【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞免疫学，具体涉及针对il-17a的新型纳米抗体、药物、制备、方法及应用。
技术介绍
1、il-17家族细胞因子的来源为t细胞，il-17家族成员包括6个配体和5个受体，所述的6个配体分别为il-17a、il-17b、il-17c、il-17d、il-17e和il-17f，所述的5个受体分别为il-17ra、il-17rb、il-17rc、il-17rd和sef。il-17是一种引起炎症的细胞因子，主要由活化的t细胞产生，il-17的主要来源是免疫细胞，包括cd4+t细胞、cd8+t细胞、ntk细胞等。il-17a与自身免疫性疾病、机械损伤、感染、癌症、肥胖和慢性炎症性疾病有关。il-17a的合成依赖于产生il-17a的多种细胞和转录因子，包括cd4+αβth17细胞和rorγt转录因子。il-17a通过诱导气道中多种细胞产生促炎细胞因子、趋化因子和抗菌肽介导其免疫调节功能，导致中性粒细胞和巨噬细胞被吸引至炎症部位，从而促进炎症的发展。
2、当细胞表达il-17a时，通常会伴随着某些疾病的进行。il-17a通过多种途径来调控免疫细胞的功能，进而改变疾病的进展，在银屑病的发生过程中，il-17a参与中性粒细胞的募集，这些细胞聚集后形成微脓肿。现有技术中公开了一种抗il-17a的单克隆抗体ixekizumab能够使银屑病患者的角质化细胞增殖和增生减少，表皮厚度降低、t细胞和树突细胞对真皮和表皮的浸润以及角质化细胞防御肽的表达有显著性的剂量依赖性降低。研究数据表明，il-17是银屑病中激活致病炎症的关键细胞
3、单域抗体在哺乳类骆驼科动物的体液免疫系统中发现，由单一的可变区、1个铰链区和2个恒定区(ch2和ch3组成)，分子量约为15kda。单域抗体具有最小的功能性抗原结合片段，具有与抗原结合的较高的亲和力和高度的稳定性。单域抗体只有重链，单域抗体的制造较为容易，可以低成本的制造大产量，因此，单域抗体在疾病的治疗和诊断中具有较大的价值。
4、目前，针对il-17a的抗体药物较少，仍然需要研发新的特异性识别il-17a的单域抗体。
5、本专利技术系专利技术人针对自主开发的抗il-17a抗体所提出的专利申请。
6、除本专利技术请求保护的抗体外，专利技术人同时开发出另外8个抗体，基于专利法单一性的相关规定，对9个不同抗体分别请求保护。
7、专利技术人还根据这9个抗体开发了12个串联抗体，基于专利法单一性的相关规定，对12个不同的串联抗体分别请求保护。
8、专利技术人还根据这12个串联抗体，开发了基因修饰干细胞技术，基于专利法单一性的相关规定，对3个不同的基因修饰干细胞以及3项不同的应用分别请求保护。
9、为便于理解本专利技术技术方案，可选地参阅本项目其他系列申请文本。
技术实现思路
1、本专利技术的术语和声明：
2、1、如本文所用，术语“氨基酸”：包含天然氨基酸、合成氨基酸、以及以类似于天然氨基酸的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然氨基酸是由遗传密码编码的氨基酸。氨基酸类似物是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸在本文中可以由其通常已知的三字母符号或由iupac-iub生物化学命名法委员会(biochemicalnomenclature commission)所推荐的单字母符号来提及。
3、2、如本文所用，术语“抗体”：指特异性结合和识别抗原的包括免疫球蛋白基因的构架区的多肽或其片段。术语抗体的使用意指包含全抗体和其抗原结合片段。术语抗体包含单特异性抗体、双特异性抗体和多特异性抗体，只要其表现所期望的生物活性或功能即可。
4、3、如本文所用，术语“单克隆抗体”：指从实质上均质抗体的群体获得的抗体，即构成所述群体的个别抗体除了可以少量存在的可能天然存在的突变之外是相同的。单克隆抗体针对单一抗原位点具高度特异性。此外，相比于通常包含针对不同决定子(表位)的不同抗体的常规(多克隆)抗体制剂，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定子。修饰语“单克隆”指示如从实质上均质的抗体群体获得的抗体的特征，并且不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。
5、4、如本文所用，术语“单域抗体(vhh)”、“单域抗体”(singledomain antibody,sdab，或纳米抗体nanobody)具有相同的含义，指克隆抗体重链的可变区，构建仅由一个重链可变区组成的单域抗体，它是具有完整功能的最小的抗原结合片段。通常先获得天然缺失轻链和重链恒定区1(ch1)的抗体后，再克隆抗体重链的可变区，构建仅由一个重链可变区组成的单域抗体(vhh)。
6、5、如本文所用，术语“同源性”或“同一性”是指两个肽或两个核酸分子之间的序列相似性。同源性可以通过比较每个序列中的位置来确定，为了进行比较的目的，这些位置可能会被对齐。当比较序列中的一个位置被相同的碱基或氨基酸占据时，则分子在该位置是同源的。
7、6、如本文所用，术语“表位”指抗体的互补位所结合的抗原上的任何抗原决定簇。抗原决定簇通常包含分子的化学活性表面基团，例如氨基酸或糖侧链，并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。例如，表位通常以独特的空间构象包括至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个连续或非连续的氨基酸，其可以是“线性”表位或“构象”表位。
8、7、如本文所用，术语“氨基酸序列”是指氨基酸相互连接形成肽链(或多肽)的顺序，氨基酸序列只能按照一个方向读取。
9、8、如本文所用，术语“核酸分子”可以是dna形式或rna形式。dna形式包括cdna、基因组dna或人工合成的dna。dna可以是单链的或是双链的。dna可以是编码链或非编码链。本专利技术中的核苷酸分子全长序列或其片段通常可以用pcr扩增法或人工合成的方法获得。
10、9、如本文所用，术语“核苷酸序列”是指dna或rna中碱基的排列顺序，即在dna中为a、t、g、c的排列顺序，或者在mrna中a、u、g、c的排列顺序，也包括rrna、trna、mrna中碱基的排列顺序。
11、10、如本文所用，术语“框架区”即骨架区，在免疫球蛋白的h和l链的近n端约有110个氨基酸序列的变化很大，其他部分的氨基酸序列相对恒定，据此可将轻链和重链区分为可变区(v)和恒定区(c)。可变区内包含超变区hvr或称互补决定区cdr与fr本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗体，其特征在于：所述的抗体包括3个互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述的HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述的HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述的HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于：所述的抗体包括：在SEQ ID NO:1-3所示的氨基酸序列上进行修饰、缺失、取代和/或添加中的至少一种方式所得到的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的抗体，其特征在于：所述的抗体的氨基酸序列与SEQ ID NO:1-3所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8或9个氨基酸差异。
4.一种抗体，其特征在于：所述的抗体包含框架区FR，所述的框架区FR包括：SEQ IDNO:4所示的FR1、SEQ ID NO:5所示的FR2、SEQ ID NO:6所示的FR3、SEQ ID NO:7所示的FR4；和/或；与SEQ ID NO:4-7所示的氨基酸序列具有至少80％序列一致性的氨基酸序列。
5.根据权利要求4所述的抗体，其特征在于：所述的抗
6.根据权利要求5所述的抗体，其特征在于：所述的抗体的氨基酸序列与SEQ ID NO:4-7所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37或38个氨基酸差异。
7.一种抗体，其特征在于：所述的抗体的氨基酸序列包含权利要求1-3任意一项所述的抗体的氨基酸序列和权利要求4-6任意一项所述的抗体的氨基酸序列。
8.一种抗体，其特征在于：所述的抗体的氨基酸序列包含：FR1-HCDR1-FR2-HCDR2-FR3-HCDR3-FR4；
9.根据权利要求8所述的抗体，其特征在于：所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
10.根据权利要求8或9所述的抗体，其特征在于：所述FR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述FR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示，所述FR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，所述FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。
11.根据权利要求10所述的抗体，其特征在于：所述的抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。
12.根据权利要求1-11任一项所述的抗体，其特征在于：所述的抗体为单域抗体。
13.根据权利要求1-12任一项所述的抗体，其特征在于：所述的抗体为抗IL-17A抗体。
14.根据权利要求1-13任一项所述的抗体，其特征在于：包含部分或全部选自人源、鼠源、灵长目动物源或骆驼科动物源的抗体重链框架区或其变体；
15.一种抗体制剂，其特征在于：所述的抗体制剂包含权利要求1-14任一项所述的抗体和药学上可接受的载体。
16.一种多克隆抗体，其特征在于：包含权利要求1-14任一项所述的抗体。
17.一种重组蛋白，其特征在于：包含权利要求1-14任一项所述的抗体。
18.根据权利要求17所述的重组蛋白，其特征在于：所述的重组蛋白还包含协助其表达和/或分泌，或延长其在体内半衰期的生物活性蛋白或其功能片段；
19.根据权利要求18所述的重组蛋白，其特征在于：所述生物活性蛋白或其功能片段为人免疫球蛋白Fc结构域，优选为人IgG的Fc结构域，例如人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的Fc结构域，更优选为人IgG1的Fc结构域。
20.一种抗体药物偶联物，其特征在于：所述的抗体药物偶联物包括：权利要求1-14任一项所述的抗体、权利要求15所述的抗体制剂、权利要求16所述的多克隆抗体或权利要求17-19任一项所述的重组蛋白；和与(1)结合的偶联部分。
21.一种试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括权利要求1-14任一项所述的抗体、权利要求15所述的抗体制剂、权利要求16所述的多克隆抗体或权利要求17-19任一项所述的重组蛋白；和装载所述抗体制剂的容器。
22.一种核酸分子，其特征在于：所述的核酸分子编码权利要求1-14任一项所述的抗体、权利要求16所述的多克隆抗体或权利要求17-19任一项所述的重组蛋白。
23.一种生物学表达载体，其特征在于：所述的生物学表达载体包含权利要...
【技术特征摘要】
1.一种抗体，其特征在于：所述的抗体包括3个互补决定区hcdr1、hcdr2、hcdr3，所述的hcdr1的氨基酸序列如seq id no:1所示，所述的hcdr2的氨基酸序列如seq id no:2所示，所述的hcdr3的氨基酸序列如seq id
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于：所述的抗体包括：在seq id no:1-3所示的氨基酸序列上进行修饰、缺失、取代和/或添加中的至少一种方式所得到的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的抗体，其特征在于：所述的抗体的氨基酸序列与seq id no:1-3所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8或9个氨基酸差异。
4.一种抗体，其特征在于：所述的抗体包含框架区fr，所述的框架区fr包括：seq idno:4所示的fr1、seq id no:5所示的fr2、seq id no:6所示的fr3、seq id no:7所示的fr4；和/或；与seq id no:4-7所示的氨基酸序列具有至少80％序列一致性的氨基酸序列。
5.根据权利要求4所述的抗体，其特征在于：所述的抗体的氨基酸序列包含：
6.根据权利要求5所述的抗体，其特征在于：所述的抗体的氨基酸序列与seq id no:4-7所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37或38个氨基酸差异。
7.一种抗体，其特征在于：所述的抗体的氨基酸序列包含权利要求1-3任意一项所述的抗体的氨基酸序列和权利要求4-6任意一项所述的抗体的氨基酸序列。
8.一种抗体，其特征在于：所述的抗体的氨基酸序列包含：fr1-hcdr1-fr2-hcdr2-fr3-hcdr3-fr4；
9.根据权利要求8所述的抗体，其特征在于：所述hcdr1的氨基酸序列如seq id no:1所示，所述hcdr2的氨基酸序列如seq id no:2所示，所述hcdr3的氨基酸序列如seq id no:3所示。
10.根据权利要求8或9所述的抗体，其特征在于：所述fr1的氨基酸序列如seq id no:4所示，所述fr2的氨基酸序列如seq id no:5所示，所述fr3的氨基酸序列如seq id no:6所示，所述fr4的氨基酸序列如seq id no:7所示。
11.根据权利要求10所述的抗体，其特征在于：所述的抗体的氨基酸序列如seq id no:8所示。
12.根据权利要求1-11任一项所述的抗体，其特征在于：所述的抗体为单域抗体。
13.根据权利要求1-12任一项所述的抗体，其特征在于：所述的抗体为抗il-17a抗体。
14.根据权利要求1-13任一项所述的抗体，其特征在于：包含部分或全部选自人源、鼠源、灵长目动物源或骆驼科动物源的抗体重链框架区或其变体；
15.一种抗体制剂，其特征在于：所述的抗体制剂包含权利要求1-14任一项所述的抗体和药学上可接受的载体。
16.一种多克隆抗体，其特征在于：包含权利要求1-14任一项所述的抗体。
17.一种重组蛋白，其特征在于：包含权利要求1-14任一项所述的抗体。
18.根据权利要求17所述的重组蛋白，其特征在于：所述的重组蛋白还包含协助其表达和/或分泌，或延长其在体内半衰期的生物活性蛋白或其功能片段；
19.根据权利要求18所述的重组蛋白，其特征在于：所述生物活性蛋白或其功能片段为人免疫球蛋白fc结构域，优选为人igg的fc结构域，例如人igg1、igg2、igg3、igg4的fc结构域，更优选为人igg1的fc结构域。
20.一种抗体药物偶联物，其特征在于：所述的抗体药物偶联物包括：权利要求1-14任一项所述的抗体、权利要求15所述的抗体制剂、权利要求16所述的多克隆抗体或权利要求17-19任一项所述的重组蛋白；和与(1)结合的偶联部分。
21.一种试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括权利要求1-14任一项所述的抗体、权利要求15所述的抗体制剂、权利要求16所述的多克隆抗体或权利要求17-19任一项所述的重组蛋白；和装载所述抗体制剂的容器。
22.一种核酸分子，其特征在于：所述的核酸分子编码权利要求1-14任一项所述的抗体、权利要求16所述的多克隆抗体或权利要求17-19任一...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘广洋，刘拥军，张晨亮，李欣，徐利强，崔嫄汭，
申请(专利权)人：北京贝来生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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