二聚化。
101.权利要求99或权利要求100的方法，其中所述多肽的所述二聚化
在所述T淋巴细胞中引发凋亡诱导信号。
102.权利要求64-69中任一项的方法，其中所述胞外结构域是或包含
受体或其配体结合部分。
103.权利要求102的方法，其中所述二聚试剂包含所述受体的两个配
体或其配体结合部分。
104.权利要求103的方法，其中当所述二聚试剂与两个所述多肽的所
述受体或其所述配体结合部分结合时，所述多肽被二聚化。
105.权利要求104的方法，其中所述多肽的所述二聚化在所述T淋巴
细胞中引发凋亡诱导信号。
106.权利要求64-69中任一项的方法，其中所述胞外结构域包含受体
的配体。
107.权利要求106的方法，其中所述二聚试剂包含与所述配体结合的
至少两个受体或其配体结合部分。
108.权利要求107的方法，其中当所述二聚试剂与两个所述多肽的所
述受体或其所述配体结合部分结合时，所述多肽的胞内结构域被二聚化。
109.权利要求108的方法，其中所述胞内结构域的所述二聚化引发在
所述T淋巴细胞中产生凋亡诱导信号。
110.权利要求64-69中任一项的方法，其中所述多肽的所述胞外结构
域包含人工寡核苷酸序列。
111.权利要求110的方法，其中所述二聚试剂是包含任选通过接头连
接的第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的人工寡核苷酸。
112.权利要求111的方法，其中所述第一寡核苷酸和所述第二寡核苷
酸具有相同的核苷酸序列。
113.权利要求112的方法，其中所述第一寡核苷酸和所述第二寡核苷
酸以头-头或尾-尾构象连接。
114.权利要求110-113中任一项的方法，其中在所述胞外结构域中所
述人工寡核苷酸的核苷酸序列与所述二聚试剂的核苷酸序列互补。
115.权利要求110-113中任一项的方法，其中当所述二聚试剂与两个
所述多肽中的所述人工寡核苷酸杂交时，在所述T淋巴细胞中产生凋亡诱
导信号。
116.权利要求64-69中任一项的方法，其中所述二聚试剂是包含通过
接头连接的2个结合结构域的人工多肽。
117.权利要求116的方法，其中所述二聚试剂能够结合两个或更多个
所述多肽。
118.一种杀死T淋巴细胞的方法，
其中所述T淋巴细胞包含各包含胱天蛋白酶或其功能部分的多个人工
细胞死亡多肽，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8或胱天
蛋白酶9，和，
其中所述多肽可使用抗体二聚化，且其中当所述抗体使所述多肽二聚
化时，在所述T淋巴细胞中产生凋亡诱导信号，
所述方法包括使所述T淋巴细胞与足以使足够多的所述多个人工细胞
死亡肽多二聚化并产生足以杀死所述T淋巴细胞的聚集的凋亡诱导信号的
一定量的所述抗体接触。
119.一种杀死T淋巴细胞的方法，
其中所述T淋巴细胞包含各包含胱天蛋白酶或其功能部分的多个人工
多肽，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8或胱天蛋白酶9，
和，
其中所述多个人工多肽各自包含含有结合配体的受体或其配体结合部
分的胞外结构域，
其中所述多肽可使用包含两个所述配体的二聚试剂二聚化，且其中当
所述二聚试剂使两个所述多肽二聚化时，在所述T淋巴细胞中产生凋亡诱
导信号，
所述方法包括使所述T淋巴细胞与足以使足够多的所述多个人工多肽
二聚化且产生足以杀死所述T淋巴细胞的聚集的凋亡诱导信号的一定量的
所述二聚试剂接触。
120.一种杀死T淋巴细胞的方法，
其中所述T淋巴细胞包含各包含胱天蛋白酶或其功能部分的多个人工
细胞死亡多肽，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8或胱天
蛋白酶9，和，
其中所述多个人工多肽各自含有包含结合受体或其配体结合部分的配
体或其受体结合部分的胞外结构域，
其中所述多肽可使用包含两个所述受体或其配体结合部分的二聚试剂
的二聚化，且其中当所述二聚试剂使两个所述多肽二聚化时，在所述T淋
巴细胞中产生凋亡诱导信号，
所述方法包括使所述T淋巴细胞与足以使足够多的所述多个人工细胞
死亡多肽二聚化并产生足以杀死所述T淋巴细胞的聚集的凋亡诱导信号的
一定量的所述二聚试剂接触。
121.一种杀死T淋巴细胞的方法，
其中所述T淋巴细胞包含各包含胱天蛋白酶或其功能部分的多个人工
多肽，其中所述胱天蛋白酶是胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8或胱天蛋白酶9，
和，
其中所述多个人工多肽各自含有包含人工寡核苷酸的胞外结构域，
其中所述多个多肽可使用包含含有第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的寡
核苷酸的二聚试剂二聚化，其中所述第一寡核苷酸和所述第二寡核苷酸具
有相同的核苷酸序列，且其中所述第一寡核苷酸和第二寡核苷酸任选通过
接头连接，且其中所述第一寡核苷酸和所述第二寡核苷酸与所述多肽的所
述胞外结构域中的所述人工寡核苷酸互补，且其中当所述二聚试剂使两个
所述多肽二聚化时，在所述T淋巴细胞中产生凋亡诱导信号，
所述方法包括使所述T淋巴细胞与足以使足够多的所述多个人工细胞
死亡多肽二聚化并产生足以杀死所述T淋巴细胞的聚集的凋亡诱导信号的
一定量的所述二聚试剂接触。
122.权利要求1-59中任一项的T淋巴细胞，其另外包含嵌合抗原受体
(CAR)。
123.权利要求122的T淋巴细胞，其中所述CAR包含在淋巴细胞表
面上表达并引发所述淋巴细胞的活化和/或增殖的内源蛋白质的胞内结构
域、跨膜结构域和与抗原结合的胞外结构域。
124.权利要求123的T淋巴细胞，其中所述CAR包含来自CTLA4或
PD-1(程序性细胞死亡1)的跨膜结构域，其中如果跨膜结构域来自CTLA4，
则所述CAR的胞内结构域和胞外结构域不来自CTLA4；而如果跨膜结构
域来自PD-1，则所述CAR的胞内结构域和胞外结构域不来自PD-1。
125.权利要求122-124中任一项的T淋巴细胞，其中当所述CAR与所
述抗原结合时，所述T淋巴细胞被激活或刺激以增殖。
126.权利要求122-124中任一项的T淋巴细胞，其中所述CAR当在所
述T淋巴细胞表面上表达时，引导T淋巴细胞杀死表达所述抗原的细胞。
127.权利要求124的T淋巴细胞，其中所述CTLA4跨膜结构域是由
人CTLA4基因的外显子3编码的多肽序列。
128.权利要求124的T淋巴细胞，其中所述CTLA4跨膜结构域是或
包含SEQIDNO:1的氨基酸序列。
129.权利要求124的T淋巴细胞，其中所述CTLA4跨膜结构域是或
包含SEQIDNO:2的氨基酸序列。
130.权利要求124的T淋巴细胞，其中所述CTLA4跨膜结构域是或
包含SEQIDNO:3的氨基酸序列。
131.权利要求124的T淋巴细胞，其中所述CTLA4跨膜结构域是或
包含SEQIDNO:4的氨基酸序列。
132.权利要求124的T淋巴细胞，其中所述CTLA4跨膜结构域是或
包含SEQIDNO:5的氨基酸序列。
133.权利要求124的T淋巴细胞，其中所述PD-1跨膜结构域是或包
含SEQIDNO:6的多肽序列。
134.权利要求124的T淋巴细胞，其中所述PD-1跨膜结构域是或包
含SEQIDNO:7的多肽序列。
135.权利要求124的T淋巴细胞，其中所述PD-1跨膜结构域是或包
含SEQIDNO:8的多肽序列。
136.权利要求122-135中任一项的T淋巴细胞，其中所述CAR的所述
胞外结构域包含与所述抗原结合的受体或受体的部分。
137.权利要求122-135中任一项的T淋巴细胞，其中所述CAR的所述
胞外结构域是与所述抗原结合的受体或受体的部分。
138.权利要求122-135中任一项的T淋巴细胞，其中所述CAR的所述
胞外结构域包含抗体或其抗原结合部分。
139.权利要求122-135中任一项的T淋巴细胞，其中所述CAR的所述
胞外结构域是抗体或其抗原结合部分。
140.权利要求122-139中任一项的T淋巴细胞，其中所述CAR的所述
胞外结构域包含单链Fv结构域。
141.权利要求140的T淋巴细胞，其中所述单链Fv结构域包含通过
柔性接头与VH连接的VL，其中所述VL和VH来自结合所述抗原的抗体。
142.权利要求122-141中任一项的T淋巴细胞，其中所述抗原是肿瘤
细胞上的抗原。
143.权利要求142的T淋巴细胞，其中所述肿瘤细胞是实体瘤中的细
胞。
144.权利要求142的T淋巴细胞，其中所述肿瘤细胞是血癌的细胞。
145.权利要求122-144中任一项的T淋巴细胞，其中所述抗原是肿瘤
相关抗原或肿瘤特异性抗原。
146.权利要求145的T淋巴细胞，其中所述肿瘤相关抗原或肿瘤特异
性抗原是Her2、前列腺干细胞抗原(PSCA)、甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原
(CEA)、癌抗原-125(CA-125)、CA19-9、钙网膜蛋白、MUC-1、上皮膜蛋
白(EMA)、上皮肿瘤抗原(ETA)、酪氨酸酶、黑素瘤相关抗原(MAGE)、CD34、
CD45、CD99、CD117、嗜铬粒蛋白、细胞角蛋白、结蛋白、胶质细胞原纤
维酸性蛋白(GFAP)、巨囊性病液体蛋白(GCDFP-15)、HMB-45抗原、蛋白

\t质melan-A(被T淋巴细胞识别的黑素瘤抗原；MART-1)、myo-D1、肌肉特
异性肌动蛋白(MSA)、神经丝、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胎盘碱性磷
酸酶、突触泡蛋白、甲状腺球蛋白、甲状腺转录因子-1、二聚形式的丙酮酸
激酶同工酶M2型(肿瘤M2-PK)、异常ras蛋白或异常p53蛋白。
147.权利要求122-146中任一项的T淋巴细胞，其中所述CAR的所述
胞外结构域通过接头、间隔基或铰链多肽序列与所述跨膜结构域连接。
148.权利要求147的T淋巴细胞，其中所述接头、间隔基或铰链多肽
序列来自CD28。
149.权利要求147的T淋巴细胞，其中所述接头、间隔基或铰链多肽
序列来自CTLA4。
150.权利要求147的T淋巴细胞，其中所述接头、间隔基或铰链多肽
来自PD-1。
151.权利要求122-150中任一项的T淋巴细胞，其中所述CAR的所述
胞内结构域是在T淋巴细胞表面上表达并引发所述T淋巴细胞活化和/或增
殖的蛋白质的胞内结构域。
152.权利要求151的T淋巴细胞，其中所述CAR的所述胞内结构域
是CD3ζ胞内信号转导结构域。
153.权利要求151的T淋巴细胞，其中所述CAR的所述胞内结构域
来自淋巴细胞受体链、TCR/CD3复合蛋白质、Fc受体亚基或IL-2受体亚基。
154.权利要求122-153中任一项的T淋巴细胞，其中所述CAR另外包
含一个或多个协同刺激结构域。
155.权利要求154的T淋巴细胞，其中所述CAR的所述一个或多个
协同刺激结构域包含协同刺激CD27多肽序列、协同刺激CD28多肽序列、
协同刺激OX40(CD134)多肽序列、协同刺激4-1BB(CD137)多肽序列或协
同刺激诱导型T细胞协同刺激(ICOS)多肽序列的一个或多个。
156.权利要求122-155中任一项的T淋巴细胞，其中所述CAR以从N
端到C端的顺序包含：(i)抗原结合结构域；(ii)CD28或CTLA4...

【专利技术属性】
技术研发人员：斯图尔特·阿博特，天建·李，毕涛·梁，
申请(专利权)人：人类起源公司，
类型：发明
国别省市：美国;US