一种制备基因工程Ｎ－乙酰化胸腺素α１的方法技术

本发明专利技术公开了一种制备基因工程Ｎ－乙酰化胸腺素α１的方法。本发明专利技术所提供的制备Ｎ－乙酰化胸腺素α１的方法，包括以下步骤：１）用基因工程大肠杆菌制备含Ｎ－乙酰化胸腺素α１多肽序列的前体蛋白或多肽；２）内肽酶酶切上述步骤１）的含Ｎ－乙酰化胸腺素α１多肽序列的前体蛋白或多肽，纯化得到Ｎ－乙酰化胸腺素α１。本发明专利技术的制备基因工程Ｎ－乙酰化胸腺素α１的方法，具有成本低廉，可以提高Ｎ－乙酰化胸腺素α１的表达量，简化切割，方便Ｎ－乙酰化胸腺素α１的纯化，从而提高Ｎ－乙酰化胸腺素α１的生产效率，具有广阔的临床应用前景等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种制备基因工程N-乙酰化胸腺素a 1的方法。
技术介绍
胸腺素a是一族具有相同或相似N-端序列的免疫调节多肽，包括胸腺素a原、 胸腺素a 1和胸腺素a 11等。其中，胸腺素a 1和胸腺素a 11是胸腺素a原在体内降 解的产物。天然来源的胸腺素a的N-端都具有N-乙酰化修饰，N-乙酰化修饰对胸腺素 a 1的体内稳定性具有重要作用。采用化学方法合成的N-乙酰化胸腺素a 1已经上市，商 品名为日达仙，用于治疗病毒性肝炎等，疗效显著。但是采用化学方法合成N-乙酰化胸 腺素a l成本高、污染大，制约了该药的广泛使用。利用基因工程大肠杆菌制备多肽具有成 本低、安全性好、适合于规模化生产等优势，但利用大肠杆菌生产的多肽一般没有N-乙酰 化修饰，因此目前已经报道的基因工程方法制备的胸腺素al均为非乙酰化的。目前已发 现用基因工程大肠杆菌可以制备N-乙酰化胸腺素a原(Wu J， Chang S， Gong X， Liu D， Ma. Q. Identification ofN_terminal acetylation of recombinant human prothymosin本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备基因工程Ｎ－乙酰化胸腺素α１的方法，包括以下步骤：　　１）用基因工程大肠杆菌制备含Ｎ－乙酰化胸腺素α１多肽序列的前体蛋白或多肽；　　２）内肽酶酶切上述步骤１）的含Ｎ－乙酰化胸腺素α１多肽序列的前体蛋白或多肽，纯化得到Ｎ－乙酰化胸腺素α１。

【技术特征摘要】
一种制备基因工程N-乙酰化胸腺素α1的方法，包括以下步骤1)用基因工程大肠杆菌制备含N-乙酰化胸腺素α1多肽序列的前体蛋白或多肽；2)内肽酶酶切上述步骤1)的含N-乙酰化胸腺素α1多肽序列的前体蛋白或多肽，纯化得到N-乙酰化胸腺素α1。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述含N-乙酰化胸腺素a 1多肽序列的 前体蛋白为N-乙酰化胸腺素a 1与谷胱甘肽转移酶形成的融合蛋白。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述含N-乙酰化胸腺素a 1多肽序列的 前体蛋白或多肽为N-乙酰化胸腺素a原或其变异体；所述胸腺素a原变异体是至少满足下述条件之一的多肽1) 缺失序列表中序列3的自氨基末端第100-109位的氨基酸残基；2) 将序列表中序列3的自氨基末端第100-109位这10个氨基酸残基中至少一个氨基 酸残基进行替换；3) 将序列表中序列3的自氨基末端第36位和第43位均由甘氨酸替换为丙氨酸；4) 将序列表中序列3的自氨基末端第35位、第37位、第39位、第42位和第49位这5 个位置的Asn中的至少一个替换或缺失；5) 缺失序列表中序列3的自氨基末端第32-52位的氨基酸残基；6) 缺失序列表中序列3的自氨基末端第69-109位的氨基酸残。4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述胸腺素a原变异体是下述多肽之1) 是由缺失序列表中序列3的自氨基末端第100-109位的氨基酸残基得到的多肽；2) 是将序列表中序列3的自氨基末端第100-109位这10个氨基酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴军，刘波，巩新，唱韶红，马清钧，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]