一种百两金皂苷B原料或其制剂的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种百两金皂苷B原料或其制剂的检测方法，该方法采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定活性成分百两金皂苷B的含量，从而使百两金皂苷B原料及其制剂的内在质量能够得到有效控制。该方法线性关系、精密度、稳定性、重复性、加样回收率、耐受性等均符合定量分析要求。利用该方法首次测定了百两金皂苷B原料及其制剂的含量，为百两金皂苷B的新药开发研究提供了新的检测方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药
，设及药品的质量控制方法，具体是指百两金皂巧B原 料或其制剂的分析检测方法。
技术介绍
百两金皂巧B的化学名称为西克拉敏A3-0-a-鼠李化喃糖-(1 一 2) - 0 -D-葡萄 化喃糖-(1 一 4) - -a 阿拉伯化喃糖巧，是存在于紫金牛 科紫金牛属植物百两金、朱砂根、红毛走马胎等多种植物中的有效成分，具有细胞毒活性和 抗肿瘤、抗炎等药理作用。在深入研究开发该活性成分的过程中，需要将其提取制备成含量 大于90%的中药1类新药原料，并进而制备成制剂。目前未见百两金皂巧B原料药及其制 剂的定量分析方法，为深入探讨本品的成药性及药理活性，我们从该药材中提取分离得到 百两金皂巧B单体，并按照对照品研究技术指导原则进行了纯化及结构鉴定。本专利技术采用 高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD)建立起百两金皂巧B原料或其制剂的定量 分析方法，为进一步的深入研究和新药开发提供新的分析手段和参考数据。
技术实现思路
本专利技术提供一种使用高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD)测定百两金 皂巧B原料或其制剂的定量分析方法，其特征在于W十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；W 体积比为30 : 70~40 : 60己膳-水为流动相；用蒸发光散射检测器检测，理论板数按百 两金皂巧B计算不得低于5000 ;其主要步骤包括色谱系统适用性试验、对照品和样品溶液 制备、进样分析测定并计算含量。 根据前述的检测方法，其中，所述百两金皂巧B原料采用如下方法制备：将百两金 粉碎，用50 %~80 %的己醇提取，将提取液减压浓缩，上大孔吸附树脂，分别用水和30 %己 醇冲洗除杂，再用80%己醇洗脱，洗脱液减压浓缩干燥，上硅胶柱层析，W体积比为70 : 30 的己酸己醋-甲醇洗脱，合并富含百两金皂巧B的流份，除去溶剂，甲醇重结晶，干燥、即得； 其制剂为百两金皂巧B原料用常规工艺制备而成的胶囊或片剂。 根据前述的检测方法，其中，所述百两金皂巧B对照品是采用制备型高效液相色 谱仪对百两金皂巧B原料进行分离纯化而得，其制备的色谱条件为；W十八烷基硅烷键合 硅胶为填充剂；体积比为60 : 40~70 : 30的甲醇-水为流动相；在205皿波长下监测； 其供试品采用制备液相使用的流动相配制成饱和溶液，取上清液进样，收集目标峰流出液， 浓缩、干燥、检查纯度，即得。 根据前述的检测方法，其中，所述百两金皂巧B原料或其制剂的供试品溶液是用 50 %~70 %的甲醇或己醇水溶液作为溶剂提取。[000引根据前述的检测方法，其中，所述采用HPLC-ELSD法测定百两金皂巧B原料或其制 剂含量的方法包括如下步骤和优化条件： 照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID)测定： 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；己膳-水 (35 : 65)为流动相；蒸发光散射检测器检测，理论板数按百两金皂巧B计算不得低于 4000。 对照品溶液制备取百两金皂巧B对照品适量，精密称定，加50 %甲醇制成每1ml含 0. 3mg的百两金皂巧B对照品溶液，即得。[001引供试品溶液制备取百两金皂巧B原料30mg，精密称定，置100ml量瓶中，加入50% 己醇适量，超声处理使溶解，用50 %己醇稀释至刻度，摇匀，过滤或离屯、，取续滤液或上清 液，即得。[001引测定方法分别精密吸取对照品溶液5yL、20yL;供试品溶液10yL;注入液相色 谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。 本专利技术所提供的百两金皂巧B原料或其制剂中百两金皂巧B含量的HPLC-ELSD检 测方法具有如下优点： (1)本专利技术提供的方法首次引入了百两金皂巧B原料或其制剂中有效成分百两金 皂巧B的含量测定，从而使百两金皂巧B的质量控制方法更加科学合理； (2)本专利技术所提供的的百两金皂巧B原料或其制剂的分析方法首次将HPLC-ELSD 法用于百两金皂巧B原料或其制剂中活性成分百两金皂巧B的含量测定，具有良好的线性 关系、精密度、重复性、稳定性、耐受性和回收率，测定简便快速。【附图说明】 图1为百两金皂巧B对照品溶液的HPLC-ELSD色谱图； 图2为百两金皂巧B原料的HPLC-ELSD色谱图； 图3为百两金皂巧B胶囊的HPLC-ELSD色谱图。【具体实施方式】 1仪器、试药与样品 高效液相色谱仪（美国安捷伦1100系列），包括在线真空脱气机佑1322A)， 四元梯度累佑1311A)，自动进样器佑1313A)，柱温箱佑1316A)，DAD检测器佑1314A)， 化emstation色谱工作站；Alltec证LSD2000型蒸发光散射检测器；制备型高效液相色谱 仪（美国贝克曼库尔特肥CHMAN125P型），包含SYSTEMGOLD125PSolventModule和16化 Detector等；Milli-Q超纯水器（美国Milipore公司）；Microfuge18台式离屯、机（美国贝 克曼库尔特有限公司）；KQ-500DE超声清洗机（昆山市超声仪器有限公司，功率300W，频率 40曲Z) ;BP-210D型电子分析天平（德国赛多利斯，十万分之一）；过滤装置（Autoscience) 及微孔滤膜化 45]im)。色谱柱；WatersSymmetiTCi8(150mmX4. 5mm，5]im);Phenomenex GeminiCi8(150mmX4.5mm，5]im);AlltechAltimmaCi8(250mmX4.5mm，5]im);制备色谱柱； 邸CHMANULTRAPREPC18 (21.ImmX150mm，10ym);保护巧；pheno皿exCig。 百两金皂巧B自制（烙点；263-265°C，薄层色谱多个展开及显色系统均显示一个 斑点，采用HPLC-ELSD峰面积归一化法计算其质量浓度大于98%，符合定量分析用中药化 学对照品纯度的质量要求）；己膳为色谱纯，水为高纯水；其余试剂均为分析纯。百两金药 材购买于四川省某公司，经本专利技术人鉴定为百两金（ArdisiacrispaCrhunb. )DC.A.)。 2百两金皂巧B对照品制备 将百两金粉碎，用50%~80%的己醇提取，将提取液减压浓缩，上大孔吸附树脂， 用水和30%己醇冲洗除杂，再用80%己醇洗脱，洗脱液减压浓缩干燥，上硅胶柱层析，W体 积比为70 : 30的己酸己醋-甲醇洗脱，合并富含百两金皂巧B的流份，除去溶剂，甲醇重结 晶，用相应流动相溶解结晶物使成饱和溶液，上清液注入制备型高效液相色谱仪分离纯化； 色谱条件；Ci8柱；流动相：体积比为60 : 40~68 : 32的甲醇-水；检测波长；205皿，收 集目标峰流出液，浓缩、干燥，即得。将制得的百两金皂巧B对照品采用高分辨质谱化R-FAB-M巧给出精确分子量：m/zl097. 5432，对应分子式为；〔53也〇22化（分子量计算值为；1〇97. 5509);其碳、 氨核磁共振信号根据gCOSY，HMQC，HMBC所显示的相关关系得到了归属，结构鉴定为西 克拉敏A3-0-a-鼠李化喃糖-(1 一 2)-e-D-葡萄化喃糖-(1 一 4)--a 阿拉伯化喃糖巧。 本专利技术制备的虎舌红素B经高效液相色谱-蒸发光散射本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种使用高效液相色谱‑蒸发光散射检测法(HPLC‑ELSD)测定百两金皂苷B原料或其制剂的定量分析方法，其特征在于以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为30∶70～40∶60的乙腈‑水为流动相；用蒸发光散射检测器检测，理论板数按百两金皂苷B计算不得低于4000；其主要步骤包括色谱系统适用性试验、对照品和样品溶液制备、进样分析测定并计算含量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张琦，饶开晴，伍红，陈炼红，
申请(专利权)人：西南民族大学，
类型：发明
国别省市：四川;51