跨物种抗潜伏TGF-β1抗体和使用方法技术

本发明专利技术的目的是提供跨物种抗潜伏TGF

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】跨物种抗潜伏TGF
‑
β
1抗体和使用方法


[0001]本专利技术涉及抗潜伏TGF
‑
β1抗体及其使用方法。

技术介绍

[0002]转化生长因子
‑
β(转化生长因子β；TGF
‑
β)是细胞因子TGF
‑
β超家族的成员，该超家族由TGF
‑
β同工型、激活素、抑制素、Nodal、骨形态发生蛋白(BMP)、抗Mullerian激素(AMH)以及生长和分化因子(GDF)组成。该超家族的成员是具有保守结构的二聚体蛋白，并且具有体外和体内多向性功能(NPL 1、2)。TGF
‑
β同工型参与许多细胞过程，包括生长抑制、细胞迁移、侵袭、上皮间质转化(EMT)、细胞外基质(ECM)重塑和免疫抑制(NPL 3)。然而，尽管通常动态调节并参与维持组织稳态，但TGF
‑
β同工型在疾病状态(包括癌症、纤维化和炎症)下经常长期过表达，并且这种TGF
‑
β的过度产生通过调节细胞生长、迁移或表型而推动疾病进展。
[0003]已经在哺乳动物中鉴定出三种单独的TGF
‑
β同工型(TGF
‑
β1、TGF
‑
β2和TGF
‑
β3)，并且在氨基酸水平上具有70
‑
82％同源性(NPL 4)。所有三种TGF
‑
β同工型均以同源二聚体(它们的活性形式)与2型TGF
‑/>β受体(TGFR2)结合；然后TGFR2募集并激活1型TGF
‑
β受体(TGFR1)以激活受体信号传导(NPL 5)。然而，三种同工型的表达水平因组织而异(NPL 6)，并且它们的功能不同，如敲除小鼠的表型所阐明(NPL 7
‑
11)。
[0004]与TGF
‑
β超家族的其他成员一样，TGF
‑
β以前体蛋白合成，形成同源二聚体，该同源二聚体与其潜伏相关肽(LAP)和潜伏TGF
‑
β结合蛋白(LTBP)相互作用以形成更大复合体，称为大潜伏复合体(LLC)。TGF
‑
β基因编码由信号肽、以前蛋白转化酶(PPC)切割位点为末端的前肽和成熟TGF
‑
β序列组成的前蛋白原序列。弗林蛋白酶水解PPC切割位点，产生单独的TGF
‑
β同源二聚体和前肽衍生的同源二聚体。这两种同源二聚体保持非共价缔合并被分泌。这种潜伏复合体使TGF
‑
β保持为无法与其受体结合的非活性形式(NPL 12、13)。TGF
‑
β激活过程涉及LLC从ECM释放，然后进一步蛋白水解LAP以释放活性TGF
‑
β至其受体(NPL 3)。潜伏TGF
‑
β经多种蛋白酶(包括纤溶酶(PLN)、血浆激肽释放酶(PLK)、基质金属蛋白酶(MMP)2和MMP9(NPL 14)，以及血小板反应蛋白1(TSP
‑
1)(NPL 15))切割以释放活性TGF
‑
β。不希望受任何理论束缚，MMP2以及MMP9蛋白酶解切割潜伏TGF
‑
β1并从潜伏形式释放成熟TGF
‑
β1。MMP2和MMP9均被合成为非活性pro
‑
MMP。Pro
‑
MMP2被膜1型MMP(MT1
‑
MMP/MMP14)和金属蛋白酶2组织抑制剂(TIMP
‑
2)的复合体激活。Pro
‑
MMP9通过涉及纤溶酶和溶基质蛋白酶1(MMP
‑
3)的相互作用蛋白酶级联被激活。纤溶酶从其酶原产生活性MMP
‑
3。活性MMP
‑
3从92
‑
kDa pro
‑
MMP
‑
9切割前肽，产生82
‑
kDa具有酶活性的酶。MMP的切割位点未具体确定；然而，据报道MMP3特异性切割潜伏TGF
‑
β的79Ala和80Leu之间的位点，从而激活TGF
‑
β(WO2005/023870)。可选地，在机械延伸时，整联蛋白可以通过与LAP中存在的RGD基序结合来激活TGF
‑
β，以诱导成熟TGF
‑
β从其潜伏复合体中释放(NPL 16、17)。
[0005]激活后，二聚体TGF
‑
β配体与I型和II型受体的细胞外结构域结合并诱导紧密接近，受体的细胞内丝氨酸/苏氨酸激酶结构域被置于促进I型受体磷酸化和随后激活的构象
中。I型受体的这种激活导致信号传导通过至少两个似乎非依赖性通路传播：SMAD依赖性经典通路和SMAD非依赖性或非经典通路。在SMAD依赖性通路中，TGFR1(也称为ALK5)的激活导致SMAD蛋白磷酸化。SMAD2和SMAD3是TGFR1的底物。在被受体磷酸化后，SMAD与共同中介体SMAD4一起转移至细胞核，在细胞核中它们与其他转录因子相互作用以调节转录响应(NPL 18)。在非经典通路中，激活的TGF
‑
β受体复合体通过其他因子(例如肿瘤坏死因子(TNF)受体相关因子4(TRAF4)、TRAF6、TGF
‑
β激活激酶1(TAK1，也称为MAP3K7)、p38促分裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)、RHO、磷酸肌醇3
‑
激酶(PI3K)、AKT(也称为蛋白激酶B)、细胞外信号调节激酶(ERK)、JUN N端激酶(JNK)或核因子
‑
κB(NF
‑
κB))传递信号。因此，细胞对TGF
‑
β信号传导的响应是由经典和非经典信号传导级联的动态组合所致。
[0006]纤维化，或构成疤痕组织的ECM分子的蓄积，是慢性组织损伤的常见特征。肺纤维化、肾纤维化和肝硬化是更常见的纤维化疾病，它们总体上代表了巨大未满足的临床需求。TGF
‑
β强烈促进间充质细胞的细胞外基质的生成，同时抑制上皮细胞生长，这有助于硬化疾病的发病机制。转基因小鼠肝脏中活性形式的TGF
‑
β1的过表达足以诱导多个器官发生纤维化疾病(NPL 19)。另一方面，TGF
‑
β在维持我们的健康方面也发挥重要作用。例如，TGF
‑
β抑制肺中蛋白酶的过度生成，并防止导致肺气肿的肺组织破坏。此外，TGF
‑
β1缺失的小鼠显示出产前致死率(在交配后10.5天时约50％)或它们的幼仔在出生后不久死亡，伴有许多器官中大量炎性病变，包括肺(血管炎、血管周围套囊和间质肺炎)和心脏(心内膜炎和心肌炎)，这表明TGF
‑
β1在维持免疫稳态中发挥至关重要的作用(NPL 7)。
[0007]使用TGF<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种抗潜伏TGF
‑
β1抗体，其包含：(a)分别包含SEQ ID NO:20、21和22的氨基酸序列的HVR
‑
H1、HVR
‑
H2和HVR
‑
H3，以及分别包含SEQ ID NO:23、24和25的氨基酸序列的HVR
‑
L1、HVR
‑
L2和HVR
‑
L3；(b)分别包含SEQ ID NO:26、27和28的氨基酸序列的HVR
‑
H1、HVR
‑
H2和HVR
‑
H3，以及分别包含SEQ ID NO:29、30和31的氨基酸序列的HVR
‑
L1、HVR
‑
L2和HVR
‑
L3；(c)分别包含SEQ ID NO:32、33和34的氨基酸序列的HVR
‑
H1、HVR
‑
H2和HVR
‑
H3，以及分别包含SEQ ID NO:35、36和37的氨基酸序列的HVR
‑
L1、HVR
‑
L2和HVR
‑
L3；或(d)分别包含SEQ ID NO:38、39和40的氨基酸序列的HVR
‑
H1、HVR
‑
H2和HVR
‑
H3，以及分别包含SEQ ID NO:41、42和43的氨基酸序列的HVR
‑
L1、HVR
‑
L2和HVR
‑
L3。2.权利要求1所述的抗潜伏TGF
‑
β1抗体，其包含：(a)(i)与SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列，(ii)与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列，或(iii)如(i)中的VH序列和如(ii)中的VL序列；(b)(i)与SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列，(ii)与SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列，或(iii)如(i)中的VH序列和如(ii)中的VL序列；(c)(i)与SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列，(ii)与SEQ ID NO:17的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列，或(iii)如(i)中的VH序列和如(ii)中的VL序列；或(d)(i)与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列，(ii)与SEQ ID NO:19的氨基酸序列具有至少95％...

【专利技术属性】
技术研发人员：岛田英辉，金森正和，古幸儿，
申请(专利权)人：中外制药株式会社，
类型：发明
国别省市：