虹彩病毒抗原活性多肽及其用途制造技术

本发明专利技术提供一新颖虹彩病毒抗原活性多肽与其抗体，以及利用该抗体进行虹彩病毒检测的方法。本发明专利技术另提供检测虹彩病毒的套组，与包含上述多肽与抗体的组合物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术与免疫学与疾病检测有关。
技术介绍
石斑鱼是现今养殖界公认为亚太地区最重要的经济鱼种，也为台湾水产养殖业带 来莫大的经济效益，估计每年产值可高达20 50亿元新台币，全球市场占有率达42% ，产 量高达12. 367公吨，产值及产量均位居世界第一。但是因为鱼苗与稚鱼的养成多为室内密 集式的饲养，造成石斑鱼病害感染的情况严重。目前台湾石斑养殖的病毒害以神经坏死病 毒(nervousnecrosis virus)和虹彩病毒(iridovirus)为最严重，感染往往造成石斑鱼苗 大量死亡，严重威胁台湾养殖产业。 虹彩病毒为正二十面体，大小约120-300nm的双股DNA病毒，近些年来已被证实会 对20种以上的鱼种造成感染，其中石斑种苗的感染率在60%以上。虹彩病毒科主要分成五 个病毒属，分另ll为Iridovirus、 Chlorirdovirus、 Ranavirus及Lymphocystivirus，以及在 2003年被发现一新的病毒属Megalocystivirus。在台湾目前发现有两种病毒属的存在，分 别为Ranavirus及Megalocystivirus，两种病毒属皆会造成高的疾病发生率及死亡率。 目前检测虹彩病毒的方法多以聚合酶链反应为主，但此方法耗时及耗材，且需有 实验室设备才能完成，对于目前渔民来说诸多不便且成本较高。因此，若能开发出可携带的 快速诊断试片，仅需肉眼观察即可判断是否感染病症，除了可以早期诊断疾病的存在，减少 养殖户在购买被感染的鱼苗时的经济损失，基于各国检疫及因应出口贸易竞争的需求，在 市场上亦极具产业利用性。专利
技术实现思路
本专利技术的特征在于发现一段新颖的氨基酸序列，其为虹彩病毒的抗原决定区位之 一，根据此抗原决定区位制造出来的单株或多株抗体，可进一步应用于各种检测套组及检 测方法，包括快速诊断试片，克服传统的细胞培养与病毒分离等繁琐步骤的缺点，可以更快 速、更经济的侦测水生动物虹彩病毒的感染。 因此，本专利技术的一个实施方案为一来自于虹彩病毒的核衣蛋白且具有抗原活性的多肽，其系由SEQ ID NO :13的氨基酸序列所组成。 本专利技术的另一实施方案为一组合物，其包含如上述的多肽。 本专利技术的另一实施方案为一种以上述组合物所制造的抗体，以及制造抗体的方 法。 本专利技术的其它实施方案为一种检测虹彩病毒感染的方法，其系使用如上述的抗 体。本专利技术的又一实施方案为一种检测虹彩病毒的套组，其包含 (l)一支持固相； (2)如权利要求第5项所述的抗体，其系附着于前述支持固相上； (3)讯号产生工具，其中该讯号产生工具能操作性地与虹彩病毒或其蛋白质片段结合，并与前述(2)的抗体结合而产生讯号； (4)相关试剂及清洁剂。 本专利技术的其它实施方案为一种组合物，其包含如上述的抗体。 本专利技术的又另其它实施方案为一种治疗或预防虹彩病毒感染的医药组合物，其系包含如上述的抗体与医学上可接受的载体。 本专利技术的另一实施方案为一饲料添加剂，其系包含如上述的抗体。 附图简述 前文的所述以及实施方式可藉由附图达到更好的说明效果。为了加强本专利技术的说明，将适当的实施例的图式列举于此。要注意的是，本专利技术并不受限于列举于此的说明。 附图说明图1为使用本专利技术的单株抗体进行间接免疫荧光测试的结果，左上、右上与左下分别为3株不同实验室编号的单株抗体，标号分别为Ml、 M2、 M3，右下C-为阴性控制组。 图2为使用本专利技术的单株抗体进行西方墨点转渍法测试的结果，图2A、2B与2C分别为250倍、2000倍及5000倍稀释的抗体的结果。M表示为标准蛋白质分子量标志(KDa)，道1与道2的样本皆为虹彩病毒颗粒，道3的样本为老鼠组织，道4的样本为石斑鱼检体。 图3为使用本专利技术的单株抗体进行免疫墨点法的结果。实线黑框内的六十孔为60株基因型别属于Ranavirus病毒属，虚线黑框内的二十孔为20株基因型别属于Megalocytivirus病毒属。长短虚线框内，C+栏为基因型Ranavirus的病毒，第一格为力价为105 8TCID5。/ml的病毒，往下进行5次10倍连续稀释，C-为阴性的石斑鱼检体当控制组。 图4为使用本专利技术的抗体，针对Ranavirus及Megalocytivirus的核衣蛋白中共同保留区域的氨基酸片断所合成11段多肽，进行免疫墨点法的结果。 图5A为本专利技术的快速诊断试片组件图。 图5B为本专利技术的快速诊断试片结果判读说明。 图6A为使用本专利技术的快速诊断试片，实际检测病毒力价为10，CID5。/ml(标号l)、108TCID5。/ml (标号2) 、 107TCID5。/ml (标号3) 、 106TCID5。/ml (编号4) 、 105TCID5。/ml (编号5)、104TCID5。/ml (标号6)的结果，标号7的试片为阴性检体。 图6B为使用机动型扫描式快速检验分析仪，分析图6A试片检测线数值与病毒力价的关系图。 图7为使用快速检验试剂检验四种不同样本的结果，编号1试片样本为病毒力价为108TCID5。/ml的虹彩病毒，编号2试片样本为淋巴囊肿病毒(Lymphocystivirus)病毒属，编号3试片样本为阴性鱼体乳剂，以及编号4试片样本为神经坏死病毒(nervous necrosisvirus)。 主要组件符号说明 1样本吸收垫 2连接垫 3塑料支持底座 4吸收垫 5硝纤维膜 6测试线 7控制线 实施方式 本专利技术提供了一来自于虹彩病毒的核衣蛋白且具有抗原活性的多肽，其具有SEQID N0:13氨基酸序列，或是在结构及功能上的变体。术语在结构及功能上的变体意指一个和SEQ ID冊13氨基酸序列具有至少80%以上相似度的多肽，且该多肽具有抗原的活性。此变体可由SEQ ID N0:13的突变而来，例如在一个不影响抗原活性的位置进行突变。因为SEQ IDN0:13只具有17个氨基酸，因此熟知技艺的人士可以轻易地推测出其有关或无关抗原活性的氨基酸序列位置，例如利用点突变分析。进一步也可利用以相似化学性质的氨基酸加以取代，而不影响到多肽的活性。任何SEQID N0:13的结构上变体也被预期保留其抗原的活性。该结构上的变体可以藉由实施例4的方法来检测其活性。 本专利技术的多肽来源可由虹彩病毒核衣蛋白纯化，也可由核苷酸的重组方法或化学合成所取得。 因为本专利技术多肽具有抗原活性，因此可进一步包含于一组合物中，该组合物可与动物饲料一起给予动物口服使用，促进该动物体内产生对抗虹彩病毒的抗体，达到治疗或预防的效果。该组合物亦可与虹彩病毒疫苗一起使用，不论是口服或是注射给予，同样可以促进动物体内产生对抗虹彩病毒的抗体，加强疫苗的效果。熟知技艺的人士可根据本说明书揭露的内容，自行完成组合物的配方。 术语抗体指的是一种存在于血液或体液中的免疫球蛋白，其功能为辨识外来物质，如细菌、病毒或特殊结构的分子，引发后续免疫反应。此外，抗体亦具有中和抗原分子的能力，可促使吞噬细胞活化，将其所辨认的物质分解。抗体主要是由B细胞所产生，当B细胞辨识到某抗原序列，即会分化为浆细胞，并产生可辨识该抗原序列的抗体。如上所述，本专利技术的包含本专利技术多肽的组合物具有活化B细胞的特性，因此亦可用于制备单株或多株抗体。例如将本专利技术的组合物与佐剂注射入动物体内本文档来自技高网...

【技术保护点】
一来自于虹彩病毒的核衣蛋白且具有抗原活性的多肽，其系由ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１３的氨基酸序列所组成。

【技术特征摘要】
一来自于虹彩病毒的核衣蛋白且具有抗原活性的多肽，其系由SEQID NO13的氨基酸序列所组成。2. —组合物，其包含权利要求l所述的多肽。3. 如权利要求2所述的组合物，其中该组合物系可与动物饲料或虹彩病毒疫苗共同使用。4. 一种利用权利要求2所述的组合物制造抗虹彩病毒抗体的方法。5. —种分离的抗虹彩病毒抗体，其系由权利要求4所述的方法制造。6. 如权利要求5所述的抗体，其中该抗体为单株抗体。7. 如权利要求5所述的抗体，其中该抗体为多株抗体。8. 如权利要求5所述的抗体，其中该抗体可与虹彩病毒属Ranavirus结合。9. 如权利要求5所述的抗体，其中该抗体可与虹彩病毒属Megalocytivirus结合。10. 如权利要求5所述的抗体，其中该抗体可同时侦测到虹彩病毒属Ranavirus与 Megalocytivirus。11. 一种检测虹彩病毒感染的方法，其系使用如权利要求5所述的抗体。12. 如权利要求ll的方法，其中该方法为固相免疫色层分析法、间接免疫荧光染色法 或酵素结合免疫吸附法。13. —种检测虹彩病毒感染的套组，其包含(1) 一支...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄淑敏，
申请(专利权)人：黄金城，
类型：发明
国别省市：71[中国|台湾]