【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种具有抗il-17a活性的基因修饰干细胞及其制备方法以及药物组合物。
技术介绍
1、间充质干细胞（mscs）来源于胚胎发育早期的中胚层，是一种异质性的细胞群体，机体内的mscs包含自胚胎发育早期及之后不同发育阶段的干细胞及分化后代。人体的组织都含有mscs，多种组织和器官中mscs含量丰富，如骨髓、脂肪、牙髓、脐带和胎盘等。mscs的免疫原性低，并且能够在重复注射后都不被受者的免疫系统识别，这是mscs用于临床治疗的一个最显著的优势。mscs还能够分泌很多生物活性分子以及一些免疫调节因子，能够对机体的损伤、炎症等起到修复作用。目前，mscs被用于治疗多种疾病的临床研究，包括多发性硬化症，心肌梗死，器官移植，肝硬化及肝衰竭，心衰，gvhd，左心室功能失调，白血病及克罗恩病等。
2、mscs还是非常理想的基因治疗细胞载体，易被所有临床上普遍应用的病毒载体系统所转染，经过基因修饰的mscs输注后可以遍布全身，不仅可以发挥干细胞归巢和修复的作用，同时又可大量表达如细胞因子等的目的基因，而且二者具有协同作用，这样可以扩大mscs治疗的疾病范围，使得病灶部位局部的修复几率大大提高。这些优点使得mscs成为最具有基因治疗研究和临床治疗应用前景的干细胞之一。
3、专利cn 112941028 a公开了一种纳米抗体基因修饰的间充质干细胞及其制备方法与应用。该间充质干细胞含有、和/或表达、和/或分泌纳米抗体。该间充质干细胞或该间充质干细胞的培养提取物，迁移至目标靶位的同时，使得纳米抗体能
4、il-17a是一种主要由活化的t细胞产生的致炎细胞因子，作用于下游效应细胞介导多种生理过程，如炎症反应、凝血过程和骨重塑等，与机体多种疾病密切相关。il-17a表达过量时将导致脊柱关节炎、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、银屑病、炎症性肠病等多种疾病的发生发展。对于这类疾病临床可用的特效药物较少，传统治疗存在起效较慢、依从性差等缺点。鉴于以上基因修饰干细胞的在治疗中的优势，亟需开发一种基因修饰干细胞用于上述疾病的治疗。
5、本专利技术人致力于抗il-17a抗体开发，为便于审查，现对研发项目的技术背景进行简要介绍：
6、专利技术人基于筛选出的9个单域抗体（已另案申请），进行进一步的技术开发，获得了12个亲和力、阻断效果和稳定性相对提升的单域抗体组合（已另案申请）。
7、本专利技术人在上述技术方案的基础上，继续进行技术开发，研发了单域抗体组合基因修饰干细胞技术，基于专利法单一性的相关规定，对3个不同的基因修饰干细胞分别请求保护，本案系基因修饰干细胞技术之一所进行的专利技术专利申请。
8、为便于理解本申请，可选地参阅本项目其他专利申请文件。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供了一种含有、表达和/或分泌抗il-17a抗体的干细胞，其特征在于，所述的抗il-17a抗体为二价单域抗体，所述的二价单域抗体的氨基酸序列为seq id no.1。
2、本专利技术中，单域抗体又称纳米抗体为其互补决定区是单域多肽的一部分的抗体。因此，单域抗体包含单个互补决定区。单域抗体为仅有重链的抗体，该抗体天然不包含轻链，衍生自常规抗体的单域抗体和工程化抗体。单域抗体可以衍生自任何物种，包括小鼠、人、骆驼、美洲驼、山羊、兔和牛。例如，天然存在的vhh分子可以衍生自骆驼科物种(例如骆驼、单峰骆驼、美洲驼和原驼)提供的抗体。像完整的抗体一样，单域抗体能够选择性地结合特定抗原。单域抗体可以仅含有免疫球蛋白链的可变结构域，该结构域具有cdr1、cdr2和cdr3以及框架区。
3、本专利技术中，抗il-17a的二价单域抗体即抗il-17a的双价单域抗体不仅包括完整的二价单域抗体，还包括所述抗il-17a的二价单域抗体的片段、衍生物和类似物。其中，片段、衍生物和类似物含义相同，均是指基本上保持本专利技术抗体相同的生物学功能或活性的多肽。本专利技术的多肽片段、衍生物或类似物可以是有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基（优选保守性氨基酸残基）被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或成熟多肽与另一个化合物（比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇）融合所形成的多肽，或附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽（如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列，或与fc标签形成的融合蛋白）。
4、本专利技术中，序列同源性表示两个（核苷酸或氨基酸）序列在比对中在相同位置处具有相同残基的程度，并且通常表示为百分数。优选地，同源性在被比较的序列的整体长度上确定。因此，具有完全相同序列的两个拷贝具有100％同源性。在一些实施例中，与前述序列相比仅仅替换一个或少数几个氨基酸的序列，例如，包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个保守氨基酸取代，也可以实现专利技术目的。这些变异形式包括但并不限于：一个或多个(通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在c末端和/或n末端添加一个或数个（通常为20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内）氨基酸。实际上，在确定两个氨基酸序列之间的序列同源性程度或在确定单域抗体中的cdr1、cdr2和cdr3组合时，技术人员可以考虑所谓的“保守”氨基酸取代，在取代情况下，所述取代将优选为保守氨基酸取代。所述保守氨基酸，其通常可以被描述为氨基酸残基被具有相似化学结构的另一个氨基酸残基替代的氨基酸取代，并且该取代对多肽的功能、活性或其它生物学性质几乎没有或基本上没有影响。所述保守氨基酸取代在本领域是通用的，例如保守氨基酸取代是以下（a）-（d）组内的一个或少数几个氨基酸被同一组内另一个或少数几个氨基酸所取代：（a）极性带负电残基及其不带电酰胺：asp、asn、glu、gln；（b）极性带正电残基：his、arg、lys；（c）芳香族残基：phe、trp、tyr；（d）脂肪族非极性或弱极性残基：ala、ser、thr、gly、pro、met、leu、ile、val、cys。特别优选的保守氨基酸取代如下：asp被glu取代；asn被gln或his取代；glu被asp取代；gln被asn取代；his被asn或gln取代；arg被lys取代；lys被arg、gln取代；phe被met、leu、tyr取代；trp被tyr取代；tyr被phe、trp取代；ala被gly或ser取代；ser被thr取代；thr被ser取代；gly被ala或pro取代；met被leu、tyr或ile取代；leu被ile或val取代；ile被leu或val取代；val被ile或leu取代；cys被ser取代。另外，本领域技术人员知晓，单域抗体的创造本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种经修饰的干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含、表达和/或分泌下述（1）和（2）：
2.一种干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含、表达和/或分泌下述（1）和（2）：
3.一种干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含、表达和/或分泌融合蛋白；
4.一种经修饰的干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含、表达和/或分泌下述（1）和（2）：
5.一种干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含、表达和/或分泌融合蛋白；
6.一种干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含下述（1）和（2）：
7.根据权利要求6所述的干细胞，其特征在于，所述的第一核酸分子编码包含SEQ IDNO: 7-10所示的氨基酸序列的核苷酸序列；
8.一种干细胞，其特征在于，所述的第一核酸分子和第二核酸分子之间由编码包含(GGGGS)n所示的氨基酸序列的核苷酸序列连接，其中n为1、2、3、4、5或6。
9.一种干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含下述（1）和（2）：
10.一种干细胞，特征在于，所述的干细胞包含编码SEQ ID
11.根据权利要求10所述的干细胞，其特征在于，所述的干细胞还包含、表达和/或分泌能够延长抗体在体内半衰期的生物活性蛋白或其功能片段。
12.根据权利要求11所述的干细胞，其特征在于，所述的生物活性蛋白或其功能片段选自免疫球蛋白Fc结构域、血清白蛋白、白蛋白结合多肽、前白蛋白、羧基末端肽、弹性蛋白样多肽、His标签、GST标签、MBP标签、FLAG标签和SUMO标签中的至少一种。
13.根据权利要求12所述的干细胞，其特征在于，所述的干细胞选自胚胎干细胞、成体干细胞、间充质干细胞、脐带血干细胞、造血干细胞、神经干细胞、脂肪干细胞、皮肤干细胞或肌肉干细胞。
14.根据权利要求12所述的干细胞，其特征在于，所述的干细胞分离自脐带血、脐带、胎盘、脂肪组织、皮肤、神经组织、骨髓或胚胎。
15.根据权利要求10-14任一项所述的干细胞，其特征在于，所述的干细胞分泌抗白细胞介素抗体。
16.根据权利要求15所述的干细胞，其特征在于，所述的干细胞分泌抗白细胞介素17抗体。
17.根据权利要求16所述的干细胞，其特征在于，所述的干细胞分泌抗IL-17A抗体。
18.一种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1-17任一项所述的干细胞。
19.一种权利要求1-17任一所述的干细胞的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：将所述的核酸分子通过病毒转染、脂质体转染、电转移、基因编辑或mRNA转染导入干细胞。
20.一种用于非诊断目的的体外检测样品中的IL-17A的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种经修饰的干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含、表达和/或分泌下述（1）和（2）：
2.一种干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含、表达和/或分泌下述（1）和（2）：
3.一种干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含、表达和/或分泌融合蛋白；
4.一种经修饰的干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含、表达和/或分泌下述（1）和（2）：
5.一种干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含、表达和/或分泌融合蛋白；
6.一种干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含下述（1）和（2）：
7.根据权利要求6所述的干细胞，其特征在于，所述的第一核酸分子编码包含seq idno: 7-10所示的氨基酸序列的核苷酸序列；
8.一种干细胞，其特征在于，所述的第一核酸分子和第二核酸分子之间由编码包含(ggggs)n所示的氨基酸序列的核苷酸序列连接，其中n为1、2、3、4、5或6。
9.一种干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含下述（1）和（2）：
10.一种干细胞，特征在于，所述的干细胞包含编码seq id no.17所示的氨基酸序列的核苷酸序列。
11.根据权利要求10所述的干细胞，其特征在于，所述的干细胞还包含、表达和/或分泌能够延长抗体在体内半衰期的生物活性蛋白或其功能片段。
12.根据权利要求11所述的干细...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘广洋，刘拥军，李欣，王荷蕊，张晨亮，
申请(专利权)人：北京贝来生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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