抗体、药物组合物和方法技术

本发明专利技术涉及诸如抗Cls抗体的抗体、包含其的药物组合物以及使用其的方法。本发明专利技术提供抗体，所述抗体包含抗原结合区和抗体恒定区，具有取代功能和/或阻断功能并以pH依赖性方式与Cls结合，所述取代功能使得抗体结合Clqrs复合体并促进Clq从Clqrs复合体的解离，所述阻断功能使得抗体结合Clr2s2并抑制Clq与Clr2s2的结合。本发明专利技术还提供了包含任何一种抗体的药物组合物，以及治疗患有补体介导的疾病或病症的个体，或预防可能患有补体介导的疾病或病症的个体的方法，包括向个体施用任何一种抗体。包括向个体施用任何一种抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗体、药物组合物和方法


[0001]本专利技术涉及抗体例如抗Cls抗体及其使用方法。

技术介绍

[0002]C1复合体是一种大型蛋白质复合体，其功能为经典途径级联反应的关键引发剂。C1复合体由三种成分Clq、Clr和Cls组成，它们的摩尔比分别为1∶2∶2(NPL 1)。当C1复合体与抗体结合的靶标结合时，就会启动经典途径。Clq具有6个球状头部，通过与Fc区的亲合力相互作用介导C1复合体与抗体的结合。一旦与靶标紧密结合，C1复合体中的Clr就会自动活化并变得具有酶活性。活化的Clr然后切割并激活C1复合体中的酶原Cls(NPL 2)。随后，活性Cls将其底物补体成分C2和C4分别切割成C2a/C2b和C4a/C4b片段。这导致C4b2a(一种C3转化酶)在靶标表面上的组装，其切割C3以形成C3b。C3b反过来切割C5以启动末端膜攻击复合体C5b、C6、C7、C8和C9的形成，其通过孔形成裂解靶标。
[0003]Cls和Clr蛋白都具有相同的结构域组织，即CUB1
‑
EGF
‑
CUB2
‑
CCP1
‑
CCP2
‑
丝氨酸蛋白酶(NPL 3)。CUB1
‑
EGF
‑
CUB2结构域介导Clr和Cls之间的相互作用以形成Clr2s2四聚体(NPL 4)，以及介导Clr2s2和Clq之间的相互作用(NPL 5)。相反，Clr和Cls的CCP1
‑
CCP2
‑
丝氨酸蛋白酶结构域负责其各自底物的蛋白水解切割(NPL 6、NPL 7)。Clr2s2四聚体通过四聚体的CUB1
‑
EGF
‑
CUB2结构域内的六个结合位点与Clq中的六个茎相互作用(NPL 5)。
[0004]虽然功能正常的补体系统保护宿主免受病原体的侵害，但经典途径的失调或不适当激活会导致各种补体介导的病症，例如但不限于自身免疫性溶血性贫血(AIHA)、白塞氏病、大疱性天疱疮(BP)、免疫性血小板减少性紫癜(ITP)等。因此，抑制经典途径的过度或不受控制的激活可为患有此类病症的患者提供临床益处。
[0005]据报道，HI532是一种与Cls的β结构域结合的抗体，能够抑制Clr2s2与Clq的相互作用(NPL 8)。然而，这种抗体不能完全中和人血清的溶血活性，即使在血清与抗体温育24小时后，仍有30％的活性。
[0006]抗体是极具吸引力的药物，因为它们在血浆中稳定，对其靶标具有高度特异性，并且通常表现出良好的药代动力学特征。然而，由于它们的分子大小很大，治疗性抗体的剂量通常很高。在靶标大量存在的情况下，所需的抗体治疗剂量甚至更高。因此，改善抗体药代动力学、药效学和抗原结合特性的方法是减少与治疗性抗体相关的剂量和高生产成本的有吸引力的方法。
[0007]已经报道了以pH依赖性方式与抗原结合的抗体(以下也被称为“pH依赖性抗体”或“pH依赖性结合抗体”)使得单个抗体分子能够中和多个抗原分子(NPL 9、PTL 1)。pH依赖性抗体在血浆中的中性pH条件下与其抗原强烈结合，但在细胞内体中的酸性pH条件下与抗原解离。一旦与抗原解离，抗体就会通过FcRn受体循环回血浆，而解离的抗原在细胞的溶酶体内降解。然后再循环的抗体可以自由地再次结合并中和抗原分子，只要抗体仍在循环中，这个过程就会继续重复。
[0008]引用列表
[0009]专利文献
[0010][PTL 1]WO2009/125825
[0011]非专利文献
[0012][NPL 1]Wang et.al.Mol Cell.2016 Jul 7；63(1)：135
‑
45
[0013][NPL2]Mortensen et.al.Proc Natl Acad Sci U S A.2017 Jan 31；114(5)：986
‑
991
[0014][NPL 3]Gal et.al.Mol Immunol.2009 Sep；46(14)：2745
‑
52
[0015][NPL4]Almitairi et.al.Proc Natl Acad Sci U S A.2018 Jan 23；115(4)：768
‑
773
[0016][NPL 5]Bally et.al.J Biol Chem.2009Jul 17；284(29)：19340
‑8[0017][NPL 6]Rossi et.al.1998 J Biol Chem.1998 Jan 9；273(2)：1232
‑9[0018][NPL 7]Lacroix et.al.J Biol Chem.2001 Sep 28；276(39)：36233
‑
40
[0019][NPL 8]Tseng et.al.Mol Immunol.1997 Jun；34(8
‑
9)：671
‑9[0020][NPL 9]Igawa et.al.Nat Biotechnol.2010 Nov；28(11)：1203
‑7
技术实现思路

[0021]技术问题
[0022]本专利技术提供了抗补体成分抗体，例如抗Cls抗体，包含它们的药物组合物，以及使用它们的方法。
[0023]问题的解决方案
[0024]本专利技术提供了分离的抗体，其包含抗原结合区和抗体恒定区，具有置换功能和/或阻断功能并以pH依赖性方式与Cls结合，所述置换功能使得抗体结合Clqrs复合体并促进Clq从lqrs复合体的解离，所述阻断功能使得抗体结合Clr2s2并抑制Clq与Clr2s2的结合。
[0025]具体而言，本专利技术涉及以下内容：
[0026][1]分离的抗体，其包含抗原结合区和抗体恒定区，其中
[0027]所述抗体促进Clq从Clqrs复合体的解离和/或抑制Clq与Clr2s2的结合，其中，
[0028]在通过表面等离子共振测量抗体与人和/或食蟹猴Cls的结合活性的情况下，
[0029]i)中性pH范围内的解离常数(KD)值可以可靠地计算，而酸性pH范围内的KD值由于没有结合活性或结合活性相当低而不能可靠地计算，或
[0030]ii)在中性pH范围和酸性pH范围内的KD值都可以能够可靠地计算的前提下，酸性pH范围内的KD值与中性pH范围内的KD值的比值，即酸性KD/中性KD比大于10。
[0031][2][1]所述的抗体，其中结合活性通过表面等离子共振使用传感器芯片和运行缓冲液在37摄氏度下测量，每个抗体在50共振单位被人Igκ轻链捕获到所述传感器芯片上，所述运行缓冲液包含20mM ACES(N
‑
(2
‑
乙酰氨基)
‑2‑
氨基乙磺酸)、150mM NaCl、1.2mM CaCl2、1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.分离的抗体，其包含抗原结合区和抗体恒定区，其中所述抗体促进Clq从Clqrs复合体中解离和/或抑制Clq与Clr2s2结合，其中，在通过表面等离子共振测量抗体与人和/或食蟹猴C1s的结合活性的情况下，i)中性pH范围内的解离常数(KD)值可以可靠地计算，而酸性pH范围内的KD值由于没有结合活性或结合活性相当低而不能可靠地计算，或ii)在中性pH范围和酸性pH范围内的KD值都可以可靠地计算的前提下，酸性pH范围内的KD值与中性pH范围内的KD值的比值，即酸性KD/中性KD比大于10。2.权利要求1所述的抗体，其中结合活性通过表面等离子共振使用传感器芯片和运行缓冲液在37摄氏度下测量，每个抗体以50个共振单位被人Igκ轻链捕获到所述传感器芯片上，所述运行缓冲液包含20mMACES(N
‑
(2
‑
乙酰氨基)
‑2‑
氨基乙磺酸)、150mM NaCl、1.2mM CaCl2、1mg/mL牛血清白蛋白(BSA)、1mg/mL CM
‑
葡聚糖钠盐(CMD)、0.05％聚山梨醇酯20、0.005％NaN3。3.权利要求1或2所述的抗体，其中抗体的pI为小于9.00、小于8.90、小于8.80或8.78或更小、以及4.28或更大。4.权利要求1至3中任一项所述的抗体，其中，所述抗原结合区特异性地结合人C1s的CUB1
‑
EGF
‑
CUB2结构域。5.权利要求1至4中任一项所述的抗体，其中所述抗原结合区包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含HVR
‑
H1、HVR
‑
H2和HVR
‑
H3，所述HVR
‑
H1包含由AYAMN(SEQ ID No.1)组成的氨基酸序列，所述HVR
‑
H2包含由LIYGX1X2X3X4FYASWAX5X6(SEQ ID No.2)组成的氨基酸序列，所述HVR
‑
H3包含由GRSX7NYX8SX9FHL(SEQ ID No.3)组成的氨基酸序列，所述轻链可变区包含HVR
‑
L1、HVR
‑
L2和HVR
‑
L3，所述HVR
‑
L1包含由QAX
10
X
11
X
12
LHDKX
13
NLA(SEQ ID No.4)组成的氨基酸序列，所述HVR
‑
L2包含由X
14
ASX
15
X
16
ES(SEQ ID No.5)组成的氨基酸序列，所述HVR
‑
L3包含由X
17
GEFX
18
X
19
X
20
X
21
ADX
22
NX
23
(SEQ ID No.6)组成的氨基酸序列，其中X1至X
23
中的每一个选自天然存在的氨基酸。6.分离的抗C1s抗体，其包含重链可变区、轻链可变区和抗体恒定区，其中所述重链可变区包含HVR
‑
H1、HVR
‑
H2和HVR
‑
H3，所述HVR
‑
H1包含由AYAMN(SEQ ID No.1)组成的氨基酸序列，所述HVR
‑
H2包含由LIYGX1X2X3X4FYASWAX5X6(SEQ ID No.2)组成的氨基酸序列，所述HVR
‑
H3包含由GRSX7NYX8SX9FHL(SEQ ID No.3)组成的氨基酸序列，所述轻链可变区包含HVR
‑
L1、HVR
‑
L2和HVR
‑
L3，所述HVR
‑
L1包含由QAX
10
X
11
X
12
LHDKX
13
NLA(SEQ ID No.4)组成的氨基酸序列，所述HVR
‑
L2包含由X
14
ASX
15
X
16
ES(SEQ ID No.5)组成的氨基酸序列，所述HVR
‑
L3包含由X
17
GEFX
18
X
19
X
20
X
21
ADX
22
NX
23
(SEQ ID No.6)组成的氨基酸序列，其中X1至X
23
中的每一个选自天然存在的氨基酸。7.权利要求5或6所述的抗体，其中X1是Lys或Ser，X2是Gly或Lys，X3是His或Ser，X4是G1u或Thr，X5是Glu或Lys，X6是Glu或Gly，
X7是LVs或Val，X8是Asn或Val，X9是Asp或G1y，X
10
是Asn、Gln或Ser，X
11
是Gly或Gln，X
12
是I1e或Ser，X
13
是Lys或Arg，X
14
是Gly或Gln，X
15
是Gln或Thr，X
16
是Leu或Arg，X
17
是His或Gln，X
18
是Pro或Ser，X
19
是Cys或Tyr，X
20
是Glu或Ser，X
21
是Glu或Ser，X
22
是Cys或Leu，和X
23
是Gln或Thr。8.权利要求5至7中任一项所述的抗体，其中HVR
‑
H1包含由SEQ ID No.7组成的氨基酸序列，HVR
‑
H2包含由SEQ ID No.8至10组成的氨基酸序列中任一项，HVR
‑
H3包含由SEQ ID No.11至13组成的氨基酸序列中任一项，HVR
‑
L1包含由SEQ ID No.14至18组成的氨基酸序列中任一项，HVR
‑
L2包含由SEQ ID No.19至22组成的氨基酸序列中任一项，并且HVR
‑
L3包含由SEQ ID No.23至28组成的氨基酸序列中任一项。9.权利要求5至8中任一项所述的抗体，其中HVR
‑
H1、HVR
‑
H2、HVR
‑
H3、HVR
‑
L1、HVR
‑
L2和HVR
‑
L3的氨基酸序列的组合，选自由以下1)至8)组成的组；1)HVR
‑
H1，其包含由SEQ ID No.7组成的氨基酸序列，HVR
‑
H2，其包含由SEQ ID No.8组成的氨基酸序列，HVR
‑
H3，其包含由SEQ ID No.11组成的氨基酸序列，HVR
‑
L1，其包含由SEQ ID No.14组成的氨基酸序列，HVR
‑
L2，其包含由SEQ ID No.19组成的氨基酸序列，和HVR
‑
L3，其包含由SEQ ID No.23组成的氨基酸序列；2)HVR
‑
H1，其包含由SEQ ID No.7组成的氨基酸序列，HVR
‑
H2，其包含由SEQ ID No.9组成的氨基酸序列，HVR
‑
H3，其包含由SEQ ID No.12组成的氨基酸序列，HVR
‑
L1，其包含由SEQ ID No.14组成的氨基酸序列，HVR
‑
L2，其包含由SEQ ID No.19组成的氨基酸序列，和HVR
‑
L3，其包含由SEQ ID No.23组成的氨基酸序列；3)HVR
‑
H1，其包含由SEQ ID No.7组成的氨基酸序列，HVR
‑
H2，其包含由SEQ ID No.10组成的氨基酸序列，HVR
‑
H3，其包含由SEQ ID No.13组成的氨基酸序列，
HVR
‑
L1，其包含由SEQ ID No.15组成的氨基酸序列，HVR
‑
L2，其包含由SEQ ID No.20组成的氨基酸序列，和HVR
‑
L3，其包含由SEQ ID No.24组成的氨基酸序列；4)HVR
‑
H1，其包含由SEQ ID No.7组成的氨基酸序列，HVR
‑
H2，其包含由SEQ ID No.10组成的氨基酸序列，HVR
‑
H3，其包含由SEQ ID No.13组成的氨基酸序列，HVR
‑
L1，其包含由SEQ ID ...

【专利技术属性】
技术研发人员：古贺光，寺本礼仁，目次正一，角崎太郎，
申请(专利权)人：中外制药株式会社，
类型：发明
国别省市：