本发明专利技术公开了一种分离积雪草苷－Ｂ、羟基积雪草苷和积雪草苷的方法，包括：将原料溶于甲醇水溶液后通入模拟移动床色谱系统，用甲醇水溶液洗脱得到积雪草苷，提余液蒸除溶剂后得到一次固体料；将一次固体料溶于含乙腈和甲基叔丁基醚的水溶液后通入模拟移动床色谱系统，用含乙腈和甲基叔丁基醚的水溶液洗脱得到羟基积雪草苷，提余液蒸除溶剂后得到二次固体料；将二次固体料溶于甲醇水溶液后通入模拟移动床色谱系统，用甲醇水溶液洗脱得到积雪草苷－Ｂ。该方法自动化程度高、操作简单、生产连续、生产效率高、固定相和溶剂消耗低，且产品质量稳定，整个过程不涉及化学反应，绿色环保，适于工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及积雪草总苷中组分的分离，具体涉及一种分离积雪草苷-B、羟基积雪草苷和积雪草苷的方法，属化工分离
技术介绍
积雪草Centella asiatica(L. )Urban，又名胡薄荷、地钱草等，为伞形科积雪草属植物，广泛分布在南非、印度以及我国长江流域以南各地，是一种传统中草药。据研究报道，积雪草具有消炎、增强记忆力、促进胶原蛋白合成、抗抑郁和抗癌等多种生理活性。目前认为，积雪草的主要活性成分为积雪草总苷，积雪草总苷是一种混合物，主要由三萜烷酸形成的糖苷组成，包括积雪草苷-B(Asiaticoside B， CAS No. : 125265-68-1)，羟基积雪草苷(Madecassoside ;Asiaticoside A，CAS No. :34540-22-2)禾口积雪草苷(Asiaticoside，CASNo. :16830-15-2)，它们都具有五环三萜结构和糖苷支链，仅在三萜环上的羟基数目和位置存在着差异。虽然它们的结构极其相似，但生物活性却不尽相同，其中羟基积雪草苷具有消炎和治疗风湿性关节炎等活性；积雪草苷能够促进伤口的愈合，对烧伤性瘢痕有明显的治愈作用，常作为评价积雪草药理活性的标志性成分；由于积雪草苷-B纯品难以获得，关于它的药理活性还未见报道。 鉴于积雪草总苷中各物质的结构及理化性质都较为接近，其中羟基积雪草苷和积雪草苷-B是一对同分异构体，它们和积雪草苷相比只多了一个羟基，而强极性糖元的连接又大大地弱化了这种微小极性的差异，使得很难用常规的分离方法将这三种物质完全分离。 专利EP 867447， CN 1194154， US 6417349， IN 183285和CN 1387868A报道了提取积雪草总苷的方法，但分离纯化这三种物质的方法却较少。杜琪珍(Du Q Z， Jerz G， ChenP， et al.. Journal of Liquid Chromatography&Related Technologies,2004，27(14):2201-2215.)禾口 Vanhaelen-Fastr6(DialloB， Vanhaelenfastre R， Vanhaelen M. Journalof Chromatography, 1991， 558 (2) :446-450.)等采用高速逆流色谱实现了积雪草苷和羟基积雪草苷的分离，但该方法制备规模较小，所得产品质量只能达到毫克级，而且不能分离羟基积雪草苷和积雪草苷_B。 专利US 2006/0106206A1报道了一种制取羟基积雪草苷的方法，但它所获得的羟基积雪草苷的纯度只有81%，且回收率低，消耗大量溶剂，无法实现工业化。公开号为CN101182346A的中国专利申请报道了一种用硅胶柱分离羟基积雪草苷和积雪草苷-B的方法，所得产品纯度只能在95 %左右，且操作步骤比较繁琐。 模拟移动床色谱(Simulated moving bed chromatography, SMBC)具有分离會g力强，设备结构小，便于自动控制，并特别有利于分离热敏性高及难以分离物系等优点，适用于进行连续性大规模工业化生产，它的引入能够在保证分离纯度和收率的前提下大大提高生产的自动化水平和生产效率，并且使得生产环境得到非常大的改善。90年代以来，SMBC技术开始应用于精细化工和药物尤其是手性药物的分离。由于积雪草总苷中各成分性质的3复杂性和特殊性，目前尚未见到有关模拟移动床色谱分离纯化积雪草总苷中各活性成分的 报道。
技术实现思路
本专利技术提供了一种分离积雪草苷-B、羟基积雪草苷和积雪草苷的方法，针对积雪 草总苷中复杂的活性成分，采用模拟移动床色谱，结合合适的流动相分离得到高纯度的积 雪草苷-B.羟基积雪草苷和积雪草苷单体。 —种分离积雪草苷-B.羟基积雪草苷和积雪草苷的方法，包括步骤 (1)将含积雪草总苷的原料溶于甲醇水溶液中配制原料液，将原料液通入模拟移 动床色谱系统，以甲醇水溶液为流动相进行洗脱，将提取液蒸除溶剂后得到积雪草苷，提余 液蒸除溶剂后得到一次固体料； (2)将一次固体料溶于含乙腈和甲基叔丁基醚的水溶液中配制一次料液，将一次料液通入模拟移动床色谱系统，以含乙腈和甲基叔丁基醚的水溶液为流动相进行洗脱，将提取液蒸除溶剂后得到羟基积雪草苷，提余液蒸除溶剂后得到二次固体料； (3)将二次固体料溶于甲醇水溶液中配制二次料液，将二次料液通入模拟移动床色谱系统，以甲醇水溶液为流动相进行洗脱，将提取液蒸除溶剂后得到积雪草苷_B。 积雪草总苷中含积雪草苷-B.羟基积雪草苷和积雪草苷三种活性成分。其中羟基积雪草苷和积雪草苷-B是一对同分异构体，它们比积雪草苷多一个羟基连接在母环上，而强极性糖元的连接又大大地弱化了这种极性的微小差异，所以采用吸附分离方法时，很难用一般的固定相来实现这三种物质的完全分离。因此本专利技术所述的模拟移动床色谱系统中色谱柱的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，固定相的粒径越小越有利于分离，为了保证分离度，优选粒径为5iim 100iim的固定相。 当使用十八烷基键合硅胶作为固定相时，极性大的物质先出峰，极性小的物质后 出峰。根据所要分离物质的性质分析，积雪草总苷中各组分出峰的先后顺序是积雪草苷-B、 羟基积雪草苷、积雪草苷。而杂质基本聚集在积雪草苷-B之前出峰，所以根据出峰时间的 先后可以逐步分离出积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷-B。同时，单柱试验结果表明，流 动相对色谱分离过程也有很大影响。如图l所示，当以甲醇水溶液为流动相时，积雪草苷-B 和羟基积雪草苷的色谱峰完全重叠，但与积雪草苷能完全分离。当以含乙腈和甲基叔丁基 醚的水溶液为流动相时，能部分分离积雪草苷-B和羟基积雪草苷，见图2。分离积雪草苷和 羟基积雪草苷后的物料中只含有积雪草苷-B和杂质，此时，就可以再用甲醇水溶液为流动 相将积雪草苷-B和杂质进行分离，见图3。 步骤(1)流动相中甲醇比例越高，出峰越快，而分离度降低，综合考虑分离时间和分离效果，所述的甲醇水溶液中甲醇与水的体积比优选为50 : 50 80 : 20。。 步骤(2)中，流动相中乙腈比例越高，出峰越快，而分离度降低，综合考虑分离时间和分离效果，所述的含乙腈和甲基叔丁基醚的水溶液中水、乙腈与甲基叔丁基醚的体积比优选为70 : 30 : 2 80 : 20 : 2。 步骤(3)中，流动相中甲醇比例越高，出峰越快，而分离度降低，综合考虑分离时 间和分离效果，所述的甲醇水溶液中甲醇与水的体积比优选为50 : 50 70 : 30。 为了避免色谱柱过载，保证所得产品的纯度，所述的原料液中原料的浓度优选为lmg/mL 300mg/mL，所述的一次料液中一次固体料的浓度优选为lmg/mL 300mg/mL，所述 的二次料液中二次固体料的浓度优选为lmg/mL 300mg/mL。 所述的模拟移动床色谱(简称SMBC)系统中色谱柱的总数量一般为4根 32根， 每区色谱柱的数量为1根 8根，增加色谱柱的数量有利于提高产品的纯度，随着柱子数目 的增加，切换时间将縮短，而频繁的切换将降低整个操作系统的使用寿命，所以优选色谱柱 的总数量为8根 16根，每区色谱柱的数量为2根 4根。 所述的模拟移动本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离积雪草苷－Ｂ、羟基积雪草苷和积雪草苷的方法，其特征在于，包括步骤： （１）将含积雪草总苷的原料溶于甲醇水溶液中配制原料液，将原料液通入模拟移动床色谱系统，以甲醇水溶液为流动相进行洗脱，提取液蒸除溶剂后得到积雪草苷，提余液蒸除溶剂后得到一次固体料； （２）将一次固体料溶于含乙腈和甲基叔丁基醚的水溶液中配制一次料液，将一次料液通入模拟移动床色谱系统，以含乙腈和甲基叔丁基醚的水溶液为流动相进行洗脱，提取液蒸除溶剂后得到羟基积雪草苷，提余液蒸除溶剂后得到二次固体料； （３）将二次固体料溶于甲醇水溶液中配制二次料液，将二次料液通入模拟移动床色谱系统，以甲醇水溶液为流动相进行洗脱，提取液蒸除溶剂后得到积雪草苷－Ｂ； 其中，所述的模拟移动床色谱系统中色谱柱的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶。
【技术特征摘要】
一种分离积雪草苷-B、羟基积雪草苷和积雪草苷的方法，其特征在于，包括步骤(1)将含积雪草总苷的原料溶于甲醇水溶液中配制原料液，将原料液通入模拟移动床色谱系统，以甲醇水溶液为流动相进行洗脱，提取液蒸除溶剂后得到积雪草苷，提余液蒸除溶剂后得到一次固体料；(2)将一次固体料溶于含乙腈和甲基叔丁基醚的水溶液中配制一次料液，将一次料液通入模拟移动床色谱系统，以含乙腈和甲基叔丁基醚的水溶液为流动相进行洗脱，提取液蒸除溶剂后得到羟基积雪草苷，提余液蒸除溶剂后得到二次固体料；(3)将二次固体料溶于甲醇水溶液中配制二次料液，将二次料液通入模拟移动床色谱系统，以甲醇水溶液为流动相进行洗脱，提取液蒸除溶剂后得到积雪草苷-B；其中，所述的模拟移动床色谱系统中色谱柱的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶。2. 根据权利要求1所述的分离积雪草苷-B.羟基积雪草苷和积雪草苷的方法，其特征在于，步骤(l)中，所述的甲醇水溶液中甲醇与水的体积比为50 : 50 80 : 20。3. 根据权利要求1所述的分离积雪草苷-B.羟基积雪草苷和积雪草苷的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的原料液中原料的浓度为lmg/mL 300mg/mL。4. 根据权利要求1所述的分离积雪草苷-B、羟基积雪草苷和积雪草苷的方法，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨亦文，王阳阳，苏宝根，邢华斌，苏云，鲍宗必，任其龙，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]
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