一种双荧光蛋白分子细胞标记的方法技术

本发明专利技术提供了一种用于双荧光蛋白分子标记法方法的重组质粒和双荧光蛋白分子细胞标记的方法，本发明专利技术提供的重组质粒包含编码标签蛋白Ａ的片段Ａ，其５’端或３’端融合编码待检测蛋白Ｃ的序列Ｃ；编码标签蛋白Ｂ的片段Ｂ，其５’端或３’端融合编码待检测蛋白Ｄ的序列Ｄ；片段Ａ－Ｃ与Ｂ－Ｄ由ＩＲＥＳ序列Ｅ连接；和在片段ＡＣ的上游的启动子；本发明专利技术提供的标记方法包括构建用于双荧光蛋白分子标记法方法的重组质粒、细胞转染和荧光标记步骤。使用本发明专利技术提供的重组质粒和标记方法，可在同一个载体中共表达两个目的基因，同时标记同一细胞中的两个不同蛋白；而且，标记过程简单，快速，比传统的抗体荧光标记方法大大节省了标记的时间。

Double fluorescent protein molecular cell labeling method

The present invention provides a method for recombinant plasmid method double fluorescent protein marker and double fluorescent protein molecular marker, the recombinant plasmid provided by the invention comprises an encoding tag protein fragment of A A, the 5 'or 3' end sequence encoding C fusion protein C detected the protein encoding B tag; the fragment of B, the 5 'or 3' end sequence encoding D fusion protein D detection; A C fragment and B D connected by IRES sequence E; and in the upstream fragment of AC promoter; marking method provided by the invention includes the construction of recombinant plasmid and method for dual fluorescent protein molecules labeled cell transfection and fluorescence labeling steps. The recombinant plasmid and marker method provided by the invention, two gene expression in the same carrier of the Communist Party of China, and marked two different proteins in the same cell; moreover, the marking process is simple, fast, than the traditional method of fluorescence labelled antibody greatly saves the marking time.

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种用于双荧光标记方法的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒包括：　１）编码标签蛋白Ａ的ＤＮＡ片段Ａ，该标签蛋白可以特异地与其荧光底物共价结合，其５’端或３’端融合一段编码待检测蛋白Ｃ的ＤＮＡ序列Ｃ，组成片段ＡＣ；　２）编码标签蛋 白Ｂ的ＤＮＡ片段Ｂ，该标签蛋白可以特异地与其荧光底物共价结合，其５’端或３’端融合一段编码待检测蛋白Ｄ的ＤＮＡ序列Ｄ，组成片段ＢＤ；　３）所述片段ＡＣ与ＢＤ由一段编码内部核糖体插入位点元件的双顺反子ＯＲＦ表达系统的ＤＮＡ序列Ｅ连接；　 　４）在所述片段ＡＣ的上游的合适位置的一段负责所述片段ＡＣ、Ｅ和ＢＤ的转录控制的启动子。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨淑伟，黄文韬，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]