能够抑制乙型肝炎病毒(HBV)对人肝细胞的感染的与人NTCP结合的抗体制造技术

本发明专利技术提供能够抑制乙型肝炎病毒(HBV)粒子对人肝细胞的感染的、与NTCP结合的抗体。另外，本发明专利技术提供能够抑制乙型肝炎病毒(HBV)粒子对人肝细胞的感染的、与NTCP结合且降低了NTCP对胆汁酸转运的影响的抗体。NTCP对胆汁酸转运的影响的抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】能够抑制乙型肝炎病毒(HBV)对人肝细胞的感染的与人NTCP结合的抗体


[0001]本专利技术涉及能够抑制乙型肝炎病毒(HBV)对人肝细胞的感染的与人牛磺胆酸钠共转运多肽(sodium taurocholate cotransporting polypeptide或NTCP)结合的抗体。另外，本专利技术涉及能够抑制乙型肝炎病毒(HBV)对人肝细胞的感染的、与人NTCP结合且降低了NTCP对胆汁酸转运的影响的抗体。

技术介绍

[0002]乙型肝炎病毒(HBV)在人体中建立持续性感染的肝脏指向性的病毒。HBV感染时的年龄在慢性化风险的确定中极为重要。该风险在不满1岁的感染中为90％以上，在1～5岁的感染中为30％，在成人中为0～2％。因此，慢性HBV感染症大多是通过分娩时的母婴传播获得，或者在幼儿期和儿童期获得。而且，对儿童的感染可由其它HBV阳性的近亲属产生。
[0003]根据2002年的世界卫生组织(WHO)的推算，乙型肝炎病毒的感染者在全世界为20亿人，乙型肝炎病毒的持续感染者为3.5亿人。病毒感染者大多会恢复，但是～10％的感染者不能清除病毒。HBV感染会引起重症肝衰竭、慢性肝炎、肝硬化和肝癌等各种肝脏疾病。
[0004]乙型肝炎病毒介由病毒L蛋白的preS1结构域与细胞膜上的NTCP结合。认为通过抑制乙型肝炎病毒与细胞膜的结合，能够预防乙型肝炎病毒的感染、防止感染在体内的扩大，要求进行开发。但是，NTCP具有作为胆汁酸转运体的重要功能，以前开发的以NTCP为靶的HBV抑制剂虽然能够抑制HBV的细胞感染，但是同时也显著抑制胆汁酸转运，可能给患者带来副作用(非专利文献1～4)。近年来，报道了抑制病毒感染且不大幅抑制胆汁酸转运的环状肽(非专利文献5)。
[0005]现有技术文献
[0006]非专利文献
[0007]非专利文献1：Hepatology(2014)；59(5):1726
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37
[0008]非专利文献2：Intervirology(2014)57:151
‑
157
[0009]非专利文献3：BMB reports(2008),640
‑
652
[0010]非专利文献4：J Virology(2005)79:1613
‑
1622
[0011]非专利文献5：Cell Chemical biology(2018)25:906
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915

技术实现思路

[0012]本专利技术提供能够抑制乙型肝炎病毒(HBV)粒子对人肝细胞的感染的、与NTCP结合的抗体。另外，本专利技术提供能够抑制乙型肝炎病毒(HBV)粒子对人肝细胞的感染的、与NTCP结合且降低了NTCP对胆汁酸转运的影响的抗体。
[0013]本专利技术人确定出能够抑制乙型肝炎病毒(HBV)粒子对人肝细胞的感染的抗体。另外，本专利技术人鉴定出该抗体不进行结合的NTCP变异体。由此明确了该抗体与NTCP结合所必需的NTCP上的氨基酸残基。另外，该NTCP变异体对HBV对细胞的感染为抵抗性，因此明确了
上述氨基酸残基也为HBV对细胞的感染所必需的NTCP上的氨基酸。本专利技术人进一步发现，与该氨基酸序列结合的抗体对基于NTCP蛋白的胆汁酸转运功能不会造成明显影响。
[0014]本专利技术提供例如以下的专利技术。
[0015][1]一种抗体，其是与人牛磺胆酸钠共转运多肽(人NTCP)结合的抗体，其中，
[0016]所述抗体能够抑制乙型肝炎病毒(HBV)粒子对人肝细胞的感染，并且
[0017]在适合于培养肝细胞的培养条件下，在关于上述感染抑制的IC
50
的浓度下，不会抑制50％以上的基于人NTCP的胆汁酸向肝细胞内的摄入。
[0018][2]一种抗体，其是与人NTCP结合的抗体，其中，
[0019]所述抗体能够抑制乙型肝炎病毒(HBV)粒子对人肝细胞的感染，并且
[0020](1)以比对具有选自由序列号12～14记载的氨基酸序列组成的组中的氨基酸序列的人NTCP变异体中的至少一种更强的亲和性对具有序列号11记载的氨基酸序列的人NTCP进行结合；或者
[0021](2)与含有具有序列号3记载的氨基酸序列的重链可变区和具有序列号4记载的氨基酸序列的轻链可变区的抗体竞争对人NTCP的结合。
[0022][3]根据上述[1]或[2]所述的抗体，其含有：
[0023]包含具有序列号5记载的氨基酸序列的CDR1、具有序列号6记载的氨基酸序列的CDR2和具有序列号7记载的氨基酸序列的CDR3的重链可变区；以及
[0024]包含具有序列号8记载的氨基酸序列的CDR1、具有序列号9记载的氨基酸序列的CDR2和具有序列号10记载的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区。
[0025][4]根据上述[1]～[3]中任一项所述的抗体，其含有具有序列号3记载的氨基酸序列的重链可变区和具有序列号4记载的氨基酸序列的轻链可变区。
[0026][5]一种药物组合物，其含有上述[1]～[4]中任一项所述的抗体和医药上可接受的载体。
[0027][6]根据上述[5]所述的药物组合物，其用于对由乙型肝炎病毒引起的感染症进行处置。
附图说明
[0028]图1A是对得到的杂交瘤克隆培养上清中的抗体所带来的、对在HBV核心区整合有Promega的NanoLuc基因的重组病毒(HBV/NL)的感染抑制效果(横轴)与细胞存活率(纵轴)的关系作图而得的图。
[0029]图1B是示出经纯化的N6HB426
‑
20抗体、N6HB426
‑
s102抗体和preS1所带来的浓度依赖性的活HBV的感染抑制效果的图。
[0030]图2A～2C是示出经纯化的N6HB426
‑
20抗体、N6HB426
‑
20抗体和preS1所带来的浓度依赖性的活HBV的感染抑制效果的图。图2A是示出N6HB426
‑
20抗体的浓度依赖性的活HBV的感染抑制作用的图。
[0031]图2B是示出经纯化的N6HB426
‑
20
‑
A抗体、N6HB426
‑
20
‑
B抗体和重组N6HB426小鼠IgG2a抗体的浓度依赖性的HBV感染抑制作用的图。作为对照组，用与NTCP结合无关的抗卵清白蛋白抗体(Anti
‑
OVA)进行了试验。
[0032]图2C是示出纯化N6HB426
‑
20抗体对基因型C和基因型D的HBV的浓度依赖性的HBV
感染抑制作用的图。
[0033]图3示出胆汁酸向肝细胞株内的摄入分析的结果。该试验系统中，在1000nM的preS1存在下胆汁酸的摄入被抑制90％，而在相同物质量的纯化N6HB426抗体存在下的抑制最多为2％。
[0034本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种抗体，其是与人牛磺胆酸钠共转运多肽(人NTCP)结合的抗体，其中，所述抗体能够抑制乙型肝炎病毒(HBV)粒子对人肝细胞的感染，并且在适合于培养肝细胞的培养条件下，在关于上述感染抑制的IC
50
的浓度下，不会抑制50％以上的基于人NTCP的胆汁酸向肝细胞内的摄入。2.一种抗体，其是与人NTCP结合的抗体，其中，所述抗体能够抑制乙型肝炎病毒(HBV)粒子对人肝细胞的感染，并且(1)以比对具有选自由序列号12～14记载的氨基酸序列组成的组中的氨基酸序列的人NTCP变异体中的至少一种更强的亲和性对具有序列号11记载的氨基酸序列的人NTCP进行结合；或者(2)与含有具有序列号3记载的氨基酸序列的重链可变区和具有序列号4记载的氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：竹森利忠，杉本晶子，原田通成，白水美香子，松本武久，染谷友美，长田裕之，二村友史，下远野邦忠，西辻裕纪，茶山一彰，三木大树，
申请(专利权)人：国立研究开发法人国立国际医疗研究中心国立大学法人广岛大学，
类型：发明
国别省市：