表达αPDL1:Fc融合蛋白的间充质干细胞的制备及应用制造技术

本发明专利技术提供了一种表达αPDL1:Fc融合蛋白的间充质干细胞的制备及应用，属于生物医药领域。本发明专利技术通过采用基因工程手段使间充质干细胞表达分泌型αPDL1:Fc类似物蛋白，特异性阻断PD

【技术实现步骤摘要】
表达
α
PDL1:Fc融合蛋白的间充质干细胞的制备及应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种表达αPDL1:Fc融合蛋白的间充质干细胞的制备及应用。

技术介绍

[0002]人体免疫系统能够避免感染和许多疾病，并预防癌症的发生，人体免疫系统具有识别自身物质和非自身物质的能力，能够对自身成分产生天然免疫耐受，清除异物，维持内环境的稳定。当正常细胞发生变化并开始失去控制时，癌症就会发生，由于癌细胞来源于正常细胞，与正常细胞难以区分，因此免疫系统识别癌细胞的能力微乎其微。当免疫系统错误地认为癌细胞是自身成分时，癌细胞可以避免受到免疫系统的攻击。肿瘤细胞的突变也会逐渐削弱对免疫系统的监控，激活免疫系统的肿瘤细胞被逐渐筛选出来，直到它们产生免疫系统无法识别的肿瘤分子，通过这种方式，肿瘤细胞成功逃脱了免疫系统的破坏，并有机会发展。更重要的是，因为癌细胞本身也可以释放出许多阻断免疫系统的物质，所以肿瘤免疫反应通常在肿瘤组织周围被选择性地抑制，这也解释了免疫治疗在许多患者中无效的原因：未能激活肿瘤组织周围的免疫反应，而不是无法系统地激活免疫反应。此外，炎症还可以促进肿瘤的发展。炎症可在肿瘤组织局部释放大量免疫抑制因子，通过多种途径抑制免疫系统。因此，即使免疫系统正常，肿瘤仍有可能发生。为了克服这一问题，研究人员一直在寻找方法帮助免疫系统增强其抗肿瘤免疫反应，并提高其抑制肿瘤的能力。
[0003]近年来，肿瘤免疫治疗发展迅速，利用免疫系统清除癌细胞，提高肿瘤细胞的免疫原性和效应细胞杀伤的敏感性，进而增强机体抗肿瘤免疫反应，该方法在许多人类恶性肿瘤中显示出显著的治疗效果，成为一种潜在的通用癌症治疗方案，免疫疗法在美国和其他国家已被批准为多种癌症的一线治疗策略，可以单独使用，也可以与其他癌症治疗方法联合使用。与其他癌症治疗相比，肿瘤免疫治疗已经变得更加精确、个性化、副作用更少，近年来已成为癌症治疗的一个重要发展方向，被誉为继手术、放疗、化疗之后的第四大癌症治疗技术。
[0004]PD
‑
1(程序性死亡受体1)是CD28超家族成员之一，在抗肿瘤、抗感染、抗自身免疫性疾病等方面具有重要作用，主要表达于肿瘤组织周围的T细胞、NK细胞和B细胞，其配体PD
‑
L1也是重要的肿瘤治疗靶点。PD
‑
L1(程序性死亡受体
‑
配体1)是一种大小为40kDa的1型跨膜蛋白，广泛表达于免疫细胞、肿瘤细胞、上皮细胞和内皮细胞。在肿瘤微环境中，PD
‑
L1表达于肿瘤细胞，与表达于T细胞的PD
‑
1相互作用，并抑制T细胞的功能，肿瘤细胞进而发生逃逸无法被免疫细胞细胞识别，发生逃逸。PD
‑
1/PD
‑
L1免疫治疗可以抑制PD
‑
1与PD
‑
L1结合进而恢复T细胞的正常功能。
[0005]在正常的生理条件下，T细胞免疫选择性地清除病原体和异常细胞，但避免攻击正常细胞，这个过程称为免疫稳态。然而，在肿瘤微环境中，PD
‑
1/PD
‑
L1的结合可以逃避免疫监视。肿瘤细胞中过表达的PD
‑
L1与肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)上的PD
‑
1结合，通过磷酸化的SHP
‑
2抑制TCR信号机联反应，T细胞的激活受到了抑制。PD
‑
1与PD
‑
L1的结合抑制T细胞的迁
移、增殖和分泌细胞毒介质，并抑制了对肿瘤细胞的杀伤，抑制PD
‑
1/PD
‑
L1信号转导可以使异常的肿瘤微环境正常化，逆转T细胞抑制并增强内源性抗肿瘤免疫，到目前为止，PD
‑
1/PD
‑
L1已经对多种癌症有明显的治疗效果，例如黑色素瘤、非小细胞肺癌、胃癌、肝癌、淋巴瘤等。
[0006]目前，美国食品和药物管理局(FDA)批准上市的PD
‑
1治疗性单抗包括Nivolumab(Opdivo，2014年9月)、Pembrolizumab(Keytruda，2014年12月)和Cemiplimab(Libtayo，2018年9月)，已上市的PD
‑
L1治疗性单抗包括Atezolizumab(Tecentriq，2014年9月)、Avelumab(Bavencio，2016年5月)和Duravulumab(Imfinzi，2017年5月)，用于治疗黑色素瘤、非小细胞肺癌、默克细胞癌、乳腺癌等。
[0007]专利CN112921003A公开了一种达PD
‑
L1分子的间充质干细胞来源外泌体及其制备方法与应用，其利用间充质干细胞对机体的免疫调控功能及PD
‑
1/PD
‑
L1信号通路在免疫应答中的抑制作用，从而有效治疗免疫炎性疾病。专利CN111518757A公开了一种免疫抑制或抗炎功能增强型PD
‑
L1阳性间充质干细胞、诱导试剂盒及应用，对胶原诱导的关节炎小鼠和CLP脓毒症模型小鼠均具有更好的治疗疗效，且未见副作用的发生，在自身免疫性疾病和炎性相关疾病的临床治疗中极具应用潜力。
[0008]这种治疗性单克隆抗体药物具有先进的抗癌功能，但是抗体的免疫原性、肿瘤靶点长期使用的耐受性以及单纯性阻断信号转导通路的长期效果等问题仍有待进一步研究，多数单抗很难实现对肿瘤细胞的长期有效抑制和杀伤作用。
[0009]基于此，亟需一种新的途径解决上述单抗的不足，用于制备抑制PD
‑
1/PD
‑
L1结合的药物。

技术实现思路

[0010]针对上述不足，本专利技术提供了一种表达αPDL1:Fc融合蛋白基因修饰的间充质干细胞及其制备方法与应用。本专利技术通过采用基因工程手段使间充质干细胞表达分泌型αPDL1:Fc类似物蛋白，特异性阻断PD
‑
1/PD
‑
L1结合，从而抑制肿瘤细胞免疫逃逸，达到治疗肿瘤相关疾病的目的。
[0011]为了实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：
[0012]一方面，本专利技术提供了一种αPDL1:Fc融合蛋白的编码核苷酸，所述的编码核苷酸包含编码抗PD
‑
L1单链抗体的核苷酸。
[0013]具体地，所述的编码抗PD
‑
L1单链抗体的核苷酸包含编码抗PD
‑
L1单链抗体重链可变区VH的SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列、和编码抗PD
‑
L1单链抗体轻链可变区VL的SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列。
[0014]所述的SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列为：
[0015]GAAGTGCAGCTTGTAGAAAGCGGAGGAGGACTGGTTCAACC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种αPDL1:Fc融合蛋白的编码核苷酸，其特征在于：所述的编码核苷酸包含编码抗PD
‑
L1单链抗体的核苷酸；所述的编码抗PD
‑
L1单链抗体的核苷酸包含编码抗PD
‑
L1单链抗体重链可变区VH的SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列、和编码抗PD
‑
L1单链抗体轻链可变区VL的SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列；所述的SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列为：GAAGTGCAGCTTGTAGAAAGCGGAGGAGGACTGGTTCAACCTGGGGGTAGCTTGCGACTGTCATGCGCCGCGAGCGGCTTTACTTTCAGTGATTCCTGGATACACTGGGTGCGCCAGGCCCCCGGTAAGGGTTTGGAATGGGTCGCTTGGATCTCTCCCTACGGTGGGAGCACTTATTATGCAGACTCCGTCAAAGGTAGATTTACAATCTCAGCAGACACGAGCAAAAACACAGCTTACTTGCAAATGAACTCACTCAGAGCGGAGGACACCGCAGTTTATTATTGTGCACGGAGACATTGGCCGGGCGGCTTCGATTACTGGGGACAAGGAACTCTCGTAACCGTAAGCAGTGCG；所述的SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列为：GACATCCAAATGACCCAGTCTCCCAGTTCTTTGTCAGCATCAGTTGGTGATCGAGTGACCATCACGTGTAGAGCTTCACAAGACGTTTCTACAGCAGTAGCATGGTACCAGCAAAAACCGGGGAAAGCGCCGAAACTCTTGATATATTCAGCATCATTCCTTTACAGCGGGGTTCCCTCTCGGTTCTCTGGATCCGGCTCAGGCACCGACTTTACGCTCACAATTTCCAGTTTGCAGCCGGAAGATTTTGCGACGTATTACTGCCAGCAATATTTGTACCACCCTGCTACATTTGGGCAAGGGACTAAAGTCGAAATTAAGCGA；所述的SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列为：GAGGTACAGTTGGTCGAAAGCGGTGGGGGTCTTGTTCAACCCGGCGGTAGTCTTCGACTGTCGTGCGCGGCATCCGGTTTTACCTTTTCTGATAGCTGGATCCATTGGGTAAGACAAGCTCCTGGGAAAGGCCTTGAGTGGGTCGCCTGGATATCACCTTACGGTGGAAGCACCTATTATGCTGATTCAGTTAAAGGGCGCTTTACGATCTCCGCCGACACCTCGAAAAACACAGCTTACCTGCAAATGAACTCCCTACGTGCAGAAGATACCGCTGTCTACTACTGTGCACGACGCCATTGGCCTGGCGGATTCGATTATTGGGGTCAGGGGACACTTGTGACTGTCAGTTCCGCG；所述的SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列为：GACATTCAGATGACCCAATCGCCTAGCTCACTTTCTGCGAGTGTGGGAGACAGGGTCACTATTACTTGCCGCGCCAGTCAGGATGTATCCACGGCTGTTGCTTGGTATCA...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘拥军，刘广洋，李欣，米一，王荷蕊，苗丽，
申请(专利权)人：北京贝来生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：