一种新的脂质体制备方法技术

本发明专利技术是一种新的脂质体制备方法，它解决了易氧化、易水解和易变性的药物制备成脂质体过程中出现的一些难题，并且能够有效地提高水溶性药物包封率。制备工艺包括如下步骤：ａ．将用于形成脂质体的脂类物质和待包封的亲脂性物质溶于有机溶剂形成油相，将待包封的亲水性物质溶于水形成内水相，将油相、内水相混合并乳化形成Ｗ１／Ｏ型乳剂；ｂ．Ｗ１／Ｏ型乳剂与适当的水溶液按合适的比例混合并乳化形成Ｗ１／Ｏ／Ｗ２型复乳；Ｗ１／Ｏ／Ｗ２型复乳冷冻干燥除去溶媒得到冻干产物；将冻干产物水化形成脂质体。本工艺过程简单，容易实施。

【技术实现步骤摘要】
一种新的脂质体制备方法
：本专利技术涉及生物医药
，确切的地说是一种新的脂质体制备方法。
技术介绍
：脂质体是由磷脂双分子层形成的闭合囊泡状结构。脂质体根据其结构不同可分为单层脂质体(unilamellar vesicles)、多层脂质体(multilamellar vesicles)和多囊脂质体(multivesicular liposomes)。脂质体由英国人Alec D.Bangham在1965年首先发现。此后，人们发现脂质体作为物质载体，尤其是药物载体，有着巨大的应用价值，于是便对脂质体进行了系统的研究。经过了二十多年的探索，科研人员已经提出了许多很有价值的脂质体制备方法。目前脂质体主要通过分散技术(dispersion technique)制备，其方法可分为三大类：1)以机械分散技术为基础。如薄膜分散法(filmdispersion)，即将用于形成脂质体的磷脂溶于有机溶媒中-通常是氯仿或氯仿和甲醇的混合物，之后在减压的条件下除去溶媒形成干燥的磷脂膜。将磷脂膜水化即可形成多层脂质体(multilamellar vesicles)。该方法虽是最经典、应用最广的方法，但是却存在一些缺点。例如：使用毒性很大的有机溶媒；无法实现工业化生产；当用含药水溶液水化时，形成的多层脂质体(multilamellar vesicles)层与层之间药物分布不均一，必须通过反复冻融处理等。2)以表面活性剂分散技术为基础。如去污剂透析法，该方法不但难以工业化生产，且不适合包封水溶性药物。3)以溶剂或共溶剂(cosolvent)分散技术为基础。例如，逆相蒸发法(reverse evaporationvesicles，REV)，此种制备方法对水溶性药物的包封率及载药量相对较高；而复乳法制备多囊脂质体(multivesicular liposome)目前虽然可以实现大规模生产(请参见skyepharma的depofoam技术平台)，但是仅限于制备微米级具有缓释功能的多囊脂质体；乙醇注入法(ethanol injection)，虽已经实现大规模生产(请参见alza公司的技术和polymun的erossflow技术)，并可采用被动载药法制备脂质体，但包封率较低，且需要在较高温度下制备(60℃左右)，通常会引起易氧化、易水解和易变性的药物失去活性，而采用主动载药法制备脂质体，包封率虽有所提高，但不适用于对酸碱敏感的药物，同时也容易引起磷脂分解变性。概括起来，目前脂质体制备方法主要存在如下缺陷：1.稳定性问题。通过已有方法得到的脂质体制剂通常为液体制剂，往往不够稳定，主要表现在如下三个方面：(1)脂质体混悬于水相时，属于热力学不稳定分散系，常常会出现聚集、融合等现象，导致粒径变大，严重的还可能出现分层。(2)磷脂存在于水相时，通常容易出现水解、氧化等现象，可能会形成溶血磷脂，一方面增加制剂的毒性，另一方面也容易使脂质体解体，导致-->药物渗漏。(3)脂质体混悬在水相中，在储存过程中，药物可能会渗漏，导致包封率改变，从而影响制剂疗效。如果药物本身容易水解，制剂的稳定性问题更显突出。2.包封率问题。通过已有方法得到的脂质体制剂，水溶性药物包封率往往较低。包封率低不但会造成原料浪费，还可能达不到有效剂量，不能够体现脂质体制剂优势。目前常用主动载药法(remote loading)来提高水溶性药物包封率。但无论是pH梯度还是硫酸铵梯度主动载药法，均需要在脂质体膜内外提供较大差别的pH环境，这不仅不适用于对酸碱敏感的药物，也容易引起磷脂分解变性。此外，主动载药法仅适用于可离子化的药物，应用范围相对有限。3.灭菌问题。由于磷脂本身的性质，一般不能够对最终脂质体制剂加热灭菌，从而要求整个生产过程必须采用无菌操作。这对某些脂质体制备工艺来说可能无法实现。4.脂质体的粒径控制问题。获得小粒径脂质体(小于200nm)通常有利于静脉给药。这是因为：(1)大粒径的脂质体很容易被体内的单核巨噬系统所吞噬，从而被迅速清除。(2)小粒径的脂质体可以被动靶向肿瘤组织和缺血心肌。为了获得小粒径脂质体，通常需要对已得到的脂质体进行超声、研磨或挤出。这往往又会导致药物进一步渗漏，影响制剂质量。
技术实现思路
：为了克服上述脂质体制备技术的不足，我们专利技术了一种新的脂质体制备方法。通过此方法，可以解决目前脂质体制剂所面临的一些难题。将该方法称为复乳冻干法(lyophilization of double emulsions)。该制备方法包括以下步骤：a、将用于形成脂质体的脂类物质和待包封的亲脂性物质溶于有机溶剂形成油相(O)，将待包封的亲水性物质溶于水形成内水相(W1)，将油相(O)、内水相(W1)按合适的比例混合并乳化得到W1/O型乳剂；b、将W1/O型乳剂与适当的水溶液(外水相，W2)按合适的比例混合并乳化，得到W1/O/W2型复乳；c、将W1/O/W2型复乳冷冻干燥除去溶媒得到冻干产物；d、将冻干产物水化形成脂质体。下面我们将就该技术的具体操作进行详细的描述。步骤a优选的有机溶媒为环己烷、氯仿、乙醚与水不混溶易挥发除去的有机溶剂，或其混合物，优选与水凝固点接近的有机溶剂。用于形成脂质体的脂类物质主要包括磷脂，如磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine，PC)、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油，和调节磷脂膜性质的胆固醇(cholesterol)；也可以为具有类似磷脂性质的其它两性物质，以及不同脂类适当配比的混合物；可用于形成脂类质体(niosome)。此外，为了提-->高特包封物质的包封率，可加入适量的荷电脂类物质：在包封荷负电物质时，可加入荷正电的脂类物质，如1，2-二酰基-SN-甘油-3-乙基磷脂酰胆碱等。在包封荷正电的水溶性药物时，可加入荷负电的脂类物质，如磷脂酰甘油和磷脂酰丝氨酸等。为了提高磷脂的抗氧化能力，可加入脂溶性抗氧化剂如vitamin E等。本专利技术的成功实施，要求步骤a中必须得到稳定的W1/O型乳剂。步骤a中制备的W1/O型乳剂通常内水相与油相体积比小于1；步骤b中制备W1/O/W2型复乳通常初乳与外水相体积比小于1。步骤a和b中的乳化指的是搅拌，或振荡，或涡旋振荡，或匀乳，或高压匀乳，或超声机械做功操作，或为搅拌、涡旋振荡、匀乳、高压匀乳、超声组合操作，或为处方成分自动乳化。W1/O型乳剂指的是澄明或乳白色均一稳定乳剂，如果环己烷溶液和水溶液的比例不合适，则乳剂不稳定，分层沉淀，可能会出现相反O/W1型乳剂，无法将待包封物质包封于内水相，从而导致形成的脂质体包封率大大下降。步骤c优选的去除溶媒的方法为冷冻干燥法，W1/O/W2复乳可以先置于液氮或低温度装置中迅速冻结，然后在冻干机中冻干。步骤d为水化冻干产物以形成脂质体，可采用蒸馏水或合适的缓冲液在适宜的温度下完成，为加速水化，也可在机械力的作用下完成，如可以进行搅拌或振荡，如采用被动载药法时，水化时可以采用水或合适的缓冲液；如采用硫酸铵或醋酸钠或醋酸钙梯度法主动载药时，可以用水水化形成脂质体后，加入待包封的药物孵育形成含药脂质体。如采用PH梯度法主动载药时，用水水化形成脂质体后，再加入药物孵育得到含药脂质体。。为了得到无菌制剂，可将步骤b中得本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新的脂质体制备方法，其特征在于：　　　　ａ．将用于形成脂质体的脂类物质和待包封的亲脂性物质溶于有机溶剂形成油相，将待包封的亲水性物质溶于水形成内水相，将油相、内水相混合并乳化形成Ｗ１／Ｏ型乳剂；　　　　ｂ．将Ｗ１／Ｏ型乳剂与适当的水溶液混合并乳化形成Ｗ１／Ｏ／Ｗ２型复乳；　　　　ｃ．将Ｗ１／Ｏ／Ｗ２型复乳冷冻干燥除去溶媒得到冻干产物；　　　　ｄ．将冻干产物水化形成脂质体。

【技术特征摘要】
1、一种新的脂质体制备方法，其特征在于：a.将用于形成脂质体的脂类物质和待包封的亲脂性物质溶于有机溶剂形成油相，将待包封的亲水性物质溶于水形成内水相，将油相、内水相混合并乳化形成W1/O型乳剂；b.将W1/O型乳剂与适当的水溶液混合并乳化形成W1/O/W2型复乳；c.将W1/O/W2型复乳冷冻干燥除去溶媒得到冻干产物；d.将冻干产物水化形成脂质体。2.根据权利要求1所述的一种新的脂质体制备方法，其特征在于：步骤a中制备的W1/O型乳剂内水相与油相体积比小于1；步骤b中制备W1/O/W2型复乳通常初乳与外水相体积比小于1。3.根据权利要求1所述的一种新的脂质体制备方法，其特征在于：步骤a中的有机溶剂指环己烷、氯仿、乙醚与水不混溶易挥发除去的有机溶剂，或其混合物，优选与水凝固点接近的有机溶剂。4.根据权利要求1所述的一种新的脂质体制备方法，其特征在于：步骤a和b中的乳化指的是搅拌，或振荡，或涡旋振荡，或匀乳，或高压匀乳，或超声机械做功操作，或为搅拌、涡旋振荡、匀乳、高压匀乳、超声组合操作，或为处方成分自动乳化。5.根据权利要求1所述的一种新的脂质体制备方法，其特征在于：步骤a中用于形成脂质体的脂类物质主要为磷脂，如磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油，以及调节磷脂膜性质的胆固醇；也可以为具有磷脂类似性质的其它两性物质；以及不同脂类的混合物；为了提高待包封物质的包封率，可加入适量荷电的脂类物质：包封负电荷物质时，可加入荷正电的脂类物质，包封正电荷物质时...

【专利技术属性】
技术研发人员：王汀，邓英杰，
申请(专利权)人：沈阳药科大学，
类型：发明
国别省市：89[中国|沈阳]