包含抗体的溶液制剂制造技术

包含糖作为稳定剂的包含抗体的溶液制剂。所述的溶液制剂还能包含表面活性剂作为稳定剂。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及稳定的包含抗体的溶液制剂。
技术介绍
随着基因工程技术的发展，使用抗体例如免疫球蛋白、单克隆抗体和人源化抗体作为药物产品成为可能。为了以稳定的数量提供抗体药物产品，有必要确定制剂条件和储存条件，在该条件下，抗体的结构和活性能被保持。当蛋白质以高浓度溶液的形式储存时，它们通常会变质，例如不溶性凝集物的形成，这是必须避免的。特别地，抗体制剂有一个缺点，那就是它们会倾向于形成多聚物，从而在溶液储存期间导致不溶性凝集物。例如，我们发现抗-IL-6受体抗体对于不成熟骨髓瘤细胞有治疗效果(JPA HEI 8-99902)，并能成功的大量生产重构人源化抗体——作为抗-IL-6受体抗体的hPM-1抗体，我们已经试图将这种纯化的抗-IL-6受体抗体制备成药物产品。人源化抗-IL-6受体抗体是一种不稳定的易受物理或化学改变的蛋白质，例如在纯化操作过程中为了除去病毒和其他微生物而在过滤、浓缩、加热和光照的压力下发生交联或凝集。当抗体是通过基因工程技术获得的时候，生产抗体的细胞被大量培养并纯化以产生包含抗体的溶液，然后该溶液被冷冻保存，在制剂之前被解冻。然而，由于在反复的冷冻/解冻循环期间形成了抗体二聚物或不溶性微粒，或在长期储存过程中抗体降解形成了降解产物，溶液中剩余抗体的含量会减少。已经做了很多努力想提供一种在溶液中储存蛋白质的方法，通过添加作为稳定剂的聚合物包括蛋白质如人血清白蛋白或纯化的明胶，或低聚物如多元醇、氨基酸和表面活性剂来防止化学或物理改变，获得了稳定的效果。然而，添加作为稳定剂的生物聚合物如蛋白质是不方便的，例如，它需要非常复杂的去除污染物如病毒和朊病毒的步骤。如果要添加低聚物，最好应当减少到最少。用糖或氨基糖、氨基酸和表面活性剂稳定的冻干抗体制剂也已经被报道了(JPA HEI 2001-503781)。然而，由于对方便使用的溶液制剂(它可能没有被溶解，使用以前被还原)有巨大需求，已经在探寻稳定的包含抗体的溶液制剂。专利技术的公开本专利技术的目的是提供包含抗体的溶液制剂，其中抗体的含量很高，通过在包含抗体的溶液制剂的制备或储存期间抑制不溶性微粒和多聚物的形成，并进一步抑制降解产物的形成，即使经过长期储存它也是稳定的。为了实现上述目的而进行的仔细研究的结果是，我们发现可以通过添加糖来抑制冷冻/解冻循环期间二聚物的形成或长期储存过程中多聚物和降解产物的形成，可以通过添加表面活性剂来显著地抑制冷冻/解冻循环期间不溶性微粒的形成，并在此基础上完成了本专利技术。因此，本专利技术提供(1)一种包含抗体的溶液制剂，其中包含糖作为稳定剂；(2)如(1)中定义的溶液制剂，其中还包含表面活性剂作为稳定剂；(3)如(1)或(2)中定义的溶液制剂，其中，糖是糖醇或非还原性寡糖；(4)如(1)或(2)中定义的溶液制剂，其中，糖是非还原性寡糖；(5)如(1)或(2)中定义的溶液制剂，其中，糖是甘露糖、蔗糖、海藻糖或棉子糖；(6)如(1)或(2)中定义的溶液制剂，其中，糖是蔗糖、海藻糖或棉子糖；(7)如(1)或(2)中定义的溶液制剂，其中，糖是蔗糖或海藻糖； (8)如(1)或(2)中定义的溶液制剂，其中，糖是蔗糖；(9)如(2)到(8)中任何一项定义的溶液制剂，其中，表面活性剂是聚山梨醇80或20；(10)如(1)到(9)中任何一项定义的溶液制剂，其中，抗体是重组抗体；(11)如(10)中定义的溶液制剂，其中，抗体是嵌合抗体、人源化抗体或人抗体；(12)如(1)到(11)中任何一项定义的溶液制剂，其中，抗体是IgG类抗体；(13)如(12)中定义的溶液制剂，其中，IgG类抗体是IgG1类抗体；(14)如(1)到(13)中任何一项定义的溶液制剂，其中，抗体是抗-白介素-6受体抗体或抗-HM1.24抗体；(15)一种在包含抗体的溶液制剂中抑制抗体多聚物分子形成的方法，包括将糖添加到溶液中；(16)一种在包含抗体的溶液的冷冻/解冻循环期间抑制抗体多聚物分子形成的方法，包括将非还原性寡糖添加到溶液中；(17)一种在包含抗体的溶液的冷冻/解冻循环期间抑制抗体多聚物分子形成的方法，包括将非还原性二糖或非还原性三糖添加到溶液中；(18)一种在包含抗体的溶液的冷冻/解冻循环期间抑制不溶性微粒形成的方法，包括加入表面活性剂；(19)一种在包含抗体的溶液的冷冻/解冻循环期间稳定抗体的方法，包括加入非还原性糖和表面活性剂。本专利技术最优选的实例此处所用的“包含抗体的溶液制剂”指的是包含抗体作为活性成分的溶液制剂，用于对动物如人给药，优选在制备过程中不包含冻干步骤的溶液制剂。此处所用的“包含抗体的溶液”可以是包含任何抗体(无论是生物衍生的或是重组的)的溶液，优选培养基，其中，包含抗体的哺乳动物细胞如CHO细胞已经过培养，或是将这种培养基经过例如局部纯化(本体溶液)处理而获得的溶液，或是用于对动物如人给药的如上定义的溶液制剂。此处所用的术语“不溶性微粒”指的是如日本药局方中“一般试验、方法和仪器”部分中的“注射液中不溶性微粒物质试验”章中所定义的10μm或更大的不溶性的颗粒物质。不溶性微粒可以用显微镜、不溶性微粒收集滤器、分析膜滤器或方便地使用自动光阻塞颗粒计数器来测量。此处所用的“不溶性物质”指的是容易发觉的不溶性的物质，如日本药局方中“一般试验、方法和仪器”部分中的“注射液的异质不溶性物质试验”章中所定义的，当在白炽灯光强度大约1000勒克斯下用裸眼检查容器时，注射液必须澄明、不含不溶物。此处所用的“多聚物”和“降解产物”分别指的是构成制剂活性成分的抗体分子的多聚物和降解产物，它们的含量可以用随后描述的基于凝胶渗透色谱的峰面积百分数法(peak area percentage method)来测量。用在本专利技术溶液制剂中的抗体不受特殊限制，只要它们能和特定抗原结合，小鼠抗体、大鼠抗体、兔抗体、羊抗体、嵌合抗体、人源化抗体和人抗体等都是合适的抗体。抗体可以是多克隆的或单克隆的，但优选单克隆的，因为能稳定地生产均一的抗体。多克隆抗体和单克隆抗体可以用本领域技术人员熟知的方法来制备。生产单克隆抗体的杂交瘤可以用下列已知技术基本地构造。特定抗原或表达特定抗原的细胞被用作免疫抗原来免疫宿主细胞(根据标准免疫技术)，产生的免疫细胞和已知母细胞融合(用标准细胞融合技术)，然后用标准筛选法筛选融合细胞来寻找生产单克隆抗体的细胞(杂交瘤)。可以用例如Milstein等人的方法(Kohler.G.和Milstein，C.，Methods Enzymol.(1981)733-46)来进行杂交瘤的构建。如果抗原具有低的免疫原性，它可以和免疫原性大分子如白蛋白结合，用于免疫接种。也可以使用重组抗体，它是用基因工程技术，通过用包含了克隆自杂交瘤的抗体基因的合适载体转染宿主生产的(参见例如Carl，A.K.Borrebaeck，James，W.Larrick，THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES，MACMILLAN PUBLISHERS LTD在英国出版，1990)。特别地，抗体可变区(V区)的cDNA序列是用逆转录酶合成自杂交瘤的mRNA的。一旦获得编码感兴趣抗体V区的DNA序列，它们就被连接到编码感兴趣抗体恒定区(C区)的DNA序列上，并被整本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含抗体的溶液制剂，其中包含糖作为稳定剂。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：角田正也，菊池淳，水岛秀文，今枝好美，
申请(专利权)人：中外制药株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]