【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种经修饰的自复制rna。
技术介绍
1、传统灭活疫苗、重组蛋白疫苗生产周期长，工艺复杂。
2、mrna 疫苗是利用线性化的质粒dna为模板，在体外进行酶转录反应合成的，该合成策略避免了活细胞培养生产方式，以及复杂的生产工艺等问题。mrna疫苗平台具有安全有效、生产周期短、工艺简洁的特点。
3、自复制rna（self-replicating rna, srrna）疫苗在动物实验中有很强的固有免疫刺激，能够以自身为模板复制出自身的序列，因此相比常规mrna 疫苗需要的接种剂量更少，并且自复制时所诱导的免疫反应形成的佐剂效应，能够诱导出更强的免疫应答，进一步增强体液和细胞免疫反应。
4、mrna技术之所以被大规模应用，其中一个重要的原因是mrna在生产过程中，尿苷可以被n1-甲基化-假尿苷或者其他修饰核苷酸取代，其主要作用是能够降低mrna在体内的固有免疫刺激，并且增加了mrna的稳定性及蛋白翻译效率。
5、自复制rna在体内的固有免疫刺激反应，会影响其序列的稳定性、复制效率及蛋白表达水平等，因此需要选择合适的方式降低自复制rna引起的固有免疫反应以提高其使用效果。
6、目前已经有一些研究在尝试降低自复制rna的固有免疫刺激，其中一种方法是借鉴传统mrna的生产方式，对自复制rna添加核苷酸修饰，该方法可以有效降低其固有免疫刺激，但是后续有研究表明，核苷酸的掺入影响了自复制rna的起始复制效率。也有一些研究在自复制rna上插入或者共表达免
技术实现思路
1、本专利技术的第一目的在于提供一种经修饰的自复制rna，其包含：5’非翻译区 (5’utr)；一个或多个来自甲病毒的非结构蛋白（nsp），且其中含有nsp2；以及目标片段；
2、其中，当所述5’非翻译区中第3个位点的碱基为腺苷，且nsp2的第739个位点的氨基酸为谷氨酰胺时，所述自复制rna中的尿苷按照1%~100%的比例被修饰为假尿苷或n1-甲基化-假尿苷；
3、当所述5’非翻译区中第3个位点的碱基为鸟苷，且nsp2的第739个位点的氨基酸为亮氨酸时，所述自复制rna中的尿苷按照1%~80%的比例被修饰为假尿苷或n1-甲基化-假尿苷。
4、本专利技术的第二目的在于提供一种药物组合物，其包含前述的经修饰的自复制rna。
5、本专利技术的第三目的在于提供一种方法，其用于改变自复制rna的如下至少一种特性：
6、i）提高自复制rna的蛋白表达水平；
7、ii）降低自复制rna的固有免疫刺激；
8、所述方法包括：
9、对自复制rna进行修饰，得到前述的经修饰的自复制rna。
10、本专利技术中经修饰的自复制rna能够在保证自复制rna的蛋白表达水平的同时，降低自复制rna的固有免疫刺激，因而更有利于在自复制rna的应用中提高其使用效果。
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1.经修饰的自复制RNA，其特征在于，其包含：
2.根据权利要求1所述的经修饰的自复制RNA，其特征在于，其中，当所述5’非翻译区中第3个位点的碱基为腺苷，且NSP2的第739个位点的氨基酸为谷氨酰胺时，所述自复制RNA中的尿苷按照20%~60%的比例被修饰为假尿苷。
3.根据权利要求1所述的经修饰的自复制RNA，其特征在于，其中，当所述5’非翻译区中第3个位点的碱基为腺苷，且NSP2的第739个位点的氨基酸为谷氨酰胺时，所述自复制RNA中的尿苷按照40%~100%的比例被修饰为N1-甲基化-假尿苷。
4.根据权利要求1所述的经修饰的自复制RNA，其特征在于，其中，当所述5’非翻译区中第3个位点的碱基为鸟苷，且NSP2的第739个位点的氨基酸为亮氨酸时，所述自复制RNA中的尿苷按照40%~60%的比例被修饰为假尿苷。
5.根据权利要求1所述的经修饰的自复制RNA，其特征在于，其中，当所述5’非翻译区中第3个位点的碱基为鸟苷，且NSP2的第739个位点的氨基酸为亮氨酸时，所述自复制RNA中的尿苷按照40%~80%的比例被修饰为N1-甲
6.根据权利要求1所述的经修饰的自复制RNA，其特征在于，其中，所述自复制RNA还包含：
7.根据权利要求1所述的经修饰的自复制RNA，其特征在于，其中，所述甲病毒选自：委内瑞拉马脑脊髓炎病毒，辛德毕斯病毒、屈曲病毒、东方马脑脊髓炎病毒、西方马脑脊髓炎病毒、马雅鲁病毒、生里基森林病毒以及委内瑞拉马脑脊髓炎病毒中的至少一种。
8.根据权利要求1所述的经修饰的自复制RNA，其特征在于，其中，所述自复制RNA自5’端到3’端依次包含：5’帽子结构，5’非翻译区，非结构蛋白1~非结构蛋白4，亚基因组启动子，目标片段，3’非翻译区以及多聚腺苷尾。
9.根据权利要求8所述的经修饰的自复制RNA，其特征在于，其中，所述自复制RNA含有：
10.根据权利要求1所述的经修饰的自复制RNA，其特征在于，其中，所述目标片段包含编码SARS-CoV-2的刺突蛋白的RBD或其片段的RNA、或包含编码hEPO的RNA、或包含编码Fluc的RNA。
11.根据权利要求1所述的经修饰的自复制RNA，其特征在于，其中，与未修饰的自复制RNA相比，所述经修饰的自复制RNA具有更低的固有免疫刺激，同时具有部分、相当或更高的复制效率及蛋白表达水平。
12.根据权利要求11所述的经修饰的自复制RNA，其特征在于，其中，所述经修饰的自复制RNA所引起的先天炎症基因的表达水平为未修饰的自复制RNA的0.004~0.8倍；所述先天炎症基因包括IFN-β1和RIG-I中的至少一种。
13.根据权利要求11所述的经修饰的自复制RNA，其特征在于，其中，所述经修饰的自复制RNA的复制效率为未修饰的自复制RNA的0.3~1.8倍。
14.根据权利要求11所述的经修饰的自复制RNA，其特征在于，其中，所述经修饰的自复制RNA的蛋白表达水平为未修饰的自复制RNA的0.1~6.5倍。
15.药物组合物，其特征在于，其包含权利要求1~14中任一项所述的经修饰的自复制RNA。
16.根据权利要求15所述的药物组合物，其特征在于，其还包含药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂、核酸稳定剂和转染试剂中的至少一种。
17.根据权利要求15所述的药物组合物，其特征在于，其中，所述药物组合物为疫苗；所述疫苗以质粒、病毒载体、脂质体、树状大分子、无机纳米粒子或细胞穿膜肽的形式进行包装递送。
18.一种自复制RNA的修饰方法，其特征在于，其用于在降低自复制RNA的固有免疫刺激的同时，使自复制RNA具有部分、相当或更高的复制效率及蛋白表达水平；
...【技术特征摘要】
1.经修饰的自复制rna，其特征在于，其包含：
2.根据权利要求1所述的经修饰的自复制rna，其特征在于，其中，当所述5’非翻译区中第3个位点的碱基为腺苷，且nsp2的第739个位点的氨基酸为谷氨酰胺时，所述自复制rna中的尿苷按照20%~60%的比例被修饰为假尿苷。
3.根据权利要求1所述的经修饰的自复制rna，其特征在于，其中，当所述5’非翻译区中第3个位点的碱基为腺苷，且nsp2的第739个位点的氨基酸为谷氨酰胺时，所述自复制rna中的尿苷按照40%~100%的比例被修饰为n1-甲基化-假尿苷。
4.根据权利要求1所述的经修饰的自复制rna，其特征在于，其中，当所述5’非翻译区中第3个位点的碱基为鸟苷，且nsp2的第739个位点的氨基酸为亮氨酸时，所述自复制rna中的尿苷按照40%~60%的比例被修饰为假尿苷。
5.根据权利要求1所述的经修饰的自复制rna，其特征在于，其中，当所述5’非翻译区中第3个位点的碱基为鸟苷，且nsp2的第739个位点的氨基酸为亮氨酸时，所述自复制rna中的尿苷按照40%~80%的比例被修饰为n1-甲基化-假尿苷。
6.根据权利要求1所述的经修饰的自复制rna，其特征在于，其中，所述自复制rna还包含：
7.根据权利要求1所述的经修饰的自复制rna，其特征在于，其中，所述甲病毒选自：委内瑞拉马脑脊髓炎病毒，辛德毕斯病毒、屈曲病毒、东方马脑脊髓炎病毒、西方马脑脊髓炎病毒、马雅鲁病毒、生里基森林病毒以及委内瑞拉马脑脊髓炎病毒中的至少一种。
8.根据权利要求1所述的经修饰的自复制rna，其特征在于，其中，所述自复制rna自5’端到3’端依次包含：5’帽子结构，5’非翻译区，非结构蛋白1~非结构蛋白4，亚基因组启动子，目标片段，3’非翻译区以及多聚腺苷尾。
9.根据权利要求8所述的经修饰...
【专利技术属性】
技术研发人员：王子豪，郭志军，刘元庆，唐喆伟，吴红跃，任晓光，
申请(专利权)人：嘉晨西海南昌生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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