一种治疗B细胞淋巴瘤的药物组合物制造技术

本发明专利技术涉及一种治疗Ｂ细胞淋巴瘤的药物组合物，该药物由利妥昔（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ，Ｒｉｔｕｘａｎ，美罗华）和ＳＡＨＡ（ｓｕｂｅｒｏｙｌａｎｉｌｉｄｅ　　ｈｙｄｒｏｘａｍｉｃａｃｉｄ，辛二酰苯胺氧肟酸）组成，该药物有明显协同作用，较单用可显著抑制Ｂ淋巴瘤细胞生长增殖，协同诱导凋亡，协同抑制ＮＦ－κＢ活性和下调ＢＣＬ－ＸＬ表达。两药组合在提高疗效的同时可大幅降低治疗费用。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种治疗癌症的药物组合物，尤其涉及一种治疗B细胞淋巴瘤的药物组合物。
技术介绍
淋巴瘤是一种起源于淋巴组织的恶性肿瘤，近年来在世界范围内的发病率几乎增长了一倍，严重危害人类的健康。B细胞淋巴瘤是最常见的淋巴瘤种类，约占淋巴瘤的50-60％。除早期、局限性、低度恶性的B细胞淋巴瘤可单纯使用放射治疗外，目前主要的治疗方式仍为联合化疗。采用联合化疗可使约50-60％的患者获得疾病缓解，20-30％的患者获得长期生存，但大部分患者对治疗无效或治疗后迅速复发，疾病进展快，预后差。更重要的是，化疗的毒副反应大，患者尤其是老年或合并其它疾病患者不能耐受。CD20广泛表达于B细胞淋巴瘤细胞表面，是开展免疫治疗的理想靶点。近年来，人-鼠嵌合性抗CD20单克隆抗体利妥昔(Rituximab，Rituxan，美罗华)已成功应用于临床，通过抗体介导的针对细胞特异表面标记的免疫治疗，具有低毒，低骨髓抑制和较高特异性的特点，为B细胞淋巴瘤的治疗开辟了新途径。然而患者的治疗费用昂贵，部分患者在治疗早期或疾病复发时发生耐药。因此，研究利妥昔和其他药物联合应用的可行性对于提高疗效、降低费用具有重要意义。组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase，HDAC)抑制剂可通过抑制HDAC，阻断由于HDAC募集功能紊乱而导致的基因表达受抑，有显著的抗肿瘤效应。其中SAHA(suberoylanilide hydroxamic acid，辛二酰苯胺氧肟酸)已进入II期临床，治疗复发的B细胞淋巴瘤患者有一定的疗效，是一种极具潜力的靶向治疗药物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种治疗B细胞淋巴瘤的药物组合物。本专利技术的目的是通过以下技术方法来实现的本专利技术一种治疗B细胞淋巴瘤的药物组合物，该药物由利妥昔和SAHA组成。利妥昔用量为1-100μg/ml，SAHA用量为1-10μM。利妥昔用量可为1-50μg/ml，SAHA用量可为1-5μM。利妥昔用量优选为20μg/ml，SAHA用量优选为2.5μM。本专利技术应用了以下两种人的细胞株对利妥昔敏感的滤泡型淋巴瘤SU-DHL-4细胞株，和对利妥昔耐药的Burkitt’s淋巴瘤Daudi细胞株。该两种人的细胞株分别经不同浓度的利妥昔(0、1、20、50、100μg/ml)和SAHA(0、1、2.5、5、10μM)联合处理，进行了MTT实验、流式细胞仪检测annexin-V和线粒体跨膜电位实验、免疫印迹分析实验及核蛋白胶电泳转移检测实验。本专利技术所公开的一种治疗B细胞淋巴瘤的药物组合物，其优点表现在通过使用本专利技术的药物组合物，发挥两种药的协同作用，可以协同抑制B淋巴瘤细胞生长增殖，协同诱导B淋巴瘤细胞凋亡，协同抑制NF-κB活性和下调BCL-XL表达。两药组合在提高疗效的同时下可大幅降低费用。附图说明图1A显示单用利妥昔抑制B淋巴瘤细胞生长的效果图。图1B显示单用SAHA抑制B淋巴瘤细胞生长的效果图。图1C显示合用利妥昔、SAHA抑制B淋巴瘤细胞生长的效果图。图2A显示流式细胞仪检测滤泡型淋巴瘤SU-DHL-4细胞株凋亡对照组的效果图。图2B显示单用利妥昔诱导滤泡型淋巴瘤SU-DHL-4细胞株凋亡的效果图。图2C显示单用SAHA诱导滤泡型淋巴瘤SU-DHL-4细胞株凋亡的效果图。图2D显示合用利妥昔、SAHA诱导滤泡型淋巴瘤SU-DHL-4细胞株凋亡的效果图。图2E显示合用利妥昔、SAHA诱导滤泡型淋巴瘤SU-DHL-4细胞株凋亡的协同指数效果图。图2F显示用流式细胞仪检测Burkitt’s淋巴瘤Daudi细胞株凋亡对照组的效果图。图2G显示单用利妥昔诱导Burkitt’s淋巴瘤Daudi细胞株凋亡的效果图。图2H显示单用SAHA诱导Burkitt’s淋巴瘤Daudi细胞株凋亡的效果图。图2I显示合用利妥昔、SAHA诱导Burkitt’s淋巴瘤Daudi细胞株凋亡的效果图。图2J显示合用利妥昔、SAHA诱导Burkitt’s淋巴瘤Daudi细胞株凋亡的协同指数效果图。图3显示单用及合用利妥昔或SAHA作用24小时线粒体跨膜电位的结果图。图4A显示单用及合用利妥昔或SAHA对滤泡型淋巴瘤SU-DHL-4细胞株Caspase-3、PARP和BCL-XL影响的结果图。图4B显示显示单用及合用利妥昔或SAHA对Burkitt’s淋巴瘤Daudi细胞株Caspase-3、PARP和BCL-XL影响的结果图。图5显示单用及合用利妥昔或SAHA对B淋巴瘤细胞NF-κB活性影响的结果图具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步描述。实施例1一种治疗B细胞淋巴瘤的药物组合物制备本专利技术一种治疗B细胞淋巴瘤的药物组合物，该药物由利妥昔和SAHA按照一定的浓度比例混合制得。其中利妥昔用量为20μg/ml，SAHA用量为2.5μM。实施例2一种治疗B细胞淋巴瘤的药物组合物制备本专利技术一种治疗B细胞淋巴瘤的药物组合物，该药物由利妥昔和SAHA按照一定的浓度比例混合制得。其中利妥昔用量为1μg/ml，SAHA用量为10μM。实施例3一种治疗B细胞淋巴瘤的药物组合物制备本专利技术一种治疗B细胞淋巴瘤的药物组合物，该药物由利妥昔和SAHA按照一定的浓度比例混合制得。其中利妥昔用量为100μg/ml，SAHA用量为1μM。实施例4一种治疗B细胞淋巴瘤的药物组合物药效评价(一)试剂利妥昔购自上海罗氏公司，-4℃保存。SAHA由上海默沙东赠送，溶解于DMSO中，储存液浓度为100mM，-20℃保存。MTT、碘化丙啶(PI)、rhodamine 123(Rh123)、二硫苏糖醇购自Sigma公司。抗PARP、caspase-3、BCL-XL、NF-κB(P65)、过氧化物酶偶联的羊抗鼠二抗和羊抗兔二抗均购自Santa Cruz公司。抗β-actin购自Abcam公司。(二)细胞培养，细胞存活和细胞形态学本研究应用了以下两种人的细胞株滤泡型淋巴瘤SU-DHL-4细胞株，对利妥昔敏感，Burkitt’s淋巴瘤Daudi细胞株，对利妥昔耐药。淋巴瘤细胞在5％CO2-95％空气，饱和湿度以及37℃的条件下，培养于RPMI-1640培养液中(Gibco/BRL)，并加入10％胎牛血清。在每次实验中，细胞接种密度为2×105/ml。细胞的存活率采用台盼兰拒染实验检测。细胞形态学观察采用瑞氏染色法。(三)MTT实验 在96孔板中，用不同浓度利妥昔或SAHA处理细胞。72小时后，向每孔中加入0.1mg MTT，在37℃下孵育4小时后，在分光光度计570nm处测量标本吸光度值。(四)流式细胞仪检测annexin-V和线粒体跨膜电位细胞凋亡用ApoAlert Annexin V-FITC Apoptosis kit(BD)进行分析。在检测线粒体跨膜电位中，细胞用PBS洗后，在37℃下与10μg/mlRh123孵育30分钟，然后再用50μg/ml PI染色。荧光强度用流式细胞仪进行测量。(五)免疫印迹分析用200ml Laemmli裂解缓冲液(0.5M Tris-HCl，pH6.8，2mM EDTA，10％glycerol，2％SDS and 5％β-mercaptoethanol)裂解5×106细胞。蛋白裂解物(20μg)用于10％聚丙烯酰胺凝胶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗Ｂ细胞淋巴瘤的药物组合物，其特征在于该药物由利妥昔和ＳＡＨＡ组成。

【技术特征摘要】
1.一种治疗B细胞淋巴瘤的药物组合物，其特征在于该药物由利妥昔和SAHA组成。2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于利妥昔用量为1-100μg/ml，SAHA用量为1-10μM。3.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈竺，陈赛娟，赵维莅，王兰，刘元华，阎金松，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属瑞金医院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]