一种抗4种水稻病毒RNA干涉载体、构建方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种抗4种水稻病毒RNA干涉载体、构建方法及应用，属于生物技术领域。本发明专利技术公开针对水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)、南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)、水稻齿叶矮缩病毒(RRSV)、水稻条纹病毒(RSV)基因保守片段的融合序列，如SEQ ID NO.5所示，并基于此融合序列构建了RNA发夹结构。本专利还公开基于该融合发夹的转基因载体pRNAi‑4K及其构建方法。将该载体转化水稻，得到的转基因水稻株系对靶标的4种水稻病毒均产生了极高的抗性，为广谱高效水稻抗性育种提供了成功的实例和一种新的有效方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程，涉及一种适合单子叶植物遗传转化的4种水稻病毒rna干涉载体、构建方法及其在水稻上应用。

技术介绍

1、水稻(oryza sativa l.)是世界上最重要的粮食作物之一，同时也是我国最主要的栽培作物之一，但其每年都遭受到严重的病虫害的侵扰，给农业生产带来了巨大的损失。

2、水稻黑条矮缩病毒(rbsdv)和南方水稻黑条矮缩病毒(srbsdv)属于呼肠孤病毒科，斐济病毒属，分别由灰飞虱(sbph)和白背飞虱(wph)传播；水稻齿叶矮缩病毒(rrsv)属于呼肠孤病毒科，水稻病毒属，传播介体为褐飞虱(bph)；而水稻条纹病毒(rsv)则是属于白纤病毒科，纤细病毒属，传毒介体为灰飞虱。这些病毒侵染水稻后会严重阻碍水稻发育并显著下降其结实率，甚至造成绝收，对亚洲水稻生成造成了严重的威胁。

3、通过杀虫剂来抑制病毒传播是目前的主要控制策略，但对环境有害并且成本高昂。抗病毒品种的开发是控制病毒病害最经济和最环保的策略。但是，除了rsv以外，其余3中病毒尚无可以用于生产的抗性品种。并且，由于缺乏高而稳定的抗性种质资源，针对rb本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种抗4种水稻病毒RNA干涉载体，其特征在于，载体骨架上连接有4种水稻病毒基因保守片段的融合片段，且融合片段的正义链和反义链之间通过内含子片段连接形成RNA发夹结构；所述融合片段的正义链序列和反义链序列分别如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

2.如权利要求1所述的抗4种水稻病毒RNA干涉载体，其特征在于，所述内含子片段为拟南芥RTM1基因的内含子片段，序列如SEQ ID NO.7所示。

3.如权利要求1所述的抗4种水稻病毒RNA干涉载体，其特征在于，所述载体骨架为pCAMBIA1300载体，且其中的潮霉素抗性基因被替换为草甘膦抗性基因。...

【技术特征摘要】

1.一种抗4种水稻病毒rna干涉载体，其特征在于，载体骨架上连接有4种水稻病毒基因保守片段的融合片段，且融合片段的正义链和反义链之间通过内含子片段连接形成rna发夹结构；所述融合片段的正义链序列和反义链序列分别如seq id no.5和seq id no.6所示。

2.如权利要求1所述的抗4种水稻病毒rna干涉载体，其特征在于，所述内含子片段为拟南芥rtm1基因的内含子片段，序列如seq id no.7所示。

3.如权利要求1所述的抗4种水稻病毒rna干涉载体，其特征在于，所述载体骨架为pcambia1300载体，且其中的潮霉素抗性基因被替换为草甘膦抗性基因。

4.一种如权利要求1～3任一所述抗4种水稻病毒rna干涉载体的构建方法，其特征在于，将所述4种水稻病毒基因保守片段的融合片段正义链、反义链以及所述内含子片段，通过同源重组连入所述载体骨架中，形成抗4种水稻病毒rna干涉载体。

5.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述4种水稻病毒基因保守片段的融合片段通过将4种病毒基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：周雪平，李晨羊，吴建祥，周彤，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：